李曉楠 金素芬 王長(zhǎng)友

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌，居女性惡性腫瘤的第二位[1]。人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是宮頸癌的主要病因[2]。根據(jù)致病力的大小分為高危型的低危型，流行病學(xué)證明，高危型HPV感染是子宮頸炎癥和宮頸上皮內(nèi)病變高發(fā)的主要危險(xiǎn)因素，而低危型HPV主要引起宮頸非特異性炎癥或尖銳濕疣。另外，有文獻(xiàn)報(bào)道，HPV感染基因分型有地理性，因此，對(duì)HPV進(jìn)行準(zhǔn)確的基因分型，明確患者感染的高、低危型別以及了解本地區(qū)常見(jiàn)的HPV感染型別，對(duì)HPV感染的治療，宮頸癌的預(yù)防以及基因疫苗的研制具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)采用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)對(duì)815例門診女性患者HPV感染分型檢測(cè)，了解鞍山地區(qū)宮頸病變常見(jiàn)的HPV感染型別，探討不同亞型HPV感染的致癌性，進(jìn)一步為宮頸癌的防治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2009年5月至2010年3月于鞍山市中心醫(yī)院婦科門診接受HPV感染檢測(cè)的患者宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本(815例)，同時(shí)進(jìn)行宮頸病理學(xué)診斷，按病理結(jié)果分為炎癥組583例，尖銳濕疣組15例，CINI組89例，CINII組77例，CINIII組42例，宮頸癌組9例。

1.2 HPV-DNA檢測(cè)方法 采用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)檢測(cè)21種HPV亞型，可判斷多重感染，包括13種高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59 和 68)和 5種低危型(6、11、42、43、44)和 3 種中國(guó)人常見(jiàn)亞型(53、66、CP8304)。雜交過(guò)程包括:①樣本DNA提取;②PCR擴(kuò)增;③導(dǎo)流雜交;④結(jié)果判斷:肉眼觀察檢測(cè)結(jié)果:陽(yáng)性點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)紫色圓點(diǎn)，根據(jù)芯片上HPV分型分布相應(yīng)的點(diǎn)判斷HPV亞型，多點(diǎn)陽(yáng)性即為多重感染。

1.3 CIN的診斷標(biāo)準(zhǔn) 宮頸鱗狀上皮非典型增生及原位癌按Richart標(biāo)準(zhǔn)，分為CINI、CINII和CINIII三個(gè)級(jí)別病理診斷行盲法閱片。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算分析，各HPV基因型陽(yáng)性率采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較，為雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鞍山地區(qū)女性 HPV感染的基因型815例女性宮頸脫落細(xì)胞中，除HPV 35以外，其余20種HPV亞型均被檢出，本組患者HPV感染最常見(jiàn)的10種基因型分別為HPV 16(16.32%)，HPV 58(5.88%)，HPV 52(3.93%)，HPV 33(2.82%)，HPV 31(2.09%)，HPV 11(1.84%)，HPV 53(1.47%)，HPV 18(1.23%)，HPV 68(1.10%)，HPV 66(0.98%)。

2.2 不同級(jí)別宮頸病變HPV感染的型別分布 CINI組中，HPV感染的型別分布依次為HPV 16、HPV 58、HPV 52、HPV 31、HPV 33。CINII組中，HPV感染的型別分布依次為HPV 16、HPV 58、HPV 52、HPV 331、HPV 31。CINIII組中，HPV 感染的型別分布依次為 HPV 16、HPV 33、HPV 31、HPV 52、HPV 53。可見(jiàn)隨著宮頸病變級(jí)別的升高，HPV感染亞型趨于集中，HPV16的檢出率在所有宮頸病變種居于首位，且隨宮頸病變級(jí)別的升高而升高。

3 討論

3.1 宮頸癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，全球發(fā)病率最高是南非，其次在亞洲，據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界上每年的新發(fā)病例約46萬(wàn)，每年約有25萬(wàn)人死于宮頸癌。在我國(guó)，每年宮頸癌的新發(fā)病例數(shù)超過(guò)13萬(wàn)，每年死于宮頸癌的婦女約有2萬(wàn)人。人乳頭瘤病毒HPV被公認(rèn)為是宮頸癌發(fā)生的必要病因，迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HPV亞型超過(guò)200種，其中85種HPV基因克隆被鑒定，另有120種部分基因被鑒定，其中30余種從生殖道分離得到[3]。2005年國(guó)際癌癥研究所(IARC)明確提出13種 HR-HPV，包括 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型[4]。本實(shí)驗(yàn)顯示在815例患者中常見(jiàn)的HPV感染亞型為 HPV16、58、52、33、31，均為高危型，再次證實(shí)了 HRHPV感染是導(dǎo)致宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)病變的主要原因。

3.2 HPV亞型分布的地域性差異 文獻(xiàn)報(bào)道，HPV感染基因型分布有地理性，在國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)研究協(xié)會(huì)(IARC)的最新研究中，宮頸癌患者10種最常見(jiàn)的亞型為16(57.40%)，18(16.60%)，45(6.80%)，31(4.30%)，33(3.70%)，52(2.50%)，58(2.30%)，(2.20%)，59(1.50%)，56(1.30%)。非洲較為流行的是HPV45和33，歐洲流行的是HPV45，南北美洲是HPV31，33和45，亞洲相對(duì)流行的是HPV58和52。國(guó)內(nèi)高艷娥等[5]應(yīng)用熒光偏振對(duì)上海地區(qū)感染型別的研究中，前四位依次是HPV16、18、58、31。劉敏報(bào)道的山東地區(qū)女性常見(jiàn)的基因型為 HPV16、52、58、18、11。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，鞍山地區(qū)女性HPV感染型別依次為16、58、52、33、31，這與世界范圍及國(guó)內(nèi)的研究結(jié)果不同，表明，HPV感染基因型分布存在地域性差異，因此，對(duì)不同區(qū)域人群進(jìn)行HPV分型檢測(cè)及流行病學(xué)的調(diào)查對(duì)宮頸癌的早期防治和疫苗的研究有重要意義。

[1]Cai HB，Ding XH，Chen CC.Prevalence of Single and Multiple Human Papillomavirus Types in Cervical Cancei and Precursor Lesions in Hubei，China.Oncology，2009，76:157-161.

[2]Misra JS，Srivastava S，Singh U，et al.Risk-factors and strategies for control of carcinoma cervix in India:Hospital based cytological screening experience of 35 years.Indian J Cancer，2009，46(2):155-159.

[3]Eileen MB.Human papillomavirusand cervicalcancer.Clinical Microbiology Revlews，2003，16(1):1-17.

[4]Plante M，Lau S，Brydon L，et al.Neoadjuvant chemotherapy followed in bulky stage IB1 cervical cancer:case report.Gynecol Oncol，2006，101(2):367-370.

[5]高艷娥，張菊，吳靜.宮頸癌組織人乳頭瘤病毒的熒光偏振基因分型.生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào)，2003，35(11):1029-1034.