姜黃素、小檗堿及其配伍對(duì)db/db小鼠糖脂代謝的影響*

高 艷，崔廣智，李慧穎，張艷軍，劉 洋

目前報(bào)道小檗堿具有降糖調(diào)脂、降低體質(zhì)量、改善胰島素抵抗[1]等作用，姜黃素具有降血糖、降血脂[2]等作用。在前期的研究中，筆者者發(fā)現(xiàn)小檗堿和姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞株Hep-G2的不同路徑上的糖脂代謝的關(guān)鍵基因的具有調(diào)節(jié)作用。因此筆者擬將姜黃素、小檗堿進(jìn)行配伍組合，作用于Ⅱ型糖尿病動(dòng)物模型，觀察其對(duì)糖尿病小鼠糖脂代謝的影響。望尋找到合理的中藥配伍關(guān)系，并為中藥配伍合理性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 db/db小鼠，雄性，51只，6～8周齡，體質(zhì)量30～40g；C57BL/6J小鼠，雄性，6只，6～8周齡，體質(zhì)量15～20g。由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（滬）2007-0005。

1.2 藥品與試劑 姜黃素自微乳，載藥量40 mg/g，4℃避光保存?zhèn)溆?天津中醫(yī)藥大學(xué)藥劑室制備）；小檗堿（天津市一方科技有限公司，純度97%，批號(hào)：20070108）；吐溫80（天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20051029）；總膽固醇（CHO）試劑盒（批號(hào)：070331）；甘油三酯（TG）試劑盒（批號(hào)：071211）；低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）試劑盒（批號(hào)：070092）；高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）試劑盒（批號(hào)：070082）；CHO、TG、LDL－C 和 HDL－C 均由中生北控生物科技股份有限公司提供。

1.3 儀器 美國強(qiáng)生穩(wěn)豪型血糖儀；試紙（批號(hào)：2741317）；半自動(dòng)生化分析儀（荷蘭威圖科學(xué)公司，型號(hào)：300）；低溫高速離心機(jī)（BECKMAN，美國AllegraTM64R Centrifuge）。

2 方法

2.1 分組及給藥 取C57BL/6小鼠6只和db/db小鼠51只，所有小鼠均給予高脂飼料喂養(yǎng)。C57BL/6小鼠為正常對(duì)照組，db/db小鼠51只小鼠隨機(jī)分為9組，每組5～6只，分別為模型對(duì)照組、姜黃素高劑量（39 mg/kg）組、姜黃素低劑量（19.5 mg/kg）組、小檗堿高劑量（144mg/kg）組、小檗堿低劑量（72mg/kg）組、姜黃素低劑量（19.5mg/kg）小檗堿低劑量（72mg/kg）配伍組、姜黃素高劑量（39 mg/kg）小檗堿低劑量（72 mg/kg）配伍組、姜黃素低劑量（19.5 mg/kg）小檗堿高劑量（144mg/kg）配伍組、姜黃素高劑量（39 mg/kg）小檗堿高劑量（144 mg/kg）配伍組。正常組和模型對(duì)照組給予生理鹽水，姜黃素自微乳用生理鹽水配制，小檗堿用含1%吐溫80的生理鹽水溶液配制，灌胃給藥28 d，1次/d，給藥體積為0.005 mL/g。

2.2 樣本的采集與制備 小鼠給藥28 d，每日記錄各組小鼠體質(zhì)量變化。并于末次給藥1 h后測(cè)量基礎(chǔ)血糖。隨后灌胃給予葡萄糖2g/kg，分別于口服葡萄糖 0、15、30、45、60、90 min 后，測(cè)量血糖值，描述糖耐量曲線。目內(nèi)眥取血，3 000 r/min離心15 min，取血清，生化儀測(cè)定CHO、TG、HDL-C、LDL-C的含量。最后處死動(dòng)物，取附睪、右側(cè)皮下脂肪、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦及胰臟稱質(zhì)量。

2.3 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用單因素方差分析（one-way ANOVA）進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 姜黃素、小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠28 d體質(zhì)量變化的影響 給藥28 d后，小檗堿高劑量（144 mg/kg）組、姜黃素高劑量（39 mg/kg）小檗堿高劑量（144 mg/kg）配伍組體質(zhì)量先出現(xiàn)小幅度下降后上升，其余各組體質(zhì)量均持續(xù)平穩(wěn)的增長，各給藥組對(duì)db/db小鼠體質(zhì)量變化無顯著性差異。

3.2 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠各臟器系數(shù)的影響 臟器系數(shù)的結(jié)果顯示：模型組的肝臟系數(shù)顯著大于正常組（P<0.05），各給藥組可明顯降低db/db小鼠的肝臟系數(shù)（P<0.05），各組間對(duì)其他臟器系數(shù)的影響無顯著性差異。

3.3 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠基礎(chǔ)血糖的影響 與模型組比較，姜黃素低劑量（19.5 mg/kg）小檗堿高劑量（144 mg/kg）配伍組和姜黃素高劑量（39 mg/kg）小檗堿高劑量（144 mg/kg）配伍組可顯著降低db/db小鼠的基礎(chǔ)血糖（P<0.05），見表1。

3.4 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠糖耐量曲線的影響 正常組小鼠口服葡萄糖后，血糖迅速升高持續(xù)15 min開始下降；而模型組血糖持續(xù)較高，60min后呈下降趨勢(shì)；姜黃素低劑量（19.5mg/kg）小檗堿高劑量（144 mg/kg）配伍組和姜黃素高劑量（39 mg/kg）小檗堿高劑量（144 mg/kg）配伍組始終維持較低血糖水平，表明上述兩組具有較好的改善糖耐量的作用，見圖1。

表1 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠基礎(chǔ)血糖的影響（±s）

表1 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠基礎(chǔ)血糖的影響（±s）

注：與模型組比較，*P<0.05。

組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組姜黃素高組姜黃素低組小檗堿高組小檗堿低組姜黃素低小檗堿低組姜黃素高小檗堿低組姜黃素低小檗堿高組姜黃素高小檗堿高組n6666656655基礎(chǔ)血糖（mmol/L）8.58±0.92*26.20±4.88 24.75±5.45 24.10±4.96 23.50±9.47 20.64±5.52 26.55±5.30 24.95±6.95 15.08±3.07*16.60±3.61*

圖1 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠糖耐量曲線的影響

3.5 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠血清CHO、TG、HDL-C和LDL-C的影響 與模型對(duì)照組相比較，姜黃素低劑量（19.5 mg/kg）組、姜黃素高劑量（39 mg/kg）小檗堿低劑量（72 mg/kg）配伍組和姜黃素低劑量 （19.5 mg/kg）小檗堿高劑量（144 mg/kg）配伍組可顯著降低TG含量（P<0.05），各組間對(duì)CHO、HDL-C和LDL-C的影響無顯著性差異，見表2。

4 討論

姜黃素是從姜黃中提取的植物多酚，其具有藥理學(xué)安全性[3]，能清除自由基，減輕氧化應(yīng)激[4]。小檗堿是黃連中的主要生物堿，已應(yīng)用于促進(jìn)肝細(xì)胞攝取葡萄糖和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[5]。近年來，糖尿病發(fā)病率逐年升高，Ⅱ型糖尿病占糖尿患者數(shù)的95%以上。故本實(shí)驗(yàn)將具有糖脂調(diào)節(jié)作用的姜黃素及小檗堿作用于遺傳性肥胖型Ⅱ型糖尿病動(dòng)物模型db/db小鼠，由于 db是 Jackson Laboratory在 1966年于C57BL品系小鼠發(fā)現(xiàn)糖尿病突變基因，故將C57BL小鼠作為正常對(duì)照，研究姜黃素及小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠糖脂代謝的影響。

表2 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠CHO、TG、HDL-C、LDL-C 的影響（±s）mmol/L

表2 姜黃素小檗堿分別及其配伍對(duì)db/db小鼠CHO、TG、HDL-C、LDL-C 的影響（±s）mmol/L

注：與模型組比較，*P<0.05。

組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組姜黃素高組姜黃素低組小檗堿高組小檗堿低組姜黃素低小檗堿低組姜黃素高小檗堿低組姜黃素低小檗堿高組姜黃素高小檗堿高組n6666656655 CHO 3.84±1.07 5.27±1.17 5.70±0.80 5.42±0.39 4.52±1.29 5.01±1.07 6.02±1.30 6.78±1.58 4.02±0.63 5.34±1.76 TG 1.25±0.28*3.08±1.90 2.44±0.59 1.52±0.37*1.98±0.67 2.04±0.77 2.05±1.79 1.73±1.05*1.15±0.11*2.02±0.60 HDL-C 1.61±0.23*2.46±0.43 2.73±0.45 2.49±0.37 2.09±0.27 2.02±0.35 2.53±0.80 2.71±0.43 2.21±0.30 2.38±0.31 LDL-C 0.82±0.25 0.86±0.59 0.82±0.25 0.80±0.44 1.07±0.40 0.83±0.59 0.93±0.45 1.01±0.80 0.40±0.11 0.95±0.70

肝臟是人體主要的代謝器官，在糖脂代謝中起著關(guān)鍵作用。糖尿病的發(fā)展過程伴隨著肝組織的氧化損傷，既而伴隨著肝臟系數(shù)的變化[6]。在本實(shí)驗(yàn)中，給藥28 d后模型組的肝臟系數(shù)明顯高于正常對(duì)照組，而各給藥組作用后，與模型組相比均有降低db/db小鼠的肝臟系數(shù)的作用（P<0.05），表明姜黃素與小檗堿配伍對(duì)肝臟也具有一定的保護(hù)作用。

通過姜黃素和小檗堿對(duì)db/db小鼠基礎(chǔ)血糖的影響可以看出，單獨(dú)給藥組降低基礎(chǔ)血糖的作用不及部分配伍給藥組明顯，說明姜黃素與小檗堿配伍后可以增強(qiáng)小檗堿的降低基礎(chǔ)血糖的作用。從藥物對(duì)脂質(zhì)代謝的結(jié)果可以看出，模型組與正常組比較，血清中的TG、HDL-C明顯升高，姜黃素與小檗堿配伍后具有明顯降低TG的作用。降血糖作用的單味或復(fù)方中藥較多，但兼具降糖、調(diào)脂作用的為數(shù)不多。姜黃素與小檗堿配伍后不僅可以降血糖同時(shí)可以調(diào)節(jié)血脂，且姜黃素低劑量（19.5 mg/kg）小檗堿高劑量（144 mg/kg）配伍組在降血糖、改善糖耐量與調(diào)節(jié)血脂等方面綜合表現(xiàn)出更為明顯的療效。姜黃具有行氣破瘀、通經(jīng)止痛、清心解毒等功效，肖小河等[7]認(rèn)為其降脂作用可能與促進(jìn)膽囊對(duì)膽固醇的排泄和抑制脂肪酸合成有關(guān)。小檗堿具有清熱燥濕之功，是中醫(yī)治療消渴病的常用藥。其降糖作用是通過抑制糖原異生、促進(jìn)糖酵解，抑制葡萄糖的吸收，促進(jìn)胰島素分泌，增加胰島素敏感性，促進(jìn)胰島β細(xì)胞功能恢復(fù)等途徑達(dá)到的[8]。小檗堿降脂作用的機(jī)制為上調(diào)肝臟低密度脂蛋白受體，降低三酰甘油與膽固醇的合成，抑制脂肪細(xì)胞分化。

本實(shí)驗(yàn)表明姜黃素與小檗堿的配伍較之單獨(dú)應(yīng)用小檗堿或姜黃素能更全面、有效地調(diào)節(jié)糖尿病大鼠的糖脂代謝。但其配伍作用的調(diào)節(jié)機(jī)制目前還不能闡明，在下一步的研究中，希望在明確各主要成分藥理效應(yīng)的基礎(chǔ)上，探尋各成分間協(xié)同作用的機(jī)制，望為加速中藥配伍現(xiàn)代化作出貢獻(xiàn)。

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