陳燕杰，孟春萍，張楊

（河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州 450002）

細(xì)菌耐藥性問(wèn)題一直是全球關(guān)注的問(wèn)題，從天然、毒副作用小的中草藥中篩選耐藥抑制劑是近幾年來(lái)人們研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。中藥能抑制大腸桿菌耐藥并消除其耐藥性，但其作用機(jī)制尚未完全明確，因此開展中藥抑制和消除耐藥性方面的研究及其作用機(jī)制的研究，并在此基礎(chǔ)上探求安全、高效、經(jīng)濟(jì)的耐藥性消除劑具有重要意義。

中藥是我國(guó)特有的天然資源，在治療感染、逆轉(zhuǎn)(或抑制) 腫瘤細(xì)胞耐藥性等方面顯示了獨(dú)特的作用，這提示我們可以在中藥中尋找既有良好耐藥消除效果又沒(méi)有毒副作用或毒副作用較低的耐藥抑制劑。

一、細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的耐藥機(jī)制

（一）耐藥性產(chǎn)生的遺傳方式

1.固有耐藥。在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中，為適應(yīng)不利環(huán)境，經(jīng)過(guò)優(yōu)勝劣汰，微生物已獲得了抵抗多種不利因素的能力。一些微生物如放線菌、真菌等可合成適量抗生素以殺滅周邊的細(xì)菌而獲得更有利于自己生存的環(huán)境。周邊的這些細(xì)菌也為了適應(yīng)環(huán)境，在長(zhǎng)期抗生素壓力下通過(guò)誘導(dǎo)突變，對(duì)抗生素產(chǎn)生了抵抗力。這種耐藥有種屬特異性，來(lái)源于該細(xì)菌固有的自然特性，耐藥基因存在于染色體上。

2.染色體突變或獲得新的脫氧核糖核酸分子。突變可發(fā)生于脫氧核糖核酸分子，如結(jié)核桿菌的點(diǎn)突變可導(dǎo)致對(duì)利福平的耐藥，淋球菌的點(diǎn)突變可導(dǎo)致對(duì)苯唑西林的耐藥；也可發(fā)生于質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子的基因上，如質(zhì)粒編碼產(chǎn)生的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)和質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC酶。

(二) 細(xì)菌獲得耐藥性的生物化學(xué)方式

1.酶的滅活作用。通過(guò)修飾，水解乙?；?、磷酸化等破壞抗菌藥物的活性。

2.靶位旁路。指抗菌藥物雖可以與靶位結(jié)合，但靶位的生理作用已被某些新生成分代替。

3.靶位修飾。細(xì)菌可通過(guò)改變蛋白的數(shù)量，對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥。

4.細(xì)菌細(xì)胞膜通透性改變。由于藥物長(zhǎng)期作用，細(xì)菌改變了外膜蛋白，使菌體外膜通透性下降，阻礙抗菌藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)膜靶位。

5.主動(dòng)泵出功能。外排泵是存在于細(xì)菌細(xì)胞膜上的一類蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，外排泵的活動(dòng)增強(qiáng)使藥物外排增加，細(xì)胞內(nèi)藥物濃度下降，臨床療效降低或無(wú)效。

二、中藥抑菌作用

幾千年來(lái)，中藥在防治疾病中發(fā)揮著重要作用。有些中藥有效成分可直接作用于菌體，其抑菌機(jī)理是通過(guò)調(diào)動(dòng)動(dòng)物機(jī)體內(nèi)在的積極因素，降低細(xì)菌毒力和減輕對(duì)組織細(xì)胞的破壞作用等途徑起到抑菌抗菌作用。

（一）對(duì)病原菌的抑制和殺滅作用抗菌中藥是直接作用于細(xì)菌結(jié)構(gòu)和干擾代謝而達(dá)到抑菌效果如黃連的有效成分小檗堿，其作用機(jī)理為抑制細(xì)菌的呼吸、糖及糖代謝中間產(chǎn)物的氧化和脫氫過(guò)程以及蛋白質(zhì)、核酸合成。大蒜的抑菌作用為大蒜辣素分子中的氧原子與細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所必需的半胱氨酸分子中的巰基結(jié)合，使后者變?yōu)榉腔钚晕镔|(zhì)，干擾細(xì)菌代謝，從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。此外研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，清熱解毒藥、補(bǔ)虛藥、理血藥、瀉下藥等大部分藥物均對(duì)畜禽的一些病原體有直接抑制和殺滅作用，如板藍(lán)根、野菊花、連翹、藿香、蒲公英、金銀花、 魚腥草、黃芪、黨參、白芍、大黃等。

（二）增強(qiáng)機(jī)體的免疫力許多中藥均含有多種營(yíng)養(yǎng)成分和免疫活性物質(zhì)，能促進(jìn)正常和免疫低下的免疫器官的發(fā)育，激活免疫器官的免疫功能。麥冬、黃芪、當(dāng)歸、五味子、何首烏、肉蓯蓉、淫羊藿、肉桂、青蒿、刺五加等均能促進(jìn)免疫器官的發(fā)育；柴胡、黃連、黃芩、金銀花、蒲公英、黃芪、夏枯草、當(dāng)歸等均可增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)細(xì)胞的免疫功能；黨參、黃芪、白術(shù)、淫羊藿、枸杞子均能增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫，使血清IgG、IgA、IgM水平提高；金銀花、蒲公英、紫花地丁口服液能顯著增強(qiáng)小鼠白細(xì)胞的吞噬能力，板藍(lán)根多糖能明顯提高小鼠白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)量。豬苓多糖、靈芝多糖、人參多糖、商陸多糖、當(dāng)歸等可促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體IL21、IL22、IFN等細(xì)胞因子及其受體的產(chǎn)生。芎嗪、茶多酚等具有多重耐藥逆轉(zhuǎn)活性。

（三）抗炎作用及其他作用許多中藥具有良好的抗炎作用，能抑制組織胺、5-羥色胺引起的血清通透性增加； 抑制滲出和分泌增多或出血； 恢復(fù)和提高組織器官的機(jī)能； 減輕細(xì)菌及其毒素對(duì)組織的損傷和破壞等，從另一側(cè)面起抑菌作用。如赤芍中的芍藥甙對(duì)角叉菜膠或右旋糖酐誘發(fā)的大鼠后爪浮腫有抑制作用。此外，紫草中的紫草素、乙酰紫草素，秦皮中的秦皮乙素，夏枯草中的木犀草素，青蒿中的青蒿素，丹參中的丹參酮均具有抗炎作用。連翹等許多中藥可中和細(xì)菌毒素或減輕毒素對(duì)動(dòng)物的損傷，提高家畜對(duì)內(nèi)毒素致死的耐受性，降低小鼠內(nèi)毒素血癥。

一般而言，溫?zé)崴幘哂袕?qiáng)心，升高血壓，提高微血管的血流量及提高微血管子路運(yùn)動(dòng)的振幅，有助于組織細(xì)胞代謝功能的改善；寒涼藥多具有降低血壓、微循環(huán)血流速度及組織細(xì)胞代謝水平，使微循環(huán)保持正常功能狀態(tài)，起到對(duì)炎性產(chǎn)物的移出和對(duì)病原的吞噬作用。

三、中藥作為多重耐藥抑制劑的研究

多重耐藥是近些年來(lái)在細(xì)菌中廣泛存在的，可使細(xì)菌對(duì)一些結(jié)構(gòu)不相關(guān)的抗生素、有機(jī)溶劑的滅活作用產(chǎn)生抵抗的現(xiàn)象，其危害相當(dāng)嚴(yán)重，能直接導(dǎo)致藥物失去作用，使臨床抗感染治療失敗，危及人畜生命健康。國(guó)外已經(jīng)證實(shí)有效并致力開發(fā)研究的抑制劑有植物生物堿-利血平、LY335979、格列本脲、吩噻嗪-金屬?gòu)?fù)合物、碳酰氰氯苯腙、維拉帕米等少數(shù)幾種物質(zhì)，它們能有效消除細(xì)菌或癌細(xì)胞的多重耐藥性。利血平能夠抑制S.au2reus的藥物外溢泵NorA，使諾氟沙星MIC降為原來(lái)的1/4或更低。分離耐藥株中約一半的耐藥菌與NorA的表達(dá)有關(guān)，均可被利血平誘導(dǎo)恢復(fù)對(duì)氟喹諾酮類藥物的敏感性。雷連成等(2003)報(bào)道，采用中藥黃連提取物(命名為耐藥性抑制劑IT2)對(duì)20株人源性和動(dòng)物源性大腸桿菌作用后，發(fā)現(xiàn)其對(duì)氟喹諾酮類藥物、慶大霉素和多西環(huán)素的耐藥性被明顯抑制，表明耐藥抑制IT2對(duì)大腸桿菌的部分耐藥性具有良好的抑制作用，并且還表明中藥的作用機(jī)制與阻礙細(xì)菌耐藥質(zhì)?？截?，恢復(fù)外膜通道蛋白正常表達(dá)關(guān)系密切。

四、中藥抗菌增效劑

某些中藥或中藥復(fù)方對(duì)抗菌藥物有不同程度的增效作用，可以提高細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感性作為增敏劑應(yīng)用于臨床治療的中藥多數(shù)具有鈣通道拮抗活性，將臨床觀察到的增敏作用與其潛在的逆轉(zhuǎn)多重耐藥活性聯(lián)系在一起，推測(cè)常用的增敏方劑中可能存在多重耐藥逆轉(zhuǎn)劑。TMP是磺胺類及其他抗菌西藥的增效劑，配合蒲公英、魚腥草素或黃連素則能顯著增強(qiáng)抑菌作用。金銀花對(duì)耐青霉素的金黃色葡萄球菌有增敏作用，在低于抗菌濃度時(shí)還能增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬能力，對(duì)青霉素抗菌有增效作用。葛根芩連湯與氨芐青霉素、頭孢哌酮、諾氟沙星配伍應(yīng)用，均有協(xié)同作用，可以增強(qiáng)耐藥菌對(duì)抗生素的敏感性。

Morel等從羽扇豆屬植物葉中提取得到多種異黃酮類化合物，發(fā)現(xiàn)抗菌活性低，但在超表達(dá)泵的菌株中，對(duì)其底物小檗堿和諾氟沙星有較好的協(xié)同增效作用。Miranda等從墨西哥藥用牽?；▽僦参镏刑崛〉玫搅硕喾N低聚糖，發(fā)現(xiàn)單獨(dú)使用無(wú)抗菌活性，但可增強(qiáng)諾氟沙星對(duì)耐藥菌株的活性。此外，一些學(xué)者通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，石芽茶、大蒜、大黃、谷精籽、黃柏、黃芩等中藥提取液作為滅活酶抑制劑，對(duì)β-2內(nèi)酰胺酶也有不同程度的抑制作用，這些都為傳統(tǒng)中藥的深度開發(fā)應(yīng)用探索提供了新途徑。

五、中藥耐藥抑制劑研究展望

綜上所述，目前對(duì)中藥在抑制耐藥性大腸桿菌方面已做了大量的研究工作，在試驗(yàn)和臨床研究中都有很大進(jìn)展。在人類面臨細(xì)菌耐藥性或抗生素不良反應(yīng)不斷增加的嚴(yán)峻形勢(shì)下，對(duì)中藥的正確認(rèn)識(shí)和深入研究，這將為研究開發(fā)新型中藥耐藥抑制劑提供科學(xué)的理論依據(jù)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)中藥的作用機(jī)制探討不深，加之中藥作用緩慢，作用時(shí)間長(zhǎng)，所以中藥在抑制耐藥性方面還處于起步階段，消除率還很低。要想解決獸醫(yī)臨床、醫(yī)學(xué)臨床日趨嚴(yán)重的耐藥問(wèn)題，還需對(duì)分子耐藥機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步的研究探索。相信中藥作為耐藥抑制劑將在獸醫(yī)中具有廣闊的開發(fā)前景。