附子及川貝母合煎薄層指紋圖譜研究

趙海峰 梁 曉 趙 錦 張蓉娟 王崔春利 陜西中醫(yī)學院(咸陽 712046)

中藥十八反是一個爭議最多的課題。其中認為烏頭反貝母。兩藥合用一直視為配伍禁忌。直至現(xiàn)行的藥典也這樣記載[1]。但是烏頭、貝母合用產(chǎn)生相互作用的機制并不清楚。翁小剛,邊寶林等人通過實驗證實合煎液中烏頭次堿含量增加[2、3]。肖成榮等人發(fā)現(xiàn)半蔞貝蘞芨配伍烏頭對大鼠肝細胞色素 P450酶含量有一定的影響[4]。趙海峰等人實驗證實附子和浙貝母合煎其化學成分發(fā)生變化,或是某些成分溶出度增加[5]。那么其他貝母是否發(fā)生如此現(xiàn)象,我們通過應用薄層色譜法比較烏頭、川貝母合煎與單煎化學成分的變化,為十八反相互作用的機制提供實驗依據(jù)

1 實驗儀器與試藥

硅膠 G為青島海洋化工集團干燥廠產(chǎn)品;試劑均為分析純。紫外分析儀為上海京科實業(yè)公司生產(chǎn)。制附子、川貝母購于西安飲片廠。

2 供試品溶液制備

2.1 水煎液的制備 2.1.1 川貝母單煎液:稱取川貝母 10g,浸泡 30min,煎煮 30min,倒出煎煮液,殘渣加水再煎 20min,合并兩次煎煮液,煎煮液標記為A。

2.1.2 合煎液:稱取附子、川貝母各 10g,附子加入開水先煎 30min,再加入浸泡 30 min的川貝母,合煎 30min,倒出合煎液,殘渣加水煎 20min,合并煎煮液,煎煮液標記為 B。

2.1.3 制附子單煎液:稱取制附子 10g,加入開水煎煮 60min,倒出煎煮液,殘渣加水再煎 20min,合并兩次煎煮液,煎煮液標記為 C。

2.2 樣品制備 將上述制備好的水煎液 A、B、C分別依次用石油醚(30～60℃)、乙醚、正丁醇萃取各2次,每次 30mL,石油醚 (30～60℃),乙醚萃取液作為其他實驗用,合并正丁醇萃取液,水浴蒸干,各用甲醇 2mL使溶解,得樣品正丁醇樣品:A3、B3、C3。

3 薄層分析方法

3.2 正丁醇萃取液的薄層分析 照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗,吸取上述A3、B3、C3供試品溶液各 10 μL,分別點于同一羧甲基纖維素納為粘合劑的硅膠 G薄層板上,以正丁醇-乙酸乙酯 -水 (4∶ 1∶ 5,上層 )為展開劑 ,展開 ,展距大于18cm,取出,晾干,噴 10%硫酸乙醇在 105℃烘 3min,在紫外光燈(365nm)下檢視。圖譜如下:

1、2為 A3川貝母單煎;3、4為 B3合煎液;5、6為 C3附子單煎液

4 結果討論

經(jīng)過 5個不同批次的藥材多次重復實驗,薄層色譜顯示合煎液色譜明顯較單煎液不同,有新的斑點出現(xiàn)。在重新展的薄層板上觀察上述 10%硫酸乙醇顯色的 2個日光斑點,噴稀碘化鉍鉀日光下顯紅色斑點,重復性良好。

對于中藥“十八反”配伍研究主要集中在其配伍后使附子的有效成分烏頭堿、次烏頭堿的煎出含量變化上[2,3]及對機體細胞的影響上面[4],此次薄層分析附子和川貝母合煎其化學成分是否會發(fā)生變化,色譜圖給出明確肯定的回答。

通過以上實驗發(fā)現(xiàn),直接紫外燈 365nm下觀察第3批次川貝母薄層色譜中在展開圓點附近斑點較多,合煎液相應位置沒有斑點出現(xiàn);直接紫外燈 365nm下觀察,合煎液中明顯有新的斑點出現(xiàn),同時發(fā)現(xiàn)第 3批合煎液斑點和前兩批藥材斑點差別較大。噴 10%硫酸乙醇,105℃加熱數(shù)分鐘后置紫外燈 365nm下觀察,效果明顯。但是日光下的斑點一直沒有出現(xiàn)。變化主要發(fā)生在兩個方面:①川貝母單煎液中的明顯斑點在合煎液中找不到相應斑點;②合煎液中明顯出現(xiàn)了單煎液中沒有的斑點。提示可能成分發(fā)生變化。提示合煎過程中成分發(fā)生了變化,三批藥材可能因產(chǎn)地不同,化學成分有差異。

這一實驗結果給十八反的研究提示了一個新的研究方向:十八反毒性成分是否為新生化合物引起或有些毒性成分溶出度增加引起,有待進一步研究。

[1] 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學工業(yè)出版社 ,2005:132.

[2] 翁小剛,聶淑琴,黃璐琦.HPLC測“半蔞貝蘞芨攻烏”中烏頭與其他諸藥合煎前后次烏頭堿的含量變化 [J].中國藥學雜志,2004,39(1):57-59.

[3] 邊寶林.附子單煎以及與浙貝母合煎后烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿等有毒成分的含量變化研究[J].中國實驗方劑學雜志,2006,12(4):9-10.

[4] 肖成榮.半蔞貝蘞芨配伍烏頭對大鼠肝細胞色素P450酶含量的影響 [J].天津中醫(yī)藥 ,2004,21(4):311.

[5] 趙海峰.附子浙貝母合煎薄層指紋圖譜的研究[J].陜西中醫(yī),2009,30(4):480-481.