酚氨咖敏顆粒含量測定方法的改進

焦付哲，高建嶺

（1.南陽市衛(wèi)生職工學(xué)校，河南南陽 473000；2.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南南陽 473000）

氨酚咖敏顆粒是由對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林及馬來酸氯苯那敏組成的復(fù)方制劑，臨床用于感冒引起的鼻塞、發(fā)熱、頭痛、咽喉痛、神經(jīng)痛及風(fēng)濕痛等[1]。檢驗標(biāo)準(zhǔn)[2]采用HPLC法測定咖啡因、氨基比林、馬來酸氯苯那敏的含量，未測定對乙酰氨基酚的含量；也有人報道采用HPLC法單純測定氨酚咖敏顆粒中對乙酰氨基酚的含量，但其他組分不能檢出，效率較低[3-4]。本文采用HPLC法同時測定氨酚咖敏顆粒中對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林，操作簡便，快速，準(zhǔn)確，為該品種檢驗標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供一個依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010CHT高效液相色譜儀；AEL-200電子天平（上海分析天平廠）；超聲波清洗器（上海金利超聲公司）；對乙酰氨基酚對照品 （批號：100018-8905）；咖啡因?qū)φ掌罚ㄅ枺?71215-200507，中國藥品生物制品檢定所）；氨基比林對照品 （批號：100503-200301，中國藥品生物制品檢定所）；氨酚咖敏顆粒（南陽市天舜藥業(yè)有限公司，批號：20060103、20051218、20050412）；甲醇和乙腈為色譜純，水為去離子水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的對乙酰氨基酚對照品約60 mg與咖啡因?qū)φ掌芳s12 mg及經(jīng)60℃干燥2 h的氨基比林對照品約40 mg，置100 ml棕色量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，得對照品A溶液。精取對照品A溶液5 ml，置50 ml棕色量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻，得對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取氨酚咖敏顆粒10袋，精密稱定內(nèi)容物研細，精密稱取適量（約相當(dāng)于氨基比林10 mg），置25 ml棕色量瓶中，加乙醇超聲處理15 min，放冷，乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，再精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 ml棕色量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻，即得。另取缺對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林、馬來酸氯苯那敏的陰性樣品同法制得陰性樣品對照液。

2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗[5]

色譜柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：1%醋酸溶液（用三乙胺調(diào) pH 為 3.5）-甲醇-乙腈（65∶10∶25）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：273 nm；柱溫：30℃；進樣量：20 μl。各組分的理論板數(shù)應(yīng)均不低于4 000，且各組分間的分離度應(yīng)符合要求。見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取對照 A 溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml置50 ml棕色量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取20μl，進樣，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對照品濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（X），得對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的回歸方程分別為：Y=2.76×104X+2.36×103（r=0.999 6）；Y=3.06×105X+1.26×103（r=0.999 8）；Y=1.77×105X+4.05×103（r=0.999 9），線性范圍分別為 12.3～123.2、2.44～24.42、8.23～82.34 μg/ml。

2.5 精密度試驗

精密吸取對照品溶液20 μl，重復(fù)進樣5次，測得對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林色譜峰面積的RSD分別為0.32%、0.44%、0.35%。

2.6 重復(fù)性試驗

精密稱取同一批號的樣品6份，分別測定含量，按外標(biāo)法計算對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量，并將咖啡因計算結(jié)果與1.097 2相乘。結(jié)果對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量分別為 93.5%、96.7%、98.6%，RSD分別為0.98%、0.62%、0.56%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取含量測定項下的同一份供試品溶液，在室溫下放置0、2、4、6、8、10、12 h， 同法測定，記錄色譜峰面積，RSD 為0.82%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取氨酚咖敏顆粒樣品（含對乙酰氨基酚92.6%、咖啡因96.8%、氨基比林99.2%）適量（約相當(dāng)于氨基比林5 mg），共3份，分別精密加入8.0、10.0、12.0 ml的對照品A溶液，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣 20 μl，測定色譜峰面積，并按外標(biāo)法計算含量，將咖啡因計算結(jié)果與1.097 2相乘。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果（n=3）Tab.1 Results of recovery test(n=3)

2.9 樣品含量測定

取氨酚咖敏顆粒樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液和對照品溶液，各進樣20 μl，測定色譜峰面積，并按外標(biāo)法計算。樣品含量測定結(jié)果見表2。

3 討論

本法采用LC-MS分離技術(shù)[6]，選用的流動相保留時間短，分離效果好，在流動相中加入三乙胺，對分離和保留時間雖然沒有明顯的影響，但可改善主峰的拖尾現(xiàn)象，流動相的pH值改為3.5時，峰形較理想。同時選定273 nm波長處檢測，能保證三種檢測成分的檢測靈敏度。按本品的處方配制的空白溶液在該色譜條件下無吸收，不影響待測成分的測定。

表2 樣品含量測定結(jié)果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

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[8]曹敏,熊然英,晉儒慧.HPLC法同時測定酚氨咖敏顆粒中對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2007,8(1)∶51-53.