動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理對香菇多糖得率的影響

姜 穎，涂宗財(cái)*，陳 媛，王 強(qiáng)，李 志，尹月斌

(南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047)

動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理對香菇多糖得率的影響

姜 穎，涂宗財(cái)*，陳 媛，王 強(qiáng)，李 志，尹月斌

(南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047)

為拓展動(dòng)態(tài)超高壓微射流均質(zhì)技術(shù)的應(yīng)用，采用該技術(shù)對香菇子實(shí)體進(jìn)行預(yù)處理，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn)預(yù)處理?xiàng)l件優(yōu)化，通過實(shí)驗(yàn)組和對照組的對比分析，研究此預(yù)處理方法對香菇多糖得率的影響。結(jié)果表明：動(dòng)態(tài)超高壓微射流在140MPa、料液比1:60(g/mL)條件下多糖得率達(dá)到最高值6.755%。與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組香菇多糖提取效率改善顯著。

動(dòng)態(tài)超高壓微射流；香菇多糖；預(yù)處理；提取

香菇多糖，是一種從香菇中提取的β-(1→3)-D-葡聚糖，是可激活人體免疫系統(tǒng)的、具有顯著抗腫瘤作用的生物活性大分子[1]。最早是由日本學(xué)者Chihara等[2]通過乙醇和正十六烷基三甲基氫氧化銨分級沉淀，及醋酸分步溶解，DEAE樹脂純化而得到的。通常其提取方法可分為兩大類，一類是溶劑(水、稀堿、聚乙二醇)浸提；另一類是使用超聲和超高壓輔助提取[3]。

國內(nèi)動(dòng)態(tài)超高壓微射流技術(shù)較多運(yùn)用于生物大分子的改性研究中，其對卵清蛋白、花生球蛋白的結(jié)構(gòu)及功能性質(zhì)的影響已有研究[4-5]；Liu等[6-7]研究該處理對多酚氧化酶的影響。國外Tunick等[8]研究其對干酪微結(jié)構(gòu)的影響；Lagoueyte等[9]研究微射流均質(zhì)技術(shù)對黃原膠功能性質(zhì)的影響；Dalgleish等[10]研究經(jīng)超高壓微射流均質(zhì)后牛奶脂肪顆粒及酪蛋白的變化情況。關(guān)于動(dòng)態(tài)超高壓微射流對有效成分提取的影響，鮮有報(bào)道。涂宗財(cái)?shù)萚11]研究動(dòng)態(tài)超高壓微射流處理對玉米花粉破壁效果和多糖得率的影響。本研究以此技術(shù)作為預(yù)處理方法，考察其對香菇多糖提取的影響，擬為此技術(shù)的應(yīng)用開辟新的方向。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

干香菇子實(shí)體(干燥粉碎后過100目篩備用) 市購；苯酚、無水乙醇、乙醚、丙酮 天津市大茂化學(xué)試劑廠；濃硫酸 上海試劑化學(xué)有限公司；無水葡萄糖 廣東汕頭市西隴化工廠。以上試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

M-110EH型微射流均質(zhì)機(jī) 美國Microfluidics公司；FreeZone 4.5 Litter真空冷凍干燥機(jī) 美國Labconco公司；TDL-5-A臺式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；T6新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；小型均質(zhì)機(jī) 上海東華高壓均質(zhì)機(jī)廠。

1.3 方法

1.3.1 預(yù)處理方法的建立

實(shí)驗(yàn)組預(yù)處理方法：5g香菇原料分散于設(shè)定比例的水中，經(jīng)30MPa高壓均質(zhì)5min后，在預(yù)設(shè)壓力及次數(shù)條件下，過M-110EH型微射流均質(zhì)機(jī)，備用。

對照組預(yù)處理方法：5g香菇原料分散于設(shè)定比例的水中，經(jīng)30MPa高壓均質(zhì)5min，備用。

1.3.2 香菇多糖的提取[2,12-13]

樣品預(yù)處理后，在一定溫度下，水浴提取一定時(shí)間，離心(4000r/min、10min、20℃)得上清液；Sevag法[14]脫蛋白，流水透析(8000～14000D)2d，蒸餾水透析1d；45℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮；4℃無水乙醇沉淀2h，并使乙醇最終體積分?jǐn)?shù)達(dá)到75%；離心(4000r/min、10min、20℃)得沉淀；45℃水浴去離子水復(fù)溶沉淀；離心(10000r/min、0.5h、20℃)取清液；丙酮逐滴加入，至丙酮與上清液終體積比1:1；離心(4000r/min、10min、20℃)得沉淀；無水乙醇洗滌沉淀兩次，乙醚洗一次；冷凍干燥得香菇多糖。

1.3.3 香菇多糖得率的測定

以D-葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)，采用苯酚-硫酸法測定多糖含量[15]?；貧w方程為：A=0.0076C-0.0105，R2=0.9993。

1.3.4 微射流處理壓力對香菇多糖得率的影響

動(dòng)態(tài)超高壓微射流處理壓力的變化范圍60～160MPa，變化梯度為20MPa，其他條件為料液比1:60 (g/mL)、微射流處理次數(shù)2次、提取時(shí)間2h、提取溫度90℃。提取結(jié)束后考察預(yù)處理壓力對香菇多糖得率的影響。

1.3.5 微射流處理次數(shù)對香菇多糖得率的影響

處理次數(shù)的變化范圍1～5次，變化梯度為1次，其他條件處理壓力140MPa、料液比1:60(g/mL)、提取時(shí)間2h、提取溫度90℃。提取結(jié)束后考察預(yù)處理次數(shù)對香菇多糖得率的影響。

1.3.6 實(shí)驗(yàn)組與對照組的比較

在不同時(shí)間段內(nèi)，不同料液比以及不同溫度下，以香菇多糖得率為響應(yīng)值，實(shí)驗(yàn)組與對照組比較分析，證明實(shí)驗(yàn)組預(yù)處理方式對提高多糖得率的效果顯著。

1.3.7 動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理提取香菇多糖條件優(yōu)化

為評價(jià)動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理對香菇多糖提取效率的影響，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取微射流處理壓力(A)、料液比(B)、提取溫度(C)三因素三水平(表1)，且不考慮各因素之間的交互作用，以香菇多糖得率為響應(yīng)值，采用正交試驗(yàn)助手軟件(Sharetop軟件工作室)做數(shù)據(jù)分析。

表1 動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理提取香菇多糖正交試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels of orthogonal experiments

1.3.8 數(shù)據(jù)分析

所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次，采用SPSS 13.0數(shù)據(jù)處理軟件，各組數(shù)據(jù)結(jié)果以x±s表示，并進(jìn)行單因素方差分析，LSD兩兩比較，P＜0.05為差異具有顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理壓力對香菇多糖得率的影響

實(shí)驗(yàn)組樣品在微射流均質(zhì)機(jī)反應(yīng)腔中受到強(qiáng)烈剪切、高速撞擊、壓力瞬時(shí)釋放、渦旋等綜合作用[6-7]，導(dǎo)致樣品顆粒在水中更均勻地分散、混合和微粒化；并使樣品細(xì)胞破碎度增大，溶劑利用細(xì)胞的通透性或滲透性，更易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，從而和細(xì)胞內(nèi)的有效成分快速達(dá)到溶解平衡，更利于提取的進(jìn)行[11]。不同預(yù)處理壓力(60～160MPa)對香菇多糖得率的影響如圖1所示。

圖1 動(dòng)態(tài)超高壓微射流處理壓力對香菇多糖得率的影響Fig.1 Effect of microfluidization pressure on extraction rate of lentinan

由圖1可知，實(shí)驗(yàn)組隨著預(yù)處理壓力的增大，香菇多糖得率呈現(xiàn)遞增趨勢。處理壓力從60MPa逐漸提高到160MPa，多糖得率由(5.65±0.17)%增高到(7.18± 0.15)%。當(dāng)壓力增加到140MPa后，得率增幅較小，逐漸趨于平衡。單因素方差分析顯示在60、80、100、120、140MPa下，壓力對多糖得率具有顯著性影響(P＜0.01)。以上結(jié)果說明，均質(zhì)壓力越高，可能細(xì)胞破碎程度越高，更利于多糖的溶出，得率有所提高。

2.2 動(dòng)態(tài)超高壓微射流處理次數(shù)對香菇多糖得率的影響

M-110EH型微射流均質(zhì)機(jī)最高操作壓力為172MPa，樣液最大流速為450mL/min，在此系統(tǒng)下，考察微射流處理次數(shù)對多糖得率的影響。

圖2 動(dòng)態(tài)超高壓微射流處理次數(shù)對香菇多糖得率的影響Fig.2 Effect of microfluidization pretreatment repeat number on extraction rate of lentinan

如圖2所示，在1～5次不同處理次數(shù)下，經(jīng)微射流處理2次，多糖得率最大，可達(dá)到(7.75±0.20)%；處理一次，樣液在反應(yīng)腔中受力不充分，得率僅為(6.49±0.14)%；當(dāng)處理次數(shù)超過2次后，樣液有一定程度的損失，從而造成多糖得率的下降，單因素方差分析表明處理次數(shù)對多糖得率具有顯著性影響(P＜0.01)。

2.3 實(shí)驗(yàn)組與對照組不同提取時(shí)間多糖得率的比較

在傳統(tǒng)的溶劑提取過程中，時(shí)間對提取結(jié)果的影響較大，有效成分的溶出是一個(gè)平衡的過程，需要一定的時(shí)間。兩組實(shí)驗(yàn)的比較結(jié)果如圖3所示。

圖3 兩組實(shí)驗(yàn)不同時(shí)間段內(nèi)的比較結(jié)果Fig.3 Comparison of extraction rates of lentinan in two groups with different pretreatment time

由圖3可見，實(shí)驗(yàn)組在1～3h內(nèi)，多糖得率基本沒有變化，僅從1h的(6.76±0.10)%增加到3h時(shí)的(7.02± 0.16)%，增幅較小；而對照組多糖得率隨時(shí)間的延長，有明顯提高。1h為(3.27±0.21)%，3h時(shí)為(5.56±0.21)%，增加了2.29%；且實(shí)驗(yàn)組在1h時(shí)的得率就已高出對照組在3h時(shí)的得率1.2%。其原因在于，實(shí)驗(yàn)組經(jīng)微射流預(yù)處理后，細(xì)胞破碎程度大，再加上瞬時(shí)高壓的作用，溶劑能夠在極短的時(shí)間滲透到細(xì)胞內(nèi)部，多糖溶解快速達(dá)到平衡，后續(xù)延長提取時(shí)間也不能明顯增加多糖得率。不同時(shí)間條件下，實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，有顯著差異(P＜0.05)。因此，微射流預(yù)處理樣液，省時(shí)高效，對提高香菇多糖得率效果顯著。

2.4 實(shí)驗(yàn)組與對照組不同料液比多糖得率的比較

液體的體積，會影響固體微粒從固體主體向液體主體的傳質(zhì)過程。但料液比過大，后續(xù)濃縮步驟耗能、耗時(shí)過多。兩組實(shí)驗(yàn)的比較結(jié)果如圖4所示。

圖4 兩組實(shí)驗(yàn)不同料液比的比較結(jié)果Fig.4 Comparison of extraction rates of lentinan in two groups with different material-liquid ratios

圖4 所示，實(shí)驗(yàn)組多糖得率隨著料液比的增大，呈先增大后遞減趨勢，當(dāng)料液比為1:60(g/mL)時(shí)達(dá)到最大得率(7.43±0.18)%。對照組得率先顯著增大后逐漸趨于平緩。料液比在1:40～1:50(g/mL)范圍內(nèi)，得率增幅較大，平均得率增大1.3%。原因在于對照組多糖得率依靠液體體積效能明顯，在較低液體量時(shí)，提取不能充分進(jìn)行。而實(shí)驗(yàn)組，在引入微射流均質(zhì)預(yù)處理的高撞擊、剪切、瞬時(shí)壓力降等作用后，增大了固液界面的湍流程度，同時(shí)瞬時(shí)壓力作用促進(jìn)了傳質(zhì)的過程，從而在較低液體量時(shí)，也能提取相對充分。實(shí)驗(yàn)組得率有所降低，是因?yàn)橐后w量過大時(shí)，實(shí)驗(yàn)組樣品顆粒相對更分散，在反應(yīng)腔內(nèi)，劇烈作用力下，可能導(dǎo)致多糖降解，得率降低。兩組多糖得率差異有顯著性(P＜0.05)。

2.5 實(shí)驗(yàn)組與對照組不同溫度多糖得率的比較

圖5 兩組實(shí)驗(yàn)不同溫度下的比較結(jié)果Fig.5 Comparison of extraction rates of lentinan in two groups with different temperatures

如圖5所示，實(shí)驗(yàn)組得率隨溫度的增高顯著提高。對照組增幅不大。兩組實(shí)驗(yàn)趨勢相同。一般來說，溫度升高，多糖的溶解度會增大，浸提液黏度會減少，擴(kuò)散系數(shù)會增大[16]，這就促使浸提效率的提高。兩組實(shí)驗(yàn)在60℃時(shí)無顯著差異，其他溫度下，差異顯著(P＜0.05)。

2.6 動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理提取香菇多糖條件優(yōu)化

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(34)結(jié)果與分析Table 2 Results and analysis of orthogonal experiments

表3 正交試驗(yàn)方差分析表Table 3 ANOVA analysis of orthogonal experiments

由表2可知，各因素影響主次順序?yàn)槲⑸淞骶|(zhì)壓力＞料液比＞提取溫度，提取條件的最優(yōu)組合為A2B2C3，即微射流均質(zhì)壓力140MPa、料液比1:60(g/ mL)、提取溫度90℃，此條件下多糖得率可達(dá)6.755%。表3中的方差分析表示，微射流均質(zhì)壓力和料液比對多糖得率影響顯著(P＜0.05)。

3 結(jié) 論

經(jīng)動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理后的樣品液，由于在反應(yīng)腔內(nèi)受到超高壓微射流作用時(shí)的瞬間剪切、高速撞擊、渦旋、瞬間壓力降等作用力，固相顆粒粒度減小，細(xì)胞壁破裂，傳質(zhì)速度加快，在后續(xù)提取過程中，與未經(jīng)此處理的樣品相比較，在相同的提取時(shí)間、提取溫度及料液比內(nèi)，香菇多糖的提取效率均有增高；動(dòng)態(tài)超高壓微射流預(yù)處理的最佳條件為壓力140MPa、料液比1:60(g/mL)、提取溫度90℃，此條件下多糖得率最高，平均可達(dá)到6.755%。該研究可為動(dòng)態(tài)超高壓微射流在有效成分提取上的應(yīng)用提供參考。

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Effect of Dynamic High-pressure Microfluidization Pretreatment on the Yield of Lentinan

JIANG Ying，TU Zong-cai*，CHEN Yuan，WANG Qiang，LI Zhi，YIN Yue-bin
(State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

In order to extend the application of dynamic high-pressure microfluidization technology, this technology was used to the pretreatment of mushroom fruit bodies. The optimal pretreatment conditions were explored by single-factor and orthogonal experiments through evaluating the yield of lentinan. Results indicated that the optimal pretreatment conditions were pretreatment pressure of 140 MPa and material-liquid ratio of 1/60. Under the optimal pretreatment conditions, the yield of polysaccharides was up to 6.755%. Compared with the control group, the extraction rate of polysaccharides was significantly improved.

dynamic high-pressure microfluidization；lentinan；pretreatment；extraction

TS201.1

A

1002-6630(2010)24-0062-04

2010-09-16

國家科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新基金項(xiàng)目(10C26213601888)

姜穎(1984—)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物提取分離。E-mail：maomao242424@126.com

*通信作者：涂宗財(cái)(1965—)，男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称焚Y源開發(fā)與利用。E-mail：tuzc_mail@yahoo.com.cn