劉軍凱，林貝

(北京化工大學(xué)北方學(xué)院，河北 廊坊 065201)

補(bǔ)骨脂正己烷提取物GC指紋圖譜的研究

劉軍凱，林貝

(北京化工大學(xué)北方學(xué)院，河北 廊坊 065201)

利用GC方法測(cè)定來自同一生產(chǎn)企業(yè)的10批不同批次補(bǔ)骨脂的提取物，獲得了較為理想的包含特征信息的補(bǔ)骨脂GC指紋圖譜，通過相似度分析，計(jì)算出各批樣品相似度均在0.98以上。本論文確定的指紋圖譜建立方法簡(jiǎn)單、快速，有較好的重現(xiàn)性，樣品穩(wěn)定性好，可為補(bǔ)骨脂藥材的質(zhì)量控制提供有效手段。

補(bǔ)骨脂；GC；指紋圖譜

補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂(Psoralea corylifoliaL.)的干燥成熟果實(shí)，性溫，味辛，具溫腎助陽、納氣、止瀉之功效[1]。補(bǔ)骨脂化學(xué)成分復(fù)雜，其中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素已作為指標(biāo)成分用于補(bǔ)骨脂及其相關(guān)制品的質(zhì)量控制，但是，以一個(gè)或幾個(gè)成分為指標(biāo)的質(zhì)量控制模式很難全面評(píng)價(jià)中藥及其制劑的質(zhì)量、療效和穩(wěn)定性。中藥指紋圖譜技術(shù)的誕生，為中藥質(zhì)量控制開辟了新途徑。目前，對(duì)于補(bǔ)骨脂指紋圖譜的研究大多為HPLC指紋圖譜[2～3]。本文初步建立了補(bǔ)骨脂的氣相色譜指紋圖譜，為補(bǔ)骨脂藥材質(zhì)量的評(píng)價(jià)提供了快速、簡(jiǎn)便、可靠的分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料

1.1 儀器

GC9790 IIA-2 氣相色譜儀、氫離子化檢測(cè)器,R201D型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀四兩裝高速中藥粉碎機(jī)，80-2型離心沉淀機(jī)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與藥材

實(shí)驗(yàn)所使用的正己烷、二硫化碳皆為分析純，來源于北京化工廠。安國(guó)市長(zhǎng)安中藥材有限公司所購(gòu)10批補(bǔ)骨脂生品和鹽品實(shí)驗(yàn)樣品見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)所購(gòu)10批樣品藥材

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

分別精密稱取過0.84mm篩的補(bǔ)骨脂0.5g，加入10mL正己烷(60～90℃)，超聲處理30min，3000r·min-1的轉(zhuǎn)速離心5min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干溶劑后用2mL二硫化碳溶解，作為樣品溶液備用。

2.2 色譜條件

色譜柱采用OV-101色譜柱；柱壓為44kPa，恒壓方式；進(jìn)樣口溫度為250℃，檢測(cè)器溫度為250℃；柱溫采用程序升溫，起始溫度30℃，恒溫5min，1℃·min-1升溫至40℃，然后以7℃·min-1升溫至250℃，保溫15min；流速為5.0mL·min-1，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為1μL。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 儀器精密度及重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取同一批補(bǔ)骨脂供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，考察色譜峰相對(duì)保留時(shí)間，以保留時(shí)間來計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，本實(shí)驗(yàn)選擇5個(gè)色譜峰來計(jì)算，RSD分別為0.79%、0.80%、0.61%、0.39%、0.07%。保留時(shí)間RSD值均小于1%，說明儀器穩(wěn)定可靠，方法重現(xiàn)性良好。

2.3.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

用同一批補(bǔ)骨脂供試品溶液，分別在0h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h時(shí)，在相同的色譜條件下進(jìn)行分析。選取5個(gè)色譜峰，從保留時(shí)間來計(jì)算各色譜峰的RSD值， 分別為0.86%、0.85%、0.56%、0.51%、0.07%?？梢姡?4h內(nèi)所得樣品6個(gè)色譜峰保留時(shí)間RSD值均小于1%。說明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定可靠。

2.3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批補(bǔ)骨脂藥材，按供試品制備方法，制備樣品5份，每份樣品分別進(jìn)樣，進(jìn)行色譜分析。任意選取5個(gè)色譜峰，從保留時(shí)間來計(jì)算色譜峰的RSD值，分別為1.12%、1.09%、0.65%、0.62%、0.08%。數(shù)據(jù)顯示，5個(gè)樣品色譜峰保留時(shí)間 RSD值小于2%，說明供試品溶液制備方法穩(wěn)定、可靠。

2.4 補(bǔ)骨脂氣相指紋圖譜的建立

在上述條件下測(cè)10批同一生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的不同批次補(bǔ)骨脂的供試品溶液，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行分析，所得補(bǔ)骨脂生品和鹽品典型的GC指紋圖譜見圖1、2。

圖1 補(bǔ)骨脂生品1號(hào)正己烷提取部位GC色譜圖

圖2 補(bǔ)骨脂鹽品1號(hào)正己烷提取部位GC色譜圖

2.5 補(bǔ)骨脂生品和鹽品GC指紋圖譜及相似度評(píng)價(jià)

對(duì)同一廠家的 10批次不同批號(hào)的補(bǔ)骨脂生品和鹽品的正己烷提取物，按照上述氣相色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所得的指紋圖譜疊加圖和共有模式譜圖見圖3和圖4。

運(yùn)用Excel軟件分別采用相關(guān)系數(shù)和夾角余弦為測(cè)度[4]，以共有模式作為對(duì)照指紋圖譜，計(jì)算所有樣品的相似度，結(jié)果見表2和表3。

圖3 10批補(bǔ)骨脂生品正己烷提取部位GC指紋圖譜疊加圖與共有圖譜

圖4 10批補(bǔ)骨脂鹽品正己烷提取部位GC指紋圖譜疊加圖與共有模式圖譜

表2 10批補(bǔ)骨脂生品正己烷提取部位GC指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)結(jié)果

表3 10批補(bǔ)骨脂鹽品正己烷提取部位GC指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)結(jié)果

3 結(jié)果與討論

(1) 本論文對(duì)補(bǔ)骨脂生品和鹽品的指紋圖譜進(jìn)行了初步研究，建立了氣相色譜分析方法。該分析方法補(bǔ)骨脂生品重現(xiàn)性RSD＜1%、精密度RSD＜1%，補(bǔ)骨脂鹽品RSD＜2%、精密度RSD＜3%，樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定，可用于補(bǔ)骨脂藥材指紋圖譜的測(cè)定。

(2) 本研究得出了10批補(bǔ)骨脂生品和鹽品正己烷提取部位GC指紋圖譜，并計(jì)算出相似度均在0.98以上，表明獲得的指紋圖譜具有指紋意義的特征組分，并能體現(xiàn)其整體性。該生產(chǎn)企業(yè)的補(bǔ)骨脂藥材來源的化學(xué)成分一致性很好，補(bǔ)骨脂生品和鹽品都有很高的相似度，可作為標(biāo)準(zhǔn)藥材入藥。

(3) 比較補(bǔ)骨脂生品和鹽品的指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)譜圖中所含峰的相對(duì)保留時(shí)間基本一致，在其峰面積和峰高方面存在一定差異。在保留時(shí)間5min之前的各峰，生品的相應(yīng)各峰在峰高和峰面積上明顯大于鹽品，但是在保留時(shí)間為42～47min之間的峰，又出現(xiàn)了相反的現(xiàn)象，即鹽品譜圖中的峰高和峰面積明顯大于生品譜圖的相應(yīng)峰。如能進(jìn)一步對(duì)指紋圖譜與藥效關(guān)聯(lián)進(jìn)行研究，可對(duì)飲片廠正確加工炮制補(bǔ)骨脂提供依據(jù)。

[1] 中國(guó)中醫(yī)藥管理局.中國(guó)藥典一部[S].北京：人民衛(wèi)生出版社,2005.157.

[2] 張海秋,丁家欣,張玲,等.補(bǔ)骨脂HPLC指紋圖譜研究[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)藥學(xué)雜志,2005, 11(12):923.

[3] 楊榮平,涂永勤,壽清耀,等.合川補(bǔ)骨脂藥材HPLC指紋圖譜研究[J].中藥材,2006,29(12): 1292.

[4] 苗愛東, 孫殿甲. Excel 2002在中藥指紋相似度計(jì)算中的應(yīng)用[J].藥學(xué)進(jìn)展,2003,27(1):51-54.

Study on GC Fingerprint of Fructus Psoraleae Extracts

LIU Jun-kai, LIN Bei
(North College of Beijing University of Chemical Technology, Langfang 065201, China)

Ten different batches of fructus psoraleae extracts from the same manufacturer were analyzed by GC.A preferable GC fingerprint of the fructus psoraleae was obtained, and through similarity analysis, the similarity of all batches of simples were above 0.98. The method established for GC fingerprint in the paper was simple, quick, and it was provided with good reproducibility and good stability.It could be used scientifically to evaluate and identify the quality of fructus psoraleae.

fructus psoraleae; GC; fingerprint

O 657.3

A

1671-9905(2010)09-0029-03

劉軍凱，男，助教，京東燕郊經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)迎賓北路45號(hào)北京化工大學(xué)北方學(xué)院化工教研室,郵編：065201，xyzljk@163.com,15810190250

2010-06-09