謝紅旗 徐顯輝 柯明耀 姜 燕

肺癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤,肺癌治療遭遇“治療性瓶頸”與肺癌的多藥耐藥性密切相關(guān),已成為研究的熱點(diǎn)。我們采用免疫組織化學(xué)法,檢測(cè)肺癌組織與其他惡性腫瘤組織中 MRP1、LRP和 Ki-67的表達(dá)情況,以探討其與腫瘤耐藥的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

110例肺癌組織標(biāo)本取自我院呼吸中心 2005年11月 ～2008年 4月行支氣管鏡活檢及胸外科手術(shù)切除標(biāo)本。其他惡性腫瘤標(biāo)本來(lái)自外科手術(shù)切除標(biāo)本(包括食管癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、腎癌),活檢前均未行放化療,均經(jīng)病理檢查確診。其中肺癌組 110例,男 108例,女 2例,年齡 45～84歲,平均年齡 67歲,其中鱗癌 69例,腺癌 24例,小細(xì)胞肺癌 17例,其中 8例患者行手術(shù)切除,支氣管周?chē)M織及局部淋巴結(jié)活檢及免疫組織化學(xué)檢測(cè),惡性腫瘤組 22例,男 21例,女 1例,年齡 31～80歲,平均年齡 54歲,其中食管癌 4例,胃癌 6例,前列腺癌 2例,膀胱癌 3例,結(jié)腸癌 2例,腎癌 2例,肝癌 2例,膽囊癌 1例。取 8例手術(shù)肺癌病例和 15例其它惡性腫瘤的肺癌旁組織及淋巴結(jié)作為對(duì)照組。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

采用 S-P免疫組織化學(xué)二步法,鼠抗人 LRP和MRP1、Ki-67單克隆抗體(M1B1)免疫組織化學(xué)試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。110例肺癌組織標(biāo)本及 22例其他惡性腫瘤組織標(biāo)本,23例癌旁組織標(biāo)本均用 4%中性甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,5μm連續(xù)切片,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行免疫組化檢測(cè) Ki-67、LRP、MRP1在肺癌中的表達(dá),用已知陽(yáng)性肺癌切片做陽(yáng)性對(duì)照,以磷酸鹽緩沖液(PBS)替代第一抗體做陰性對(duì)照,底物選擇二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,蘇木精復(fù)染對(duì)比。

判斷標(biāo)準(zhǔn):MRP1蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要位于胞膜和胞質(zhì),呈黃色;LRP以細(xì)胞核和胞質(zhì)顯現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性,Ki-67陽(yáng)性表達(dá)在胞質(zhì),呈棕黃色。隨機(jī)抽取 5個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù) 200個(gè)肺癌細(xì)胞,取平均值。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例分為:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) ＜10%或看不到明顯的陽(yáng)性細(xì)胞為“-”;10% ～49%為“+”;50%～74%為“++”;≥75%為“+++”。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)數(shù)資料采用 χ2檢驗(yàn),所用軟件為 SPSS12.0。

2 結(jié)果

2.1 LRP和 MRP1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌組織學(xué)類(lèi)型的關(guān)系

鱗癌組織中 LRP+MRP1陽(yáng)性表達(dá)率為23.2%,腺癌為20.8%,兩組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05),見(jiàn)表1。

2.2 LRP、MRP1和 Ki-67在肺癌組織及其他惡性腫瘤組織中的表達(dá)情況

高分化和低分化肺癌組織中 LRP陽(yáng)性表達(dá)率分別為 37.8%和 31.5%;MRP1陽(yáng)性表達(dá)率分別為2.7%和 2.7%。LRP和 MRP1表達(dá)與肺癌腫瘤細(xì)胞分化程度無(wú)相關(guān)性(P＞0.05),見(jiàn)表 1。

在其他惡性腫瘤組織中 LRP基因也有表達(dá),中高分化腫瘤組織與低分化腫瘤組織比較有顯著性差異;MRP1未測(cè)出表達(dá),見(jiàn)表 2。

Ki-67在肺癌及其他惡性腫瘤組織中均呈高表達(dá),其表達(dá)水平非小細(xì)胞肺癌與小細(xì)胞肺癌比較無(wú)顯著性差異,小細(xì)胞肺癌和腺癌比較也無(wú)顯著性差異,見(jiàn)表3。

2.3 LRP和 MRP1表達(dá)與肺癌組織學(xué)類(lèi)型的關(guān)系

LRP和 MRP1在非小細(xì)胞肺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為:鱗癌為 59.4%和 24.6%,腺癌為 75.0%和25.0%,與癌旁組織比較有顯著性差異 P＜0.05。在小細(xì)胞肺癌中其陽(yáng)性表達(dá)率為 17.6%和 11.8%,與癌旁組織比較無(wú)顯著性差異 P＞0.05,見(jiàn)表 4。

表1 MRP1、LRP基因在 110例肺癌組織中的表達(dá)情況(例,%)

表2 MRP1、LRP基因在 22例其它惡性腫瘤組織中的表達(dá)情況(例)

表3 Ki-67在肺癌及其它惡性腫瘤組織中的表達(dá)情況(例)

表4 各組織中 MRP1 LRP蛋白表達(dá)情況比較(例,%)

3 討論

3.1 NSCLC中 LRP和 MRP1表達(dá)的意義

NSCLC占所有肺癌的 80%,化療仍是臨床上多學(xué)科綜合治療的主要手段,化療失敗的根本原因?yàn)槟[瘤細(xì)胞耐藥所致。目前研究發(fā)現(xiàn),藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的改變(外排增加)所致的肺癌細(xì)胞內(nèi)藥物濃度下降是多耐藥性發(fā)生的關(guān)鍵,已發(fā)現(xiàn)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)膜糖蛋白主要有LRP和、MRP1和 P-gP等多種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。MRP1基因位于 16號(hào)染色體 P13.1帶上,由 28 kb堿基組成,它能識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)與谷胱甘肽結(jié)合的底物,增加藥物外流,從而降低細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度產(chǎn)生耐藥,稱(chēng)為 GSH-X泵。LRP蛋白是細(xì)胞穹隆蛋白的主要成分,廣泛分布于細(xì)胞器上。它可使以胞核為靶點(diǎn)的藥物不能通過(guò)核孔進(jìn)入細(xì)胞核,即使進(jìn)入核內(nèi)的藥物也被運(yùn)回細(xì)胞質(zhì)中,降低藥物分布的核質(zhì)比率,也可使進(jìn)入胞質(zhì)的細(xì)胞毒性或抑制性藥物轉(zhuǎn)運(yùn)至運(yùn)輸囊泡中,呈房室性分布使藥物被隔離,最終通過(guò)胞吐的方式排出細(xì)胞外而產(chǎn)生耐藥。我們的研究表明 LRP和 MRP1的表達(dá)水平更高,是否因?yàn)?LRP分布以胞質(zhì)為中,而 MRP1分布以細(xì)胞膜為主,S-P染色胞質(zhì)更容易染色有關(guān),尚未有報(bào)道。但國(guó)內(nèi)多位學(xué)者認(rèn)為L(zhǎng)RP比 MRP1具有更高的耐藥診斷價(jià)值[1～3],LRP可作為獨(dú)立的預(yù)測(cè)化療敏感性的指標(biāo)。我們研究發(fā)現(xiàn) LRP與 MRP1在NSCLC中表達(dá)磷癌與肺癌無(wú)顯著性差異,國(guó)內(nèi)外有學(xué)者研究認(rèn)為在腺癌中表達(dá)更高[4],而共表達(dá)無(wú)顯著性差異,其機(jī)制不明。

3.2 SCLC中 MRP1和 LRP表達(dá)的意義

SCLC P-gp表達(dá)主要表現(xiàn)為獲得性,NSCLC則為原發(fā)性,可以解釋 SCLC中 MRP1和 LRP表達(dá)水平很低。我們研究發(fā)現(xiàn) MRP1和 LRP表達(dá) SCLC與癌旁組織無(wú)顯著性差異。也可解釋臨床 SCLC化療效果好于NSCLC,耐藥基因的研究多集中在 NSCLC。

3.3 Ki-67表達(dá)與 MRP1和 LRP表達(dá)的關(guān)系

Ki-67表達(dá)與細(xì)胞周期密切相關(guān),它在 G1后期開(kāi)始出現(xiàn),在S期和 G2期逐漸升高,M期達(dá)到高峰,有絲分裂后迅速降解消失,Ki-67表達(dá)可反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性,是侵襲力、轉(zhuǎn)移分化程度的指標(biāo)[5],我們研究發(fā)現(xiàn),Ki-67在肺癌與其它惡性腫瘤組織均呈陽(yáng)性高表達(dá),肺癌中 NSCLC與 SCLC表達(dá)無(wú)顯著差異。提示Ki-67與 MRP1和 LRP表達(dá)無(wú)相關(guān)性。與國(guó)內(nèi)學(xué)者的MRP1和 LRP表達(dá)與 TNM分期無(wú)關(guān)的觀點(diǎn)一致[2,4],支持與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)的觀點(diǎn)。

綜上所述,我們認(rèn)為肺癌多藥耐藥(MDR)是多因子、多途徑共同參與的過(guò)程,現(xiàn)在的研究多為整個(gè)耐藥體系中的一部分,難以概括全貌,有許多機(jī)制尚不明了,需要更多的病理臨床的綜合性研究才能闡明。

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[2] 李小琴,李 堅(jiān),陳 萍,等.非小細(xì)胞肺癌組織中耐藥相關(guān)基因的表達(dá)及意義〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2008,23(6):567.

[3] 左 云,黃建安,穆傳勇,等.耐藥相關(guān)基因 MDR、MRP、LRP及其表達(dá)產(chǎn)物 P-gp、MRP、LRP在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.臨床腫瘤雜志,2006,11(12):921.

[4] 呂梅君,王 潔,易祥華,等.肺癌耐藥蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與臨床相關(guān)性研究〔J〕.中華結(jié)核和呼吸雜志,2001,24(8):458.

[5] 謝寶松,施作霖,李 強(qiáng).非小細(xì)胞肺癌 Ki-67的表達(dá)及其意義〔J〕.福建醫(yī)藥雜志,2008,24(2):1.