不同產(chǎn)地青風(fēng)藤中青藤堿的含量比較

瞿發(fā)林，董文燊，劉 蓉，楊 婷，湯莉娜

(中國(guó)人民解放軍第102醫(yī)院，江蘇 常州 213003)

青風(fēng)藤為防己科植物青藤 Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.及毛青藤 Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.var.cinereum Rehd.et Wils.的干燥藤莖，主要分布于河南、安徽、江蘇、浙江、福建、廣東、廣西、湖北、四川、貴州、陜西等地[1]。青風(fēng)藤的主要化學(xué)成分為青藤堿、雙青藤堿、木蘭花堿、尖防己堿、四氫表小檗堿、異青藤堿、土杜拉寧、清風(fēng)藤堿、dl-丁香樹脂酚、十六烷酸甲酯、N-去甲基尖防已堿、白蘭花堿、光千金藤堿，以及β-谷甾醇、豆甾醇。筆者采用高效液相色譜法[2-3]測(cè)定了不同產(chǎn)地青風(fēng)藤的青藤堿含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters系列高效液相色譜儀，Waters CapLC2487雙λ吸光度檢測(cè)器，Empower2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國(guó)Waters公司);FA1004電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠);AE240S型電子分析天平(梅特勒-拖利多儀器有限公司);SB5200型超聲波發(fā)生器(上海必能信超聲有限公司)。青風(fēng)藤(常州市華爾神中藥飲片廠，并經(jīng)中國(guó)人民解放軍第102醫(yī)院瞿發(fā)林主任藥師鑒定);青藤堿(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0774-200206);甲醇(色譜純)，乙二胺(分析純)，水(重蒸餾水)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Lichrospher C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水-乙二胺(40∶60∶0.2);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):262 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20 μL。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取青藤堿對(duì)照品12.5 mg，置25 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(1 mL含青藤堿0.5 mg)。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密吸取對(duì)照品溶液 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，分別置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別編號(hào)為1，2，3，4，5號(hào)，原液作為6號(hào)。照高效色液相色譜法，依次進(jìn)樣20 μL測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，按最小二乘法進(jìn)行直線回歸，得回歸方程 Y=2×107X-57424，r=0.9998(n=6)。結(jié)果表明，青藤堿進(jìn)樣量在1～10 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取青藤堿對(duì)照品溶液(1.0 mg/mL)，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.99%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):吸取同一份供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h時(shí)進(jìn)樣20 μL。結(jié)果峰面積的 RSD為1.17%(n=5)。

重復(fù)性試驗(yàn):取江蘇產(chǎn)(批號(hào)為070227)青風(fēng)藤藥材粉末，精密稱取5份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定。結(jié)果樣品的青藤堿平均含量為8.31 mg/g，RSD為1.37%(n=5)。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取江蘇產(chǎn)(批號(hào)為070227)青風(fēng)藤藥材粉末6份，約0.25 g，精密稱定，再分別加入青藤堿對(duì)照品貯備液，依法制備供試液品溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 青藤堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取青風(fēng)藤適量，粉碎后過三號(hào)篩，取藥材粉末約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率20 kHz)20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。依法測(cè)定，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

3 討論

結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的青風(fēng)藤中青藤堿含量有差異，即使是同一產(chǎn)地，因采集的時(shí)間不同含量也有差異。5批青風(fēng)藤藥材的青藤堿含量最高值為1.90%，最低值為0.58%，差別較大，但都不低于0.5%，符合藥典規(guī)定。在試驗(yàn)中觀察到，青藤堿含量與藥材飲片的色澤有一定關(guān)系，飲片表面呈綠褐色的藥材中青藤堿含量較高，呈棕褐色或灰褐色的藥材含量次之，而表面呈灰黃色的藥材含量較低。

表2 不同產(chǎn)地樣品中青藤堿含量(n=3)

采用高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地青風(fēng)藤的青藤堿含量，方法簡(jiǎn)便、可靠，為優(yōu)選藥材提供了參考。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊(cè))[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986:1234-1236.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:135.