張慧漲 方強(qiáng)

(復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院檢驗(yàn)科,上海 200540)

胰島素由胰腺內(nèi)散在的胰島β細(xì)胞合成并以內(nèi)分泌的形式進(jìn)入血液,是調(diào)節(jié)糖代謝的重要激素之一。其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確與否,直接關(guān)系到對(duì)糖尿病患者的診斷和治療。分離膠能隔離血清與血細(xì)胞的接觸,從而保證了血清的純凈度,并且分離膠又具有快速分離血清的優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)在真空采血管在臨床的大量應(yīng)用,我們就分離膠血清與普通血清在胰島素的測(cè)定的差異性方面進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)對(duì)比分析,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 受試對(duì)象 我院就診患者,其中男性22例,女性18例;年齡36～75歲,平均年齡為45歲。

1.2 材料 雅培I2000化學(xué)發(fā)光儀,試劑為雅培公司配套試劑盒;全自動(dòng)血球分析儀XE-2100(SYSMEX有限公司提供)試劑為SYS-MEX有限公司配套試劑盒。采血管包括分離膠真空采血管和普通真空采血管,都由廣州陽(yáng)普有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 不同標(biāo)本對(duì)胰島素測(cè)定影響的實(shí)驗(yàn) (1)標(biāo)本的采集：用分離膠真空采血管和普通真空采血管連續(xù)收集30例我院就診患者空腹靜脈血,每管5 mL,3000 r?min-1離心10 min,分離出血清待測(cè),檢測(cè)后血清放置4℃冰箱保存待測(cè)。(2)標(biāo)本的測(cè)定：用化學(xué)發(fā)光法儀分別于采血即時(shí)、采血后1 h、4 h、24 h、48 h測(cè)定胰島素濃度。

1.3.2 溶血對(duì)胰島素測(cè)定影響的實(shí)驗(yàn) (1)標(biāo)本的采集：用真空采血管抽取10例患者靜脈血5 mL,3000 r?min-1離心10 min,先分離出1 mL血清置于另一管中待測(cè),剩余的血清管用竹簽攪拌,使部分紅細(xì)胞破裂而產(chǎn)生溶血。(2)血清處理：用XE-2100測(cè)定每份溶血標(biāo)本的血紅蛋白(Hb)濃度,再用該患者非溶血血清稀釋,得到溶血程度分別為1 g?L-1、2 g?L-12種不同程度的溶血標(biāo)本。(3)標(biāo)本的測(cè)定：將2種不同溶血程度的標(biāo)本和非溶血標(biāo)本分成2份,分別放置在4℃室溫中,分別于即時(shí)、第1和第4 h測(cè)定胰島素濃度。

2 結(jié) 果

2.1 不同血標(biāo)本對(duì)胰島素濃度測(cè)定結(jié)果的影響見(jiàn)表1。

2.2 溶血對(duì)胰島素濃度測(cè)定結(jié)果的影響 見(jiàn)表2。

表1 不同血標(biāo)本對(duì)胰島素濃度(μ mol?L-1)測(cè)定結(jié)果的影響()

表1 不同血標(biāo)本對(duì)胰島素濃度(μ mol?L-1)測(cè)定結(jié)果的影響()

注：與普通管不分離血清結(jié)果比較,*P＜0.05

表2 溶血對(duì)胰島素濃度(μ mol?L-1)測(cè)定結(jié)果的影響()

表2 溶血對(duì)胰島素濃度(μ mol?L-1)測(cè)定結(jié)果的影響()

注：溶血程度以血紅蛋白濃度(g?L-1);與0 g?L-1溶血標(biāo)本組比較,*P＜0.05,**P＜0.01

3 討 論

胰島素由胰島β細(xì)胞合成,由α鏈和β鏈組成,其中α鏈含21個(gè)氨基酸,β鏈含30個(gè)氨基酸,2個(gè)肽鏈有二硫鍵連接。胰島素分子量為5734,等電點(diǎn)為5.35～5.34,其生物半衰期很短,僅為 15min,由于以上結(jié)構(gòu)和特性,使胰島素在高溫和堿性條件下極不穩(wěn)定。胰島素的測(cè)定對(duì)糖尿病分型及臨床用藥具有重要作用[1]。胰島素濃度測(cè)定是臨床常用的重要檢查項(xiàng)目,其結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響到糖尿病患者的診斷和治療,要獲得準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)數(shù)據(jù),有賴于建立一套完整的質(zhì)量保證體系。在日常工作中存在很多偶然因素可能直接影響其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,如：標(biāo)本采集方法及時(shí)間保存方法、取血部位、測(cè)定方法、測(cè)定時(shí)間、藥物干擾等。

本研究對(duì)我院30例就診患者進(jìn)行分離膠真空采血管和普通真空采血管采血,并于采血即時(shí)、采血后1 h、4 h、24 h、48 h測(cè)定胰島素濃度。即時(shí)分離之血清與分離膠真空管血清的胰島素濃度測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著差異;普通真空采血管未分離血清與分離膠真空管血清在第4小時(shí)測(cè)定胰島素濃度無(wú)顯著差異,而到第24小時(shí)、48小時(shí)時(shí)兩者結(jié)果有顯著差異。其原因?yàn)榉蛛x膠分離血清后,血清和血細(xì)胞之間形成固有屏障,使血清和血細(xì)胞完全分離,保證了血清成分穩(wěn)定,普通真空采血管即時(shí)分離血清,由于血清另存于干燥試管與血細(xì)胞分開(kāi),因此測(cè)定結(jié)果亦較穩(wěn)定。

分離膠真空采血管中的分離膠是具有觸變性的膠體,氣密性好,密度正好在血清和血細(xì)胞之間。當(dāng)離心分離樣本時(shí),分離膠將血清與血細(xì)胞完全隔開(kāi),減少了血清與血細(xì)胞接觸的時(shí)間,從而避免了因血細(xì)胞對(duì)血清的影響所造成的分析誤差[2],同時(shí)對(duì)以血清為對(duì)象的臨床化學(xué)及免疫學(xué)檢測(cè)均無(wú)影響[3]。

溶血可以嚴(yán)重影響胰島素濃度測(cè)定值,因紅細(xì)胞內(nèi)含有胰島素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)[4],溶血可導(dǎo)致IDE從紅細(xì)胞內(nèi)釋放至血清中,降解胰島素,將其水解成為小分子片段,引起檢測(cè)濃度的下降。本研究結(jié)果表明測(cè)得胰島素濃度下降的程度與溶血程度呈正相關(guān),溶血程度越高,其下降越明顯。同一份溶血標(biāo)本在室溫保存與在4℃保存相比胰島素濃度更低,說(shuō)明低溫能抑制IDE的活性,標(biāo)本在4℃保存能有效減少溶血干擾。因此,在血液標(biāo)本的采集、運(yùn)輸、轉(zhuǎn)移、保管和分離血清過(guò)程中應(yīng)保持低溫環(huán)境,以最大程度降低IDE的活性,減輕溶血對(duì)測(cè)定胰島素濃度造成的影響。本研究還發(fā)現(xiàn)無(wú)溶血標(biāo)本在4℃或室溫下放置1 h、4 h后,胰島素濃度無(wú)顯著差異,說(shuō)明無(wú)溶血標(biāo)本在4 h內(nèi)檢測(cè)不影響胰島素測(cè)定結(jié)果。而溶血標(biāo)本在室溫下放置4 h后會(huì)出現(xiàn)測(cè)定濃度明顯的下降,說(shuō)明溶血標(biāo)本不僅要求及時(shí)檢測(cè),而且需要低溫保存,這樣才能盡可能地減少溶血對(duì)胰島素檢測(cè)的影響。

分析前質(zhì)量控制是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控的一個(gè)重要組成部分,而實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本的正確采集、處理和保存又同分析前質(zhì)量控制息息相關(guān)。為了保證血胰島素測(cè)定的穩(wěn)定性,在標(biāo)本采集后應(yīng)盡早測(cè)定。普通采血管要求在4 h內(nèi)檢測(cè),如因標(biāo)本量太多,或其他原因不能及時(shí)測(cè)定時(shí),應(yīng)使用分離膠真空采血管采血或普通分離管采血后即時(shí)分離血清。由于溶血能對(duì)胰島素濃度的檢測(cè)產(chǎn)生影響,提示在標(biāo)本采集、處理過(guò)程中應(yīng)該盡可能避免溶血的發(fā)生,一旦發(fā)生標(biāo)本溶血,最好重新抽血檢測(cè),輕微溶血或無(wú)法重新抽血,建議標(biāo)本盡快進(jìn)行血清分離并于4℃保存,盡快檢測(cè),確保胰島素濃度檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

1 Sapin R.Insulin assays：previously known and new analytical features[J].Clin Lab,2003,49(3-4)：113-121.

2 王永安,王家民.血清分離膠的理論基礎(chǔ)及應(yīng)用[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1995,10(4)：234-236.

3 郭新勝,周位強(qiáng).分離膠真空采血管在臨床上的應(yīng)用進(jìn)展[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,22(2)：123-124.

4 Sapin R,Ongagna JC,Gasser F,et al.Insulin measurements in haemolysed serum：influence of insulinase inhibitors[J].Clin Chim Acta,1998,274(1)：111-117.