曹嘉，冉蘭，陳霞

（1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，成都市 610041；2.四川抗菌素工業(yè)研究所，成都市 610052）

鹽酸多奈哌齊（Donepezil hydrochloride）的化學(xué)名為1-芐基-4-[（5，6-二甲氧基-1-茚滿酮）-2-基）甲基]哌啶鹽酸鹽，是治療阿爾茨海默病的第2代膽堿酯酶（AchE）抑制劑，能夠增加大腦乙酰膽堿含量，是治療早、中期老年性癡呆的有效藥物[1，2]。目前各國藥典中尚未收載該品種的有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，國內(nèi)文獻(xiàn)亦尚未見報(bào)道。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文參照鹽酸多奈哌齊原料的有關(guān)物質(zhì)檢查方法[3]，采用高效液相色譜（HPLC）法中常用的不加校正因子的主成分自身對照法對鹽酸多奈哌齊片中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了檢測，以對本品進(jìn)行更有效的內(nèi)在質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

LC-2010C HPLC儀，包括CLASS-VP色譜工作站（日本島津公司）。

鹽酸多奈哌齊原料（重慶桑田藥業(yè)有限公司，批號：M20071201，含量：99.8%）；鹽酸多奈哌齊標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100650-200301，含量：99.9%）；鹽酸多奈哌齊片（四川大學(xué)華西藥學(xué)院，批號：081011、081012、081013，規(guī)格：每片5 mg）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：AlltimaTMC18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：0.01 mol·L－1磷酸氫二鉀溶液（含3%三乙胺，用磷酸調(diào)pH至4.3）-甲醇（60∶40）；檢測波長：271 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL·min－1；進(jìn)樣量：20 μL；以鹽酸多奈哌齊峰計(jì)算，色譜柱的理論塔板數(shù)為6600，各峰與其相鄰峰的分離度均符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備。取本品10片，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸多奈哌齊10 mg），置于10 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對照溶液的制備。精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備。精密稱取鹽酸多奈哌齊標(biāo)準(zhǔn)品100 mg，置于10 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度；精密量取該溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備。按比例量稱取不含鹽酸多奈哌齊的空白輔料適量，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.3 檢測波長的選擇

精密稱取鹽酸多奈哌齊標(biāo)準(zhǔn)品適量，用流動相溶解制成每1 mL中含鹽酸多奈哌齊約20μg的溶液；按比例量稱取不含鹽酸多奈哌齊的空白輔料適量，同法制得空白輔料溶液。分別于200～400 nm波長內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果，鹽酸多奈哌齊分別在230、271、315 nm波長處有最大吸收，而空白輔料在271、315 nm波長處無吸收。通過HPLC試驗(yàn)進(jìn)一步可知，采用271 nm波長進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測時能檢測到較多雜質(zhì)峰，在315 nm波長進(jìn)行測定時雜質(zhì)峰數(shù)目減少。故采用271 nm作為本品有關(guān)物質(zhì)的檢測波長。

2.4 專屬性試驗(yàn)

2.4.1 輔料干擾考察。照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密量取陰性樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.陰性樣品；B.標(biāo)準(zhǔn)品；C.供試品；1.鹽酸多奈哌齊Fig 1 HPLC chromatogramA.negative sample；B.standard sample；C.test sample；1.donepezil hydrochloride

由圖1可知，原料雜質(zhì)峰、輔料峰、主成分峰均能完全分離，輔料無干擾。

2.4.2 降解物干擾考察。精密量取供試品溶液5 mL 3份，分別進(jìn)行以下試驗(yàn)：加1 mol·L－1鹽酸溶液10 mL，在80℃水浴中加熱1 h；加1 mol·L－1氫氧化鈉溶液4 mL，搖勻，常溫下放置5 min；加30%過氧化氫溶液1 mL，在60℃水浴中加熱10 min。另取本品10片2份，精密稱定，分別進(jìn)行以下試驗(yàn)：置于白熾光（4500照度）下照射7 d；置于130℃烘箱中加熱1 h。將上述破壞后樣品分別制成每1 mL中約含1 mg鹽酸多奈哌齊的降解溶液，照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密量取上述降解溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜。結(jié)果破壞試驗(yàn)產(chǎn)生的降解產(chǎn)物峰均能與主成分峰完全分離。

2.5 檢測限考察

取供試品溶液用流動相稀釋成系列濃度，進(jìn)樣，當(dāng)信噪比為3時進(jìn)樣量即為最低檢測限。測得最低檢測限為0.05 ng（S/N＝3）。

2.6 耐用性試驗(yàn)

在“2.1”項(xiàng)色譜條件的基礎(chǔ)上，對流動相的組成、柱溫、流速、同類型不同品牌的色譜柱等進(jìn)行耐用性考察，其中流動相比例分別為磷酸氫二鉀溶液-甲醇（60∶40）、磷酸氫二鉀溶液-甲醇（59∶41）、磷酸氫二鉀溶液-甲醇（61∶39）；柱溫分別為30 ℃、35 ℃、40 ℃；流速分別為0.9、1.0、1.1 mL·min－1；pH值分別為4.30、4.32、4.34；色譜柱分別為AlltimaTMC18（250 mm×4.6 mm，5μm）、資生堂 ODS柱（250 mm×4.6 mm，5μm）。結(jié)果，當(dāng)系統(tǒng)條件發(fā)生微小變化時，測定結(jié)果不受影響，各色譜峰之間均能達(dá)到有效的分離。說明本法的耐用性良好，符合測定要求。

2.7 有關(guān)物質(zhì)測定

照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密量取對照溶液20 μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的25%；再精密量取供試品溶液與對照溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜至主成分峰保留時間的2.5倍。供試品溶液的色譜中如顯雜質(zhì)峰，單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1/2（0.5%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（1.0%）。3批樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果見表1。

表1 3批樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果Tab 1 Determination of related substance in 3 batches of samples

3 討論

在進(jìn)行色譜條件篩選時，曾使用不同品牌的150 mm C18色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)多次調(diào)整均不能到達(dá)有效分離的要求，最終確定使用250 mm C18柱。

在進(jìn)行色譜條件優(yōu)化時，發(fā)現(xiàn)主峰拖尾較為嚴(yán)重，后來加入適量三乙胺，可以改善主峰峰形。

破壞試驗(yàn)結(jié)果表明，本品對光、強(qiáng)酸、熱等因素較穩(wěn)定，而對堿、氧化等因素較敏感。

綜上所述，本方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，可用于該制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測。

[1]Ihara M，Ohxishi A，Tomono Y，et al.Pharmacokinetics of E2020，a new compound for Alzheimer’s disease，in healthy male volunteers[J].Int J Clin Pharm Ther Toxi，1993，31（5）：223.

[2]OhnishiA，MiharaM，Kamakura H，et al.Comparison of the pharmacokinetics of E2020，a new compound for Alzheimer’s disease，in healthy young and elderly subjects[J].J Clin Pharmacol，1993，33（11）：1086.

[3]國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].WS1-（X-140）-2004Z.