樂肝口服液對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

黃貴明 王冬梅 莫遺盛 李麗

樂肝口服液由雞血藤、黨參、絞股藍(lán)、黃芪等組成，具有提高機(jī)體免疫功能、益氣護(hù)肝等作用。本研究通過該藥對(duì)小鼠急性肝損傷的影響，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑 將方中的中藥用水提取兩次，過濾后濃縮至適量備用。聯(lián)苯雙酯滴丸(浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號(hào):070427);四氯化碳(CCL4，分析純，中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司，批號(hào)W20010202);丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)測定試劑盒，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)測定試劑盒及丙二醛(MDA)測定試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.1.2 動(dòng)物 清潔級(jí)小鼠，雌雄各半，體重(20±2)g，由廣西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):桂醫(yī)動(dòng)字11004號(hào)。

1.1.3 儀器 紫外可見分光光度計(jì)(Agilent 8453);高速微量離心機(jī)(LG16-W，北京醫(yī)用離心機(jī)廠);高速低溫離心機(jī)(德國Biofugestrutos);日本島津電子天平(LIBROR.AEU-210);超聲波細(xì)胞破碎機(jī)(JY92-IID，寧波新芝科器研究所);數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-8，國華電器有限公司);液體快速混合液(YKH-1，江西醫(yī)療器械廠)。

1.1.4 方法 將小鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、樂肝口服液高、中、低劑量組，陽性對(duì)照組(聯(lián)苯雙酯100 mg/kg·d)共6組，每組12只。實(shí)驗(yàn)組適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，分別灌胃給予生理鹽水或相應(yīng)藥物，1次/d，連用7 d，第7天給藥1 h之后，除正常組外其余各組腹腔注射含0.5%CCL4花生油10 ml/kg，造模后再給藥2次，末次給藥后禁食不禁水24 h，稱體重，摘眼球取血，剖取肝臟［1］。血樣3500 r/min離心10 min，取血清，按試劑盒操作說明檢測AST、ALT。準(zhǔn)確稱取相同位置肝臟0.5 g，加生理鹽水5 ml，制成10%肝勻漿液，按試劑盒說明檢測MDA。

1.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS11.0統(tǒng)計(jì)分析。各組數(shù)據(jù)以表示，組間差異用t檢驗(yàn)判斷有無顯著性。

2 結(jié)果

樂肝口服液對(duì)急性肝損傷小鼠血清ALT、AST活性的影響，以及對(duì)小鼠肝組織MDA影響，結(jié)果見表1。

表1 樂肝口服液對(duì)小鼠血清ALT、AST活力和肝勻漿中MDA的影響( ± s，n=12)

表1 樂肝口服液對(duì)小鼠血清ALT、AST活力和肝勻漿中MDA的影響( ± s，n=12)

注:與正常對(duì)照組比較*P＜0.05，與模型組比較＊＊P＜0.05

組別 劑量(mg/kg·d)ALT(IU/L)AST(IU/L)MDA(nmol/mg)正常對(duì)照組-27.61±2.15 45.36±3.42 6.5±1.7模型組 - 398.23±60.47* 436.58±53.64* 11.2±2.8*樂肝高劑量組 55 150.14±25.11＊＊ 193.22±33.02＊＊ 8.8±1.5＊＊樂肝中劑量組 27.5 101.56±18.65＊＊ 147.68±28.93＊＊ 7.3±2.3＊＊樂肝低劑量組 13.7 89.07±22.87＊＊ 121.15±11.26＊＊ 6.9±1.6＊＊陽性對(duì)照組 100 77.49±14.34＊＊ 85.41±25.49＊＊ 8.0±2.1＊＊

由表1可知，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠ALT、AST，MDA水平明顯升高(P＜0.05)，表示造模成功。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與模型組比較，樂肝口服液高、中、低劑量組的血清AST、ALT活力及肝臟MDA含量有顯著性降低(P＜0.05)，表明樂肝口服液可抑制CCL4造成的ALT、AST、MDA活性升高，對(duì)肝損傷有一定的保護(hù)作用。

3 討論

CCL4所致急性肝損傷為目前國際常用的肝炎模型之一，其中毒機(jī)制主要是CCL4進(jìn)入機(jī)體后產(chǎn)生自由基，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)和功能完整性破壞，使血清中ALT和AST含量增高;同時(shí)由CCL4產(chǎn)生的自由基會(huì)啟動(dòng)肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，致使肝臟組織中的MDA含量升高［2］。因此檢測血清中ALT、AST含量及肝組織中MDA含量是評(píng)價(jià)肝損傷的重要指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CCL4造模組與正常組比較，ALT、AST、MDA明顯升高，給予樂肝口服液后三個(gè)指標(biāo)明顯降低，提示樂肝口服液具有保護(hù)肝細(xì)胞膜作用，使細(xì)胞膜通透性降低，抑制細(xì)胞內(nèi)酶釋放，維持細(xì)胞膜的正常結(jié)構(gòu);且可以清除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而改善肝損傷，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，對(duì)肝損傷有一定的保護(hù)作用，為該藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

［1］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué).人民衛(wèi)生出版社，2000:943.

［2］楊莉，梁泰剛.養(yǎng)心草對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，10(6):17-18.