凌和平 王建榮 李良俊 陳學(xué)好 曹碚生

（1.揚州大學(xué)水生蔬菜研究室，江蘇揚州，225009；2.江蘇省宜興市丁蜀鎮(zhèn)人民政府）

荷葉生物堿的研究進展

凌和平1王建榮2李良俊1陳學(xué)好1曹碚生1

（1.揚州大學(xué)水生蔬菜研究室，江蘇揚州，225009；2.江蘇省宜興市丁蜀鎮(zhèn)人民政府）

綜述了荷葉生物堿的化學(xué)成分以及其提取、分離與鑒別方法，闡述了其化學(xué)成分與藥用價值的關(guān)系以及荷葉生物堿的應(yīng)用與研究進展。

荷葉 生物堿 功能 提取 分離 純化

1 荷葉生物堿的性質(zhì)及分類

生物堿是一類含氮的化合物，有似堿的性質(zhì)，具有光學(xué)特性，有特殊而顯著的生理作用，如抗腫瘤作用、鎮(zhèn)痛、麻醉、降壓、抗菌作用等。荷葉中含生物堿10多種，其中大部分已確定其結(jié)構(gòu)[5]，它們中大部分堿性都較弱，不能直接溶于水，能溶于氯仿、乙醚、乙醇、甲醇等有機溶劑；同時，易溶于酸性介質(zhì)，生成可溶性鹽[6]。1961年日本學(xué)者富田真雄等

率先從中國蓮的葉片中分離出了荷葉堿（Nuciferine）、蓮堿（Roemerine）、O-去甲基荷葉堿（O-Nornuciferine）3個單體成分[7]。至今已從荷葉中分離出眾多生物堿類化合物，根據(jù)母核結(jié)構(gòu)的不同，可將荷葉生物堿分為以下4類。

①單芐基異喹啉類：亞美（杏黃）罌粟堿、衡州烏藥堿、N-甲基異衡州烏藥堿、N-甲基衡州烏藥堿、O-去甲基衡州烏藥堿等；②阿樸啡類：荷葉堿、N-去甲基荷葉堿、O-去甲基荷葉堿、蓮堿、番荔枝堿、N-去甲基亞美罌粟堿、2-羧基-1-甲氧基阿樸啡等；③去氫阿樸啡類：去氫荷葉堿、去氫蓮堿等；④氧化阿樸啡類：鵝掌楸堿等。

2 荷葉生物堿的藥理作用

2.1 降脂減肥作用

荷葉中生物堿類化合物有降脂的功效。明代戴元禮的《秘傳證治要決》中對于荷葉減肥功效的記載為：“荷葉服之，令人瘦劣”。涂長春等[8]采用肥胖高脂血癥大鼠模型，觀察荷葉生物總堿對大鼠體重、體脂及血脂的影響，發(fā)現(xiàn)荷葉生物總堿明顯抑制肥胖大鼠的體重增長，影響其肥胖程度且可使肥胖高脂血癥大鼠血清總膽固醇（totalcholesterol，TC）、甘油三酯（triglyeride，TG）及動脈粥樣硬化指數(shù)（atherosclerotic index，AI）下降，而且在發(fā)揮減肥作用的同時，動物活動正常，無明顯腹瀉和抑制食欲的現(xiàn)象發(fā)生。但荷葉生物總堿減肥降脂藥理效應(yīng)緩慢，給藥3周后才出現(xiàn)較明顯的藥理作用。杜力軍等[9]以急性高脂血癥小鼠為整體模型觀察荷葉生物堿對TC及TG的影響，結(jié)果表明，荷葉生物堿部分對急性高脂血癥小鼠的TG有明顯的抑制作用。許臘英等[10]以荷葉提取物中的生物堿為指標(biāo)，通過對小白鼠的喂養(yǎng)試驗，亦證明其具有降脂作用。趙駿等[11]利用醇提取生物堿，酸水提取荷葉生物堿鹽，再分別對Ⅱ型糖尿病（NIDDM）大鼠模型進行降血脂試驗，以血清甘油三脂和膽固醇為指標(biāo)，比較其降血脂作用的差異，結(jié)果表明，荷葉生物堿鹽組的降血脂作用強于荷葉生物堿組。

2.2 抑菌作用

荷葉生物堿具有強烈的抗有絲分裂的作用，從而具有較強的抑菌作用，特別是對主要靠無性分裂繁殖的微生物的抑制效果最為顯著。唐裕芳等[12]研究發(fā)現(xiàn)，荷葉生物堿提取液對細菌、酵母菌和霉菌都有較強的抑制作用，在堿性環(huán)境下的抑菌作用較酸性環(huán)境顯著，對大多數(shù)細菌、酵母菌的最小抑菌濃度（Minimal inhibitory con-centration，MIC）不超過12%，長時間高溫處理和長時間中低溫處理對提取液抑菌活性影響較大，但高溫短時間處理對提取液抑菌活性影響不明顯。

2.3 抗病毒作用

柏田良樹[13]首次確認(rèn)荷葉中的芐基喹啉生物堿具有抗HIV活性，他們用正己烷、氯仿、95%乙醇依次提取，以抗HIV活性為指標(biāo)，對具有活性的95%乙醇提取物進行層析，分離出抗HIV的2種生物堿（1，2）及2種黃酮糖甙（4，5），并根據(jù)光譜數(shù)據(jù)確定了結(jié)構(gòu)。使H9細胞感染HIV-1，用1，2，4，5抑制病毒增殖，分別為0.8，0.8，2.0，4.0 μg/mL，對H9細胞的細胞毒性分別為20，100，100，100 g/mL，表明這些化合物對HIV的增殖有選擇性抑制作用。Kashiwada Y等[14]研究了荷葉中主要生物堿的抗HIV活力。結(jié)果表明，衡州烏藥堿、N-甲基異衡州烏藥堿、荷葉堿這3種荷葉生物堿可以進一步發(fā)展成為抗HIV的新藥物。Boustie等[15]研究了18種阿樸啡類生物堿抗人脊髓灰質(zhì)炎病毒的構(gòu)效關(guān)系，發(fā)現(xiàn)荷葉堿在體外具有顯著抗脊髓灰質(zhì)炎病毒的活性。

2.4 其他作用

Chulia[16]研究了蓮堿、番荔枝堿和去氫繞袂堿對去甲腎上腺素和KCl誘導(dǎo)的小鼠肌肉收縮的弛緩效果，結(jié)果揭示，這3種生物堿所產(chǎn)生的弛緩效果可能是由于通過電壓運行信道阻斷Ca2+的跨膜運動，從而阻止α-腎上腺素受體與受體調(diào)控性通道的連接的緣故。Bhattacharya S K等[17]研究發(fā)現(xiàn)，荷葉堿能誘導(dǎo)僵住癥，抑制自發(fā)性運動、條件躲避反應(yīng)等。Polc等[18]通過靜脈注射研究了荷葉堿對貓脊髓活性的影響，結(jié)果表明，荷葉堿對阻抑單突觸前根的反射作用具有劑量依賴性，而對阻抑多突觸前根的反射作用無劑量依賴性，荷葉堿對脊髓的這種作用與海人酸具有拮抗效應(yīng)，但與N-甲基-D-天冬氨酸無拮抗作用有關(guān)。

3 荷葉生物堿成分的提取、分離與測定

生物堿是一類具有生理活性的物質(zhì)，是許多藥用植物的有效成分之一。如何從天然產(chǎn)物中提取、分離與鑒別生物堿引起了人們的廣泛關(guān)注，其提取、分離與鑒別的方法也在不斷的改進和發(fā)展中。

3.1 荷葉生物堿的提取與分離

因荷葉生物堿堿性較弱，不能直接溶解于水，但能與酸作用生成鹽溶于水，故荷葉堿可用偏酸性的水溶液。正交試驗結(jié)果得出，影響荷葉生物堿提取效果各因素的主次順序依次為pH值、提取溫度、提取時間、固液比。對不同溶媒及其濃度對提取率的影響研究發(fā)現(xiàn)，加熱回流法比超聲提取產(chǎn)量高，用酸水提取法得到的生物堿的含量較高，而用95%的乙醇提取得到的生物堿純度較高，綜合考慮，陳海光等[19]，提出了荷葉生物堿水提的最優(yōu)工藝條件為提取水量為30倍，提取溫度90℃，提取時間1.5 h，提取液pH值為2～3；或采用0.5%鹽酸，加熱回流2.0 h，提取2次即可。荷葉生物堿目前國內(nèi)外都未有標(biāo)準(zhǔn)物，但仍可通過比較其吸光度來確定其較佳提取條件。趙駿等[20]建議用乙醇提取荷葉中的生物堿，以提高生物堿的純度，并且乙醇的濃度越高，提取量也相應(yīng)越多。為了解決有機溶劑萃取時目標(biāo)成分的大量損失、終端產(chǎn)品含雜質(zhì)較多等難題，梁鋒等[21]建立了用水/油（W/O）型乳狀液膜分離提取荷葉中3種生物堿（N-去甲基荷葉堿、O-去甲基荷葉堿和荷葉堿）的方法，通過對遷移時間、表面活性劑Span80用量、載體D2EHPA濃度、油內(nèi)比、乳水比和內(nèi)水相鹽酸濃度的優(yōu)化，獲得了高效的液膜體系。

經(jīng)過溶媒提取后的荷葉生物堿粗溶液，除含生物堿及鹽類之外還存在大量其他脂溶性或水溶性雜質(zhì)，需要先將生物堿成分從中分離出來，然后進行純化處理。目前在荷葉生物堿的分離純化中使用較多的方法是有機溶劑萃取[22～23]、色譜法[24]和樹脂吸附法[25～26]3種。

3.2 荷葉生物堿的測定

荷葉生物堿的測定的方法主要是分光光度法，王偉等[27]采用分光光度法，以荷葉堿為對照，嗅甲酚綠為顯色劑，在415 nm波長下進行測定，結(jié)果顯示吸光度與含量線性關(guān)系良好（=0.9996），回收率為98.82%，RSD為2.94%。樣品在5 h內(nèi)測得穩(wěn)定RSD為1.83%，說明該方法準(zhǔn)確、可靠。也可用薄層掃描法測定，采用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠GF254薄層板，氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（體積比為30∶40∶20∶10）為展開劑，檢測波長為272 nm。結(jié)果顯示荷葉堿在0.5～5.0 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，平均回收率為97.4%，RSD=3.83%（=5）[28]。薄層色譜鑒別懈皮素、荷葉堿的方法可有效控制荷葉藥材量。

4 荷葉產(chǎn)品開發(fā)現(xiàn)狀

進入21世紀(jì)，人們開始崇尚回歸自然，健康成了生活的主題，而以天然植物功能成分制成的藥品和保健品便成為了人類防治疾病的首選，因此以荷葉生物堿制成的保健品和藥品在未來有著廣闊的市場前景。荷葉的臨床應(yīng)用較多的是以復(fù)方的形式用于減肥降脂，已有的復(fù)方有輕健膠囊、降脂中藥煎劑、荷葉合劑、荷葉水煎劑、祛脂湯、降脂Ⅰ號膠囊、紅荷散等，主要用于防治冠心病、動脈粥樣硬化及高脂血癥。近20 a來，以荷葉為主要成分的降脂減肥食療制品的應(yīng)用越來越廣泛，已有各種以荷葉為主要成分的各類減肥茶上市，主要有寧紅減肥茶、三葉減肥茶、減肥健身茶、天雁減肥茶、降脂減肥茶、烏龍減肥茶、三花減肥茶、纖美減肥茶、問荊茶等，主要用于減肥及冠心病、高血壓病、糖尿病、腦血管疾病的預(yù)防。臨床應(yīng)用證明，肥胖的人經(jīng)常用洗凈的鮮荷葉煮粥食用，減肥療效顯著。余以剛等[29]利用荷葉含有多種香氣成分及風(fēng)味物質(zhì)的特點，以荷葉為主要原料，配以綠茶、山楂、甘草、菊花等原料研制出新型保健袋泡茶，動物試驗表明該方法有減肥和調(diào)節(jié)血脂功能。

5 影響荷葉中生物堿合成的因素

了解了荷葉生物堿的含量對提高荷葉藥用價值以及更好的開發(fā)和利用荷葉資源有著重要意義。許臘英等[30]研究發(fā)現(xiàn)：湖北地區(qū)7月份荷葉所含生物堿含量最高，藥力雄厚，最適宜采集，符合葉類藥材采集的一般規(guī)律。而蓮藕成熟后的荷葉中未檢測出生物堿。趙駿等[31]研究不同時間和不同產(chǎn)地荷葉生物堿的含量差異時發(fā)現(xiàn)：不同荷葉產(chǎn)區(qū)同期的生物堿含量存在差異，浙江8月份所產(chǎn)荷葉的生物堿含量最高。由此可見，同一產(chǎn)區(qū)的不同月份、不同產(chǎn)區(qū)的同一月份的荷葉生物堿的含量都存在著差異，荷葉生物堿的含量可能與品種、氣候、土壤、栽培管理等因素有關(guān)。

6 展望

荷葉在我國傳統(tǒng)中藥中應(yīng)用歷史悠久，在藥、食兩方面的應(yīng)用有著更加廣闊的前景。我國的荷葉資源雖然十分的豐富，但被利用的程度卻很低?，F(xiàn)有的研究大多集中在荷葉作為中草藥煎劑或其他保健品的輔料、荷葉產(chǎn)品的初制開發(fā)利用以及探索荷葉中的化學(xué)成分及其含量、荷葉水提物的藥理活性、實驗室條件下分離提取荷葉中的生物堿類、黃酮類物質(zhì)的方法等，其研究的深度和廣度都遠遠不夠。在荷葉功能成分的分離純化鑒定技術(shù)、品質(zhì)檢測技術(shù)、規(guī)?；咝е苽涔に嚰夹g(shù)、荷葉提取物降脂減肥功能成分的毒理與藥理效能、降脂減肥產(chǎn)品研究開發(fā)等方面還有待進一步研究。因此，如何利用現(xiàn)有豐富的荷葉資源，進一步開發(fā)新的有效的荷葉功能產(chǎn)品以及藥理活性產(chǎn)品，有待廣大科研人員的進一步努力。

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10.3865/j.issn.1001-3547.2009.16.004

凌和平，男，碩士研究生，研究方向為水生蔬菜生理與栽培

李良俊，通信作者，電話：13013748991

2009-07-30