丁云暉 郭圣榮

上海交通大學(xué)藥學(xué)院 （上海 200030）

高效液相色譜法測定鹽酸度洛西汀中1-萘酚的含量

丁云暉 郭圣榮

上海交通大學(xué)藥學(xué)院 （上海 200030）

建立一種適用于測定鹽酸度洛西汀中1-萘酚的測定方法。色譜柱為Agilent C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；磷酸鹽緩沖溶液（pH=5.8）-乙腈（63∶37）為流動相；檢測波長為 230 nm；柱溫為 30℃；流速1.0mL/min；進(jìn)樣體積為10μL。樣品中鹽酸度洛西汀和1-萘酚分離度良好，1-萘酚的最低檢測限為0.132 ng。所建立的方法簡便、快速，可準(zhǔn)確地分離鹽酸度洛西汀中的1-萘酚，并能有效監(jiān)控產(chǎn)品中的主要有關(guān)物質(zhì)。

鹽酸度洛西汀 1-萘酚 有關(guān)物質(zhì) 高效液相色譜法

鹽酸度洛西汀是一種安全、有效和優(yōu)先選用的抗抑郁藥，化學(xué)名為(S)-(+)-N-甲基-3-（1-萘氧基）-3-（2-噻吩基）-丙胺鹽酸鹽，在酸性環(huán)境中不穩(wěn)定、易分解而產(chǎn)生降解產(chǎn)物。目前采用高效液相色譜法（HPLC）檢測鹽酸度洛西汀原料或制劑的含量和有關(guān)物質(zhì)[1-2]，其中1-萘酚是鹽酸度洛西汀中的主要雜質(zhì)，由于1-萘酚具有生理毒性，對其進(jìn)行分析檢測和控制是必要的。目前檢測1-萘酚的一般方法有光譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法和示差脈沖伏安法等[3-7]。

本測試對鹽酸度洛西汀進(jìn)行相關(guān)研究，建立了高效、適用的HPLC分析方法，用于測定藥品中1-萘酚的含量，為有效監(jiān)控產(chǎn)品中的有關(guān)物質(zhì)提供了較好的分析檢測手段。

1 儀器與試劑

全自動高效液相色譜儀：Aglient1200型，包括四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、DAD檢測器、Agilent色譜工作站；

電子天平：梅特勒AE240；

乙腈：色譜純；

水：重蒸水；

其他試劑分析純；

鹽酸度洛西汀：對照品供含量測定用，由上海萬代制藥有限公司提供，批號為060501；

1-萘酚：對照品供含量測定用，國藥化試，批號為200803；

鹽酸度洛西汀片：由上海中西制藥有限公司研究所提供，批號 S091201、S091202、S091203，規(guī)格為每片含度洛西汀30mg。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為AgilentC18柱（5μm，4.6mm×250 mm）；磷酸鹽緩沖溶液（pH=5.8）－乙腈（63∶37）為流動相；檢測波長為230 nm；柱溫為30℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣體積為10μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液

分別精密稱取鹽酸度洛西汀對照品、1-萘酚對照品適量，加流動相制成鹽酸度洛西汀濃度為35 μg/mL和1-萘酚濃度為0.2μg/mL的混合溶液即得。

2.2.2 供試品溶液和自身對照溶液

精密稱取鹽酸度洛西汀腸溶片的細(xì)粉適量（含量約相當(dāng)于鹽酸度洛西汀33.6mg），置100mL量瓶中，加流動相適量，振搖使鹽酸度洛西汀溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾后，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取1mL上述供試品溶液置100mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為自身對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性

取2.2.1對照品溶液，注入液相色譜儀，鹽酸度洛西汀和1-萘酚的相對保留時間分別為4.443和11.844，理論塔板數(shù)分別為6 100與12 000，兩者能達(dá)到有效分離。

2.4 專屬性

取鹽酸度洛西汀對照品約35mg共6份，分別依次加入20%過氧化氫溶液適量，80℃水浴1 h，放冷，用流動相稀釋后作為氧化降解樣品溶液；加入0.1 mol/L鹽酸溶液適量，80℃水浴加熱15min，放冷，調(diào)節(jié)pH至中性，用流動相稀釋后作為酸降解樣品溶液；加入重蒸水50mL，80℃水浴2 h，放冷，用流動相稀釋后作為水降解樣品溶液；加入1mol/L氫氧化鈉溶液適量，80℃水浴2 h，放冷，調(diào)節(jié)pH至中性，用流動相稀釋后作為堿降解樣品溶液；放置80℃烘箱內(nèi)7 d，用流動相稀釋后作為高溫降解樣品溶液；放置于光照強(qiáng)度1 200 000 Lx下7 d，用流動相稀釋后作為強(qiáng)光照降解樣品溶液。取上述降解樣品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1～圖6，可見此色譜條件可檢測出降解產(chǎn)物，降解峰和主成分峰能有效分離。

2.5 線性

分別精密稱取鹽酸度洛西汀對照品和1-萘酚對照品適量，以流動相制成分別含鹽酸度洛西汀8.5、16.9、25.1、33.9、41.6、50.2、58.2 μg/mL 和含 1- 萘酚0.066 7、0.101、0.133、0.172、0.202、0.233、0.267 μg/mL的混合溶液，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，試驗結(jié)果見表1。

2.6 檢測限

取流動相注入液相色譜儀，噪音值為0.033mAU。精密稱取1-萘酚對照品11.0mg，用流動相稀釋至1.1 μg/mL，作為供試品溶液（1），注入液相色譜儀，溶液中的1-萘酚的信號值為8.7mAU。將供試品溶液（1）依次稀釋，注入液相色譜儀，當(dāng)信噪比為3∶1時，測得本方法對1-萘酚的檢測限為0.132 ng。

2.7 校正因子

取2.5項下溶液，依次注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測量鹽酸度洛西汀和1-萘酚的峰面積，按下式計算校正因子（f），結(jié)果見表2。

校正因子（f）＝（As/Cs）/（Ar/Cr）

式中：As為1-萘酚的峰面積；

Ar為鹽酸度洛西汀的峰面積；

表1 線性試驗測定結(jié)果匯總表

Cs為1-萘酚的濃度；Cr為鹽酸度洛西汀的濃度。

表2 校正因子測定結(jié)果匯總表

2.8 有關(guān)物質(zhì)的測定

取2.2.2自身對照溶液10μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%。再精密量取供試品溶液與自身對照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時間2倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，計算雜質(zhì)峰峰面積占對照溶液主峰峰面積的百分比。

2.9 樣品的測定

取鹽酸度洛西汀腸溶片（批號S091201、S091202、S091203），分別按本文方法測定1-萘酚和有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表3。

表3 三批樣品1-萘酚和有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果匯總表

3 討論

（1）鹽酸度洛西汀在氧化、強(qiáng)酸、濕熱條件下容易降解；在強(qiáng)堿、高溫、光照條件下相對比較穩(wěn)定，所有試驗產(chǎn)生的降解產(chǎn)物與主峰的分離度均大于1.5。

（2）本色譜條件系統(tǒng)適用性、精密度、專屬性、線性、溶液穩(wěn)定性均良好，可用于測定鹽酸度洛西汀原料和制劑中的1-萘酚，并能有效監(jiān)控制劑中的主要有關(guān)物質(zhì)。

（3）鹽酸度洛西汀最大的降解產(chǎn)物是1-萘酚，1-萘酚是鹽酸度洛西汀醚解后的產(chǎn)物，該降解受酸和濕熱等條件催化。

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Determ ination of 1-Naphthol in Duloxetine Hydrochloride by HPLC

Ding Yunhui Guo Shengrong

To establish an HPLC method for determination of 1-naphthol in duloxetine hydrochloride.HPLC method was performed with Agilent C18 column(5 μm,4.6mm×250mm),230 nm detection wavelength，and the mobile phase consisting of phosphate buffered solution（pH=5.8）-acetonitrile（63∶37）.The column temperature was 30℃.The flow rate was 1.0 mL/min.Duloxetine hydrochloride was separated with its impurities thoroughly;the LOD was 0.132 ng for 1-naphthol test．The method was simple，rapid，specific and accurate.It can be used to determine 1-naphthol in duloxetine hydrochloride and its related substances.

Duloxetine hydrochloride;1-naphthol;Related substances;HPLC

TQ 243.1+3

丁云暉 女 1977年生 上海交通大學(xué)工程碩士 從事藥物科研開發(fā)工作

2010年3月