氣相色譜法測定磁性脂質體中有機溶劑殘留量

張 宏，盧婷利，趙 雯，陳 濤，2

(1.西北工業(yè)大學生命學院 空間生物實驗模擬技術國防重點學科實驗室，陜西 西安 710072； 2.陜西脂質體工程技術研究中心，陜西 西安 710075)

磁性脂質體(Magnetic liposome)是磁導向藥物遞送系統(tǒng)中的一種新型藥物導向載體，是將磁性粒子結合在載藥脂質體中，當其進入體內后，利用體外磁場的作用引導其在體內定向移動，集中到靶部位后釋放藥物，從而避免藥物對正常組織的傷害，使其靶向性和專一性更強，達到快速、高效、低毒的效果[1，2]。目前磁性脂質體多用于腫瘤治療，除可以實現(xiàn)低毒、靶向、緩釋外，在外加交變磁場的作用下，利用磁性粒子發(fā)熱進行熱療，使腫瘤組織細胞升溫至42～47℃，進一步消滅腫瘤細胞[3～5]。

乙醇和氯仿是制備磁性脂質體中溶解脂質膜材經常使用的有機溶劑，若不除去會嚴重影響磁性脂質體的使用安全性，因此應保證乙醇和氯仿在磁性脂質體中的殘留量低于規(guī)定的0.5%和0.006%[6]。磁性脂質體制備過程中一般采用旋轉蒸發(fā)、真空干燥、抽真空等方法來除去有機溶劑[2，7，8]。脂質體中乙醇和氯仿殘留量的氣相色譜檢測法已有報道[9，10]，均采用外標法，雖然操作簡單、方便，但是受儀器和操作的影響誤差較大，且不能同時檢測兩種殘留物。

作者在此采用內標法同時、定量測定磁性脂質體中乙醇和氯仿殘留量，結果令人滿意。

1 實驗

1.1 試劑與儀器

磁性脂質體，自制；無水乙醇、二甲基甲酰胺(DMF)、三氯甲烷，色譜純；二氯甲烷，分析純。

Agilent 6890型氣相色譜儀，美國Agilent公司；氫火焰離子化檢測器(FID)，高純氫氣(99.99%)，高純氮氣(99.99%)，鋼瓶空氣；磁分離架，吉林藍罡生物科技有限公司。

1.2 溶液的配制

(1)內標儲備液的配制

精密稱取二氯甲烷0.1271 g，置于500 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，即為內標儲備液。

(2)對照品溶液的配制

精密稱取乙醇3.7371 g、氯仿0.2952 g，分別置于500 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，搖勻，即為對照品儲備液。分別取上述對照品儲備液1 mL和內標儲備液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

(3)樣品溶液的制備

量取磁性脂質體1 mL，加入2 mLDMF破乳，用磁分離架將磁性粒子分離，量取1 mL澄清液于10 mL容量瓶中，加入1 mL內標儲備液，加DMF定容至刻度，搖勻，即得磁性脂質體樣品溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-5型毛細管柱(30 m×0.32 mm，0.5 μm)；檢測器為FID；載氣為氮氣；分流比為20∶1；柱流量為15 cm·s-1，恒流；進樣量為1.0 μL；進樣口溫度為170℃；檢測器溫度為250℃。色譜柱程序升溫方法為：35℃保持2 min；25℃· min-1升溫到90℃，保持5 min；60℃· min-1升溫到200℃，保持5 min。

2 結果與討論

2.1 保留時間和檢測限的確定

量取對照品溶液1 mL，按色譜條件進樣檢測，色譜圖如圖1所示。

1.乙醇 2. 二氯甲烷 3.氯仿 4.DMF

由圖1可以看出，乙醇、二氯甲烷、氯仿和DMF的分離度良好，保留時間分別為2.688 min、3.060 min、3.456 min和4.876 min。

通過逐級降低濃度，進樣測定，確定檢測限，信噪比為3∶1。結果表明，乙醇、二氯甲烷和氯仿的最低檢測濃度分別為0.10 μg·mL-1、0.07 μg·mL-1和0.05 μg·mL-1。

2.2 線性關系考察

分別精密量取對照品儲備液100 μL、200 μL、400 μL、600 μL、800 μL、1000 μL、1500 μL，置于10 mL容量瓶中，每個容量瓶中分別加入1 mL內標儲備液，用DMF定容至刻度，分別進樣1.0 μL，記錄色譜圖，并測定峰面積。結果表明，在所測濃度范圍內，乙醇(7.47～112.11 μg·mL-1)和氯仿(0.59～8.85 μg·mL-1)的濃度與峰面積/內標峰面積具有良好的線性關系，回歸方程如下：

乙醇：y=1.2162c-0.10513R=0.9996(n=7)

氯仿：y=0.6739c-0.1003R=0.9997(n=7)

2.3 精密度實驗

取對照品溶液，重復進樣5次，進樣量為1.0 μL，測得乙醇與氯仿和二氯甲烷的峰面積比的RSD分別為0.96%、1.33%，表明方法精密度良好。

2.4 回收率實驗

采用加樣回收率測定方法，按高、中、低濃度分別精密量取一定量的對照品儲備液加入到已知氯仿殘留量的1 mL磁性脂質體中，按“樣品溶液的制備”方法處理，分別進樣3次，結果見表1。

表1 回收率實驗結果(n=9)

由表1可知，乙醇和氯仿的平均回收率分別為98.2%和97.3%，RSD≤3.0%(n=9)，表明方法準確可靠。

2.5 樣品測定

精密吸取3個不同批次(100515，100521，100601)的磁性脂質體樣品，得到3個脂質體樣品溶液，每個樣品測3次，進樣量1.0 μL，測定峰面積，根據(jù)回歸方程計算含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果/%

由表2可知，該方法可以準確測定磁性脂質體中乙醇和氯仿的殘留量，并且所測樣品的殘留量符合相關規(guī)定要求。

2.6 討論

2.6.1 溶劑選擇

由于進樣前需要將阿霉素磁性脂質體中的磁性粒子分離，所以選擇有機試劑作為溶劑將脂質體破乳。實驗發(fā)現(xiàn)，乙醚、甲苯等低沸點溶劑均不能很好地將樣品破乳，而二甲基甲酰胺沸點較高，采用頂空進樣法操作不便。因此，本實驗采用直接進樣法同時檢測乙醇和氯仿的殘留量。

2.6.2 色譜柱的選擇

比較了乙醇、氯仿和二甲基甲酰胺在不同色譜柱(HP-5、HP-INNOWAX和DB-1701)下的分離度。結果表明，采用HP-5的分離度最高。

2.6.3 內標物的選擇

由于磁性脂質體在制備過程中經過旋轉蒸發(fā)和抽真空，乙醇和氯仿的殘留量都較少，因此本實驗采用內標法定量以減少儀器和操作帶來的誤差。經過對多種有機試劑進行篩選，其中二氯甲烷、乙醇、氯仿、二甲基甲酰胺的分離度均良好，最終選擇二氯甲烷作為內標物。

3 結論

建立了氣相色譜法(內標法)檢測磁性脂質體中有機溶劑殘留量的方法，乙醇和氯仿在所測范圍內線性關系良好(R>0.9995，n=7)，回收率高，重復性好。該法簡單、快捷、精密可靠，適于磁性脂質體中乙醇和氯仿有機溶劑殘留量的定量檢測。

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