王雅娟 張 敏

【摘要】 2008年5月筆者從患者分泌物膿汁中培養(yǎng)分離出1株觸酶試驗陰性的金黃色葡萄球菌。通過細菌學鑒定,革蘭氏染色、顯微鏡下細菌形態(tài)學檢查和重要的觸酶試驗及血漿凝固酶試驗,及若干生化試驗及生化鑒定編碼對其確認,并對其做藥敏試驗,以指導臨床正確用藥,達到治愈的目的。同時進一步認識細菌本身某些因素的變異性。

【關(guān)鍵詞】 金黃色葡萄球菌;觸酶試驗;生化鑒定

1 病例資料

門診患者,女性,18歲,因嘴角裂口產(chǎn)生膿性分泌物并形成厚膜,而疼痛腫脹、功能受限1月余。在此期間,曾用頭孢曲松納、慶大霉素、青霉素等抗菌素抗炎,未見效果。檢查體溫正常;實驗室檢查:白細胞 11.8×10.9/L , 中性分葉粒細胞69%,淋巴細胞26% ,單核細胞 3%; 嗜酸性粒細胞2%;紅細胞4.4×1012/L,血紅蛋白131 g/L,血小板192×109/L。后經(jīng)藥敏結(jié)果指導,用紅霉素治療痊愈。

2 細菌學鑒定

2.1 取患者患處膿性分泌物,分別接種于肉浸湯液體培養(yǎng)基、含10%氯化鈉的高鹽培養(yǎng)基及固體培養(yǎng)基(普通培養(yǎng)基、含血液平板、), 5% 二氧化碳35°C 24 h后,生長情況:固體培養(yǎng)基上生長出光滑、濕潤、圓型、凸起、不透明、有光澤、直徑約1～2 cm的白色菌落;含血液培養(yǎng)基平板上所生長的菌落周圍,有明顯透明溶血環(huán);肉浸湯液體培養(yǎng)基中迅速生長、呈均勻混濁,管底有少量沉淀、搖動時容易消散,不產(chǎn)生色素。培養(yǎng)出的細菌極易被鹼性染料著色,即革蘭染色呈陽性。顯微鏡下菌體為圓形,并以單、雙、形似葡萄狀不規(guī)則排列;液體培養(yǎng)基中,因菌體有時可作平面分裂有部分呈短鏈存在。無動力、無芽胞、無莢膜。菌體較小、大小比較均勻一致。

2.2 與鏈球菌鑒別 鏈球菌經(jīng)相同條件下培養(yǎng),固體培養(yǎng)基上菌落形態(tài)為灰白色,半透明,直徑約0.5～0.75 cm,圓形凸起小菌落,溶血現(xiàn)象不定;在液體培養(yǎng)基中,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長。在顯微境下革蘭氏染色陽性,菌體為鏈狀排列,長短不一,長者可達20～30個菌細胞組成。菌體為圓形或卵圓形。

2.3 與微球菌鑒別 微球菌菌落在固體培養(yǎng)基上略小于葡萄菌菌落,為圓形突起、不透明、黃色或粉紅色,有粘性,并不易混懸于鹽水中,在液體培養(yǎng)基中均勻混濁生長、表面有菌膜。鏡下革蘭氏染色陽性,菌體較葡萄球菌稍大,四聯(lián)排列為主,或呈不規(guī)則的團塊,膿汁中可產(chǎn)生莢膜。

3 觸酶試驗

挑取菌落于潔凈載玻片上(避免混入培養(yǎng)基),滴加新鮮配制的3%過氧化氫試劑一滴于菌落上并仔細觀察結(jié)果,菌落上未出現(xiàn)氣泡。同時以金黃色葡萄球菌ATCC25923為陽性對照,以糞腸球菌ATCC29212為陰性對照,判定此株金黃色葡萄球菌觸酶試驗為陰性。

4 生化試驗

4.1 此菌血漿凝固酶試驗陽性;桿菌肽敏感試驗陽性;呋喃唑酮敏感試驗陰性;發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸試驗陽性;能分解果糖、半乳糖、甘露醇、核糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、甘露糖、松二糖、藻糖產(chǎn)酸,不產(chǎn)生吲哚,甲基紅試驗陽性,VP試驗陽性;金黃色葡萄球菌抗體膠乳凝集試驗陽性;其代謝方式為呼吸兼發(fā)酵,對1.6 ul/ml新生霉素耐藥,可使美藍、石蕊等染料還原為無色,能分解尿素而產(chǎn)氨,磷酸酶試驗陽性。明膠液化試驗陽性,硝酸鹽還原試驗陽性,32STAPH 35°C孵育24 h,經(jīng)ATB儀器鑒定,生物編碼為267312610,其可信度為99.3%,鑒定結(jié)果為金黃色葡萄球菌。

4.2 與鏈球菌鑒別 鏈球菌血漿凝固酶試驗為陰性。

4.3 與微球菌鑒別 發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸試驗陰性;桿菌肽敏感試驗陰性;呋喃唑酮敏感試驗陽性。

5 藥敏試驗:采用Kirby睟auer法

結(jié)果:此菌對青霉素耐藥、對克林霉素耐藥、對慶大霉素耐藥;對萬古霉素敏感、對苯唑青霉素敏感、對紅霉素敏感、對氧氟沙星敏感、對復方新諾明敏感、對呋喃妥因敏感、對頭孢唑林敏感。

6 小結(jié)

金黃色葡萄球菌為傷口化膿感染常見菌群。典型的金黃色葡萄球菌為:革蘭氏染色陽性,在革蘭陽性球菌中菌體比較小,常單個或呈雙存在或成短鏈、不規(guī)則葡萄狀排列。最適pH為7.4,其菌落形態(tài)在普通平板上,經(jīng)35°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h為光滑、濕潤、白色菌落,菌落周圍有透明溶血環(huán),產(chǎn)生胞外酶也就是血漿凝固酶試驗陽性,其觸酶試驗陽性。據(jù)上所述特征,即可鑒定金黃色葡萄球菌。而此次分離出的金黃色葡萄球菌其觸酶試驗為陰性。在實際工作中較為少見,報道也很少。

參 考 文 獻

[1] 陶月, 張之烽, 寧明哲,等. 觸酶陰性的金黃色葡萄球菌一例. 臨床檢驗雜志,2008, 26(3) :172.

[2] 丁振若, 于文彬, 蘇明權(quán),等. 現(xiàn)代檢驗醫(yī)學.人民軍醫(yī)出版社, 2007: 11021110.