鮭魚傳染性胰臟壞死病臨床診斷及檢測

李月紅 陳大方 王雪發(fā) 揚劍波

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 吉林 長春 130118;2.吉林省扶余縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站 吉林 松源 138000;3.吉林省東遼縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站 吉林 東遼 1300004.吉林省公主嶺水產(chǎn)技術(shù)推廣站 吉林 長春 130000)

鮭魚傳染性胰臟壞死病(infctious pancreatic necros is introut,IPN)是鮭科魚類的一種高度傳染性的急性病毒疾病。該病主要病癥是胰臟壞死。該病于 1940年首次發(fā)現(xiàn)于加拿大的鮭科魚,目前已遍及歐洲、亞洲和美洲等。

IPNV(鮭魚傳染性胰臟壞死病病毒)主要危害河鱒、虹鱒、褐鱒、銀鮭以及大西洋鮭等幼魚。3～4月齡的幼魚影響最大,死亡率在 90%以上。6個月以上的魚不發(fā)病。在不同的條件下,發(fā)病率有較大的差異,主要取決于宿主的種類、品系、年齡、病毒株的毒力差異以及水溫。水溫對魚病來說至關(guān)重要,10～14℃為發(fā)病高峰。已證實感染 IPNV的虹鱒魚苗在6℃的死亡率要遠遠小于 10℃的死亡率,而在 16℃時則損失極少。河鱒在 10℃感染 IPNV的死亡率為 74%,15.5℃時為 46%,而在 4.5℃時大多數(shù)魚都不發(fā)病。

自然感染的范圍不只限于鮭鱒魚類。許多非鮭科魚類及其他水生動物,至少有 20個科的成員感染 IPNV,其中包括從低等的圓口動物七鰓鰻直到高等的硬骨魚。此外還有貝類、甲殼以及魚類的寄生吸蟲。但它們的發(fā)病率遠遠低于鮭科魚,大多數(shù)為無癥狀的帶毒者。

1、臨診癥狀

該病的潛伏期約為 6～10日。感染初期生長發(fā)育良好,外表正常的魚苗死亡率驟然升高,并出現(xiàn)突然離群狂游、翻滾、旋轉(zhuǎn)等異常游泳姿勢,隨后停于水底,間歇片刻后重復上述游動。病的末期魚體變黑,眼球突出,腹部明顯腫大,并在腹鰭的基部可見到充血、出血,肛門常拖一條灰白色糞便。

2、發(fā)病機理及病理變化

該病毒可以通過魚卵垂直傳播也可通過患魚的排泄物進行水平傳播。雖然感染過 IPNV的魚可產(chǎn)生抗體,但有一部分可終生帶病毒成為新的傳染源。水平傳播最初的入侵門戶為消化道或鰓。魚苗容易通過浸泡感染,說明鰓起重要作用。已發(fā)現(xiàn)鮭鱒的帶毒親魚所產(chǎn)生的卵和精液均可帶毒。在垂直傳播過程中 IPN病毒吸附在卵殼表面或隱藏于凹陷處,不易消毒。而稚魚孵出后若吞食卵殼就會受到感染。成年鮭科魚感染后為無癥狀的帶毒者?？山?jīng)過糞、精液、卵及尿等終身排毒,糞便中的含毒量最高,在污染的池水中的病毒可高達每升 105T C I D50。許多非鮭科魚類及貝類通常只是病毒儲主,并不引起發(fā)病。剖檢發(fā)現(xiàn)肝、脾明顯褪色,消化道無殘留食物,胃里有時帶有乳白色或黃色的粘液,有時在幽門處有點狀出血。

IPN的病理組織學特征變化為胰臟組織壞死。有時波及附近的脂肪組織,在變性的胰腺腺泡內(nèi)可見圓形或卵形的胞漿內(nèi)包涵體。帶毒魚的腎臟受損,腎小球出血或充血,上皮細胞水腫、破壞或脫落。腸粘膜受損,呈現(xiàn)帶有管狀滲出物的急性腸炎,肝臟亦可見壞死。電鏡檢查超薄切片在肝、胰腎組織內(nèi)可發(fā)現(xiàn)病毒,尤其是在壞死區(qū)的附近病毒粒子清晰可見。被感染了的成年魚則沒有病理解剖學上的變化,受過 IPN病毒感染的魚在疾病流行過后其臨診癥狀消失,但仍處于帶毒狀態(tài),并不斷地通過尿、或通過鰓散布病毒。

3、免疫學和分子生物學診斷技術(shù)

鮭魚傳染性胰臟壞死病病毒屬雙RNA病毒科(Birnaviridae)的水生雙 RNA病毒屬(Aquabirnavirus)。IPN病毒血清型較多。

目前協(xié)同凝集試驗(CO AT)已應(yīng)用于鑒定 IPNV和從病魚組織中直接檢測病毒抗原。即利用葡萄球菌 A蛋白(SPA)能與多種哺乳動物IgG的Fc段結(jié)合的特性,將IgG連接在SPA菌體上與可溶性抗原反應(yīng)出肉眼可見的凝集反應(yīng)。Ishiguro等(1984)將免疫擴散試驗(AGID)與熒光抗體試驗及中和試驗結(jié)合鑒定 IPNV毒株間的血清學關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)AGID可檢測IPNV的共同抗原,各毒株 AGID中表現(xiàn)出密切的抗原關(guān)系。Dea等(1983)用免疫血清與 RTG-2細胞培養(yǎng)液中的 IPNV(VR-299株)進行對流免疫電泳(CIE),結(jié)果出現(xiàn)單一沉淀線,在細胞培養(yǎng)的早期也可檢出沉淀抗原。病料經(jīng)細胞培養(yǎng)傳代后檢出率高達 89.4%(直接從病料中檢出率僅為41.2%)。Hsu等(1981)將免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)(IBT)應(yīng)用于 IPNV的檢測和毒株鑒定,認為具有高度的特異性,敏感度可測到病毒的 10n g以下,而且可準確鑒定毒株。

另外,中和試驗(NT)、ELIS A試驗、間接熒光抗體技術(shù)、核酸探針技術(shù)都已應(yīng)用到 IPNV檢測鑒定中,提高了檢測速度和診斷效率。