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      利膽排毒口服液對(duì)大鼠膽汁及尿液中內(nèi)毒素含量的影響

      2010-04-08 12:18:49常明向吳梅梅劉浩
      環(huán)球中醫(yī)藥 2010年5期
      關(guān)鍵詞:利膽內(nèi)毒素口服液

      常明向 吳梅梅 劉浩

      近20年來(lái),內(nèi)毒素的研究已成為醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中最為活躍的領(lǐng)域之一。內(nèi)毒素存在于革蘭氏陰性菌胞壁外膜,在細(xì)菌死亡、裂解后釋放出來(lái),大量?jī)?nèi)毒素進(jìn)入血循環(huán)系統(tǒng)則產(chǎn)生內(nèi)毒素血癥。在化療藥物十分發(fā)達(dá)的今日,內(nèi)毒素血癥仍是革蘭氏陰性細(xì)菌敗血癥死亡率達(dá)50%左右的主要原因,還是許多危急難治性疾病如急性肺衰、腎衰、肝衰、急性彌散性血管內(nèi)凝血等的主要病因。內(nèi)毒素血癥可造成廣泛的病理反應(yīng),如多器官功能不全綜合征、彌散性血管內(nèi)凝血、多臟器功能衰竭及休克等,是一種現(xiàn)代復(fù)雜難治性疾病。

      根據(jù)最新國(guó)內(nèi)外研究成果,結(jié)合傳統(tǒng)中醫(yī)理論,在茵陳蒿湯與調(diào)胃承氣湯合方的基礎(chǔ)上進(jìn)行加減,研制出了一個(gè)新復(fù)方制劑——利膽排毒口服液。該方具有保肝利膽、通俯排毒、益氣活血、清熱解毒的功效,用于治療內(nèi)毒素血癥。研究表明,該制劑對(duì)內(nèi)毒素血癥小鼠保護(hù)率達(dá)100%。為進(jìn)一步研究該制劑對(duì)內(nèi)毒素的體內(nèi)滅活作用,本課題研究了其對(duì)大鼠膽汁流量的影響,對(duì)大鼠膽汁及尿液中內(nèi)毒素含量變化的影響。

      1 材料與方法

      1.1 藥物與試劑

      自制利膽排毒口服液(含茵陳、梔子、大黃、甘草、芒硝等藥味), 每毫升含生藥量1 g。內(nèi)毒素(LPS, E.ColiO111B4, 5 mg/支,購(gòu)自Sigma),臨用前用生理鹽水配成1 mg/ml的溶液。無(wú)熱原試管,潔凈試管使用前在馬輻式爐中經(jīng)250℃高溫烘烤3小時(shí)。無(wú)熱原槍頭(購(gòu)自北京金山川公司)。內(nèi)毒素測(cè)定試劑盒(上海伊華公司)。

      1.2 動(dòng)物

      Wister大鼠,體重180~200 g ,雄性(購(gòu)自中科院武漢實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。實(shí)驗(yàn)前15小時(shí)禁食不禁水。

      1.3 膽汁收集與流量測(cè)定

      取雄性大白鼠8只, 每鼠腹腔注射30 mg/kg戊巴比妥進(jìn)行麻醉, 然后仰位固定于大白鼠解剖臺(tái)上,再沿腹中線切口, 打開(kāi)腹腔, 翻轉(zhuǎn)十二指腸, 找到膽管, 在膽管下穿線, 結(jié)扎乳頭部, 向肝臟方向作“V”形切口, 插入塑料管, 可見(jiàn)有淡黃色膽汁流出, 結(jié)扎固定, 待膽汁流出穩(wěn)定后, 觀察藥前20分鐘內(nèi)膽汁流出的總滴數(shù)作為對(duì)照, 再向十二指腸管內(nèi)注射利膽排毒口服液1 ml/100 g體重, 從給藥后20分鐘開(kāi)始觀察紀(jì)錄第20~40分鐘, 40~60分鐘內(nèi)膽汁流出的總滴數(shù), 與用藥前比較, 兩組數(shù)據(jù)間的比較用t檢驗(yàn),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P<0.05為差異有顯著性。

      1.4 膽汁收集與內(nèi)毒素含量測(cè)定

      1.4.1 膽汁收集 取雄性大白鼠10 只, 隨機(jī)分為兩組,一組作對(duì)照組,一組作用藥組。膽汁收集實(shí)驗(yàn)操作同1.3項(xiàng)下,并收集膽汁于無(wú)熱原試管中。對(duì)照組每鼠于十二指腸注入生理鹽水1 ml/100 g體重后,先收集30分鐘的膽汁作為空白,然后尾靜脈注射內(nèi)毒素溶液0.1 ml/100 g,再收集1小時(shí)的膽汁。用藥組每鼠于十二指腸注入利膽排毒口服液1 ml/100 g體重,先收集30分鐘的膽汁作為空白,然后尾靜脈注射內(nèi)毒素溶液0.1 ml/100 g體重,再收集1小時(shí)的膽汁。

      1.4.2 尿液收集 1.4項(xiàng)下大鼠膽汁收集完畢后,取出膀胱收集尿液。

      1.4.3 樣品處理及內(nèi)毒素的測(cè)定 將收集的膽汁以等量無(wú)熱原水和0.4 ml/L的TRIS-HCL緩沖液稀釋400倍,將尿液同法稀釋10倍,并以3500 rpm離心10分鐘。分別取上清液0.1 ml, 加入鱟試劑0.05 ml,混勻,37℃溫育25分鐘;加入鱟三肽0.05 ml, 混勻,37℃溫育3分鐘,然后,依次加入0.5 ml亞硝酸鈉、0.5ml氨基苯磺酸、0.5 ml萘乙二胺進(jìn)行顯色反應(yīng)。按試劑盒要求,同時(shí)設(shè)空白對(duì)照和內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)照。反應(yīng)完畢后,以蒸溜水為空白, 在分光光度計(jì)上以545 nm 比色。與用藥前比較, 兩組數(shù)據(jù)間的比較用t檢驗(yàn),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P<0.05為差異有顯著性。

      2 結(jié)果

      2.1 口服液對(duì)膽汁分泌的影響

      給藥前20分鐘內(nèi),膽汁流出總滴數(shù)為(15.5±3.5)滴, 給藥后20~40分鐘較藥前增加(4.5±1.5)滴,(P<0.05);給藥后40~60分鐘較藥前增加(5.5±2.5)滴,(P<0.05)。說(shuō)明利膽排毒口服液有顯著的促進(jìn)大鼠膽汁分泌的作用。

      2.2 口服液對(duì)大鼠膽汁及尿液中內(nèi)毒素含量的影響

      對(duì)照組及口服液組大鼠膽汁中內(nèi)毒素含量結(jié)果分別為(84.3±12.1)EU/ ml,(51.7±14.4)EU/ ml,P<0.05;對(duì)照組及口服液組大鼠尿液中內(nèi)毒素含量結(jié)果分別為(17.2±2.1)EU/ ml,(12.5±1.6)EU/ ml,P<0.05。

      3 討論

      內(nèi)毒素機(jī)體清除機(jī)制研究已表明,肝是清除內(nèi)毒素的主要器官,脾、腸也是重要器官。肝對(duì)血液中內(nèi)毒素的清除,主要是通過(guò)枯否細(xì)胞、肝細(xì)胞的內(nèi)吞作用而實(shí)現(xiàn)的。內(nèi)毒素被內(nèi)吞入細(xì)胞后,以微管依賴的囊泡運(yùn)輸方式,穿過(guò)肝細(xì)胞,運(yùn)至肝細(xì)胞膽小管面,以胞吐的方式排入膽小管中,再經(jīng)膽道系統(tǒng)排入腸腔內(nèi)。免疫組化顯示,從血液循環(huán)中清除的內(nèi)毒素迅速分布到肝、肺、腎等組織巨噬細(xì)胞內(nèi)。內(nèi)毒素及其代謝產(chǎn)物經(jīng)巨噬細(xì)胞代謝轉(zhuǎn)運(yùn)后可逐步由膽道排泄,采用酚/水抽體法從內(nèi)毒素血癥大鼠膽汁中排出的內(nèi)毒素,發(fā)現(xiàn)它對(duì)小鼠仍具極強(qiáng)致死活性[1]。但從目前文獻(xiàn)看,對(duì)泌尿道排出內(nèi)毒素是否是機(jī)體清除內(nèi)毒素的方式與途徑未得到認(rèn)同,不過(guò)現(xiàn)有不多的研究資料已顯示,尿液中確實(shí)含有較高濃度的內(nèi)毒素[2,3]。因此,研究膽汁及尿液中內(nèi)毒素的含量變化對(duì)了解機(jī)體清除內(nèi)毒素的功能具有重要意義。

      實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,利膽排毒口服液給大鼠注入后能促進(jìn)大鼠膽汁分泌, 表明該制劑具有利膽作用。實(shí)驗(yàn)也表明,大鼠注射內(nèi)毒素后,膽汁中確實(shí)存在大量的內(nèi)毒素。在病理情況下如膽道阻塞不通暢,則會(huì)使內(nèi)毒素停留于體內(nèi),引發(fā)或加重內(nèi)毒素血癥。因而,利膽排毒口服液的利膽作用將促進(jìn)內(nèi)毒素的排出,增強(qiáng)機(jī)體清除內(nèi)毒素的能力,從而有助于內(nèi)毒素血癥的治療。

      結(jié)果表明,用藥后大鼠膽汁及尿液中內(nèi)毒素含量均降低,其原因可能是中藥直接降解內(nèi)毒素,使循環(huán)中內(nèi)毒素量減少,從而導(dǎo)致排出減少;另一種原因是中藥的利膽作用,使膽汁分泌增加,單位體積內(nèi)內(nèi)毒素含量下降。

      尿液中內(nèi)毒素含量測(cè)定表明,尿液中也存在一定量的內(nèi)毒素,文獻(xiàn)資料及本研究結(jié)果可以說(shuō)明,泌尿道排出內(nèi)毒素也應(yīng)是機(jī)體清除內(nèi)毒素的方式與途徑之一。中藥的利尿作用也將有助于內(nèi)毒素血癥的治療。

      [1]Van Bossuuyt H,De Zanger RB,Wisse E. Cellular and subcellular distribution of injected lipopolysaccharide in rat liver and its inactivation by bile salts[J]. hepatol ,1988,7:325-337

      [2]劉竟,崔乃強(qiáng),趙琪,等. 腸源性內(nèi)毒素移位后的體內(nèi)分布[J].中國(guó)急救醫(yī)學(xué), 2000,20(3) :146-147.

      [3]卜一珊,徐彥貴,郭震,等. 動(dòng)態(tài)濁度法測(cè)定尿液中內(nèi)毒素含量及臨床應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志.2003,23(6):335-337.

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