馮 紅，武晶瓊，周春明，何慶華，溫 利

6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)降低SHR大鼠血壓的血漿蛋白質(zhì)組學(xué)研究

馮 紅1，武晶瓊2，周春明2，何慶華2，溫 利3

目的：運(yùn)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，探討6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)降低SHR大鼠血壓血漿蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，以期進(jìn)一步闡述運(yùn)動(dòng)治療高血壓病的機(jī)制。方法：以雄性4周齡SHR大鼠16只及WKY大鼠16只為研究對(duì)象，將其隨機(jī)分為SHR運(yùn)動(dòng)組、SHR安靜組、WKY安靜組、WKY運(yùn)動(dòng)組。SHR運(yùn)動(dòng)組及WKY運(yùn)動(dòng)組進(jìn)行1 h/天，5天/周，共6周的無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)。使用CODATM2單通道無創(chuàng)血壓測(cè)量儀檢測(cè)老鼠血壓，對(duì)處理好的血漿樣品進(jìn)行二維凝膠電泳和質(zhì)譜分析。結(jié)果：（1）6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)可以有效降低SHR大鼠的血壓。（2）通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索，成功鑒定了6個(gè)差異蛋白：rCG45257、錨定蛋白重復(fù)域13家族成員D、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A鏈、Ras相關(guān)域1家族同型A、胎球蛋白B前體和γ-肌動(dòng)蛋白。

6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)；高血壓；血漿蛋白質(zhì)組學(xué)；SHR

高血壓嚴(yán)重危害人類的生命健康。目前關(guān)于高血壓，特別是原發(fā)性高血壓的發(fā)病機(jī)制尚不十分了解，體力活動(dòng)是其中一個(gè)重要的環(huán)境因素。最近的研究發(fā)現(xiàn)，體力活動(dòng)水平和血壓呈負(fù)相關(guān)。除此之外，研究還發(fā)現(xiàn)體力活動(dòng)具有降壓的作用。長期從事體力活動(dòng)具有明顯和穩(wěn)定的降壓作用，而且可以減少降壓藥物的劑量[1]。目前對(duì)高血壓運(yùn)動(dòng)干預(yù)的分子生物學(xué)研究已取得了一些進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)可以引起與血壓有關(guān)的多個(gè)關(guān)鍵蛋白質(zhì)表達(dá)的改變，但以往關(guān)于高血壓運(yùn)動(dòng)干預(yù)的研究技術(shù)，受限于多種蛋白質(zhì)的分析效率和鑒定靶蛋白的特異抗體的有效性，不能全面分析高血壓運(yùn)動(dòng)干預(yù)時(shí)機(jī)體的變化。本研究擬采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析法，系統(tǒng)地進(jìn)行運(yùn)動(dòng)改善高血壓血漿相關(guān)蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)組研究，通過對(duì)運(yùn)動(dòng)改善高血壓大鼠模型的建立、大鼠血漿蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的制備、分析與鑒定，尋找差異表達(dá)蛋白并探討其功能，從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度探索運(yùn)動(dòng)治療高血壓的分子機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng) 物

以4周齡，雄性，SHR大鼠（16只）及WKY大鼠（16只）為研究對(duì)象，SHR大鼠隨機(jī)分為SHR安靜組（n=8），SHR運(yùn)動(dòng)組（n=8），WKY大鼠隨機(jī)分為WKY安靜組（n=8），WKY運(yùn)動(dòng)組（n=8），4組均在通風(fēng)、恒溫（24±1）℃、濕度適宜、自然采光的動(dòng)物室內(nèi)飼養(yǎng)。

1.2 試 劑

雙向電泳試劑及蛋白定量試劑盒均購自Amersham Pharmacia公司，乙腈、水及甲酸購于Merck公司。TPCK修飾的測(cè)序級(jí)胰蛋白酶購于Promega公司。蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟（PMSF）及高豐度蛋白去除試劑盒購自Merck公司，蛋白銀染試劑盒及DNA酶購自GE Amersham Biosciences公司。

作者單位：1.天津體育學(xué)院健康與運(yùn)動(dòng)科學(xué)系，天津300381；2.天津體育學(xué)院研究生部，天津300381；3.山西省呂梁市人民醫(yī)院體檢中心，山西呂梁3000031。

1.3 設(shè) 備

GE Amersham Biosciences公司蛋白質(zhì)學(xué)研究配套儀器：IPGphor等電聚焦儀，Ettan DALTⅡ雙向垂直電泳儀，ImageMaster 2D Platinum 6．0凝膠圖像分析軟件，Labscan掃描控制和分析前處理軟件，Imagescanner掃描儀。DU800型可見-紫外分光光度計(jì)來自Beckman公司，液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀LCQ Deca XP來自Thermo Electron公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 建立運(yùn)動(dòng)改善自發(fā)性高血壓大鼠血壓的模型

2.1.1 運(yùn)動(dòng)方案 大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境一周后，進(jìn)行一周適應(yīng)運(yùn)動(dòng)，水溫36℃，水深50 cm，從15 min開始遞增，第7天時(shí)可以游1 h。以后在水溫36℃，水深50 cm條件下進(jìn)行無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)，1 h/天，5 天/周，共運(yùn)動(dòng) 6 周。

2.1.2 血壓的測(cè)定 使用CODATM2單通道無創(chuàng)血壓測(cè)量儀，每周檢測(cè)大鼠血壓一次，每只大鼠的測(cè)量時(shí)間盡量固定在同一時(shí)間。

2.1.3 取 材 用10%的水合氯醛麻醉大鼠，麻醉滿意暴露大鼠腹主動(dòng)脈，以5 mL一次性注射器，針尖斜面向上刺入腹主動(dòng)脈，緩慢抽血，約5 mL。拔去針頭，輕輕推入5 mL抗凝管中，室溫下，3 000 r/min，離心15 min，吸取上層血漿，并分裝于200 μL離心管，-80℃冰箱保存?zhèn)溆茫苊夥磸?fù)凍融。

2.1.4 去除高豐度蛋白 使用德國Merck去除高豐度蛋白試劑盒，快速、高度特異性地除去血漿中的白蛋白免疫球蛋白IgG，以利于低豐度蛋白的檢測(cè)，并對(duì)處理后的樣品以考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行蛋白定量。

2.2 制備血漿二維凝膠電泳圖譜

2.2.1 第一向等電聚焦 用樣品溶解緩沖液（9 M尿素，4%CHAPS，2%IPG 緩沖液，40 mM DTT，40 mM Tris-base） 溶解樣品。處理好的樣品250 μg，加入水化液，使樣品和水化液的總體積等于 450 μl。等電聚焦參數(shù)：30 V，12 h；200 V，1 h；500 V，1 h；1000 V，1 h；8 000 V，9 h。

2.2.2 第二向SDS電泳 IPG膠條平衡2次，每次10 min，平衡緩沖液包括6 M尿素和30%甘油。將平衡好的IPG膠條小心放置于制好的SDS膠面上，使IPG膠條與SDS膠面充分結(jié)合，0．5%的瓊脂糖溶液封頂。二向電泳參數(shù)為：1 W/膠條 1 h；10 W/膠條5 h。當(dāng)溴酚藍(lán)染料遷移到膠的底部邊緣即可結(jié)束電泳?？捡R斯亮藍(lán)染色6 h，脫色12 h。染色凝膠用Imagescanner掃描儀進(jìn)行掃描，ImageMaster 2D Platinum 6．0凝膠圖像分析軟件分析電泳結(jié)果。圖像分析時(shí)將SHR運(yùn)動(dòng)組的凝膠選做參考膠，其他組膠與參考膠進(jìn)行匹配。蛋白質(zhì)點(diǎn)歸一化定量后輸出數(shù)據(jù)到Microsfot Excel 2000中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異顯著性分析采用 Student's T-Test。

2.3 差異候選蛋白的質(zhì)譜分析

2.3.1 蛋白斑點(diǎn)的脫色和膠上原位酶切 選取二維電泳凝膠上的候選蛋白斑點(diǎn)，并切成1 mm2大小的膠片，另切一塊無蛋白的2-DE凝膠作為空白對(duì)照，置于EP管中，-20℃凍存。將切下的膠片用去離子水沖洗3次，用50%丙烯腈/25 mmol/L碳酸氫銨水溶液（400 μL，pH8．0）振蕩脫色，膠塊真空離心干燥。加入10～15 μL胰蛋白酶液，覆蓋膠塊，4℃放置30 min，吸脹后，吸出多余酶液，37℃空氣浴16～20 h。

2.3.2 肽混合物的提取 吸出反應(yīng)液，置E P管中，加入50%AC/5%TEA水溶液溶解，輕微振蕩萃取60分，離心吸上清，置前一EP管中，再萃取一次。合并萃取液（反應(yīng)液和兩次萃取液）冷凍真空抽干約l h，4℃冰箱保存。

2.3.3 質(zhì)譜分析 濃縮后的肽段抽提液通過C18-高壓液相色譜儀偶聯(lián)的裝有自動(dòng)進(jìn)樣器、微量電噴霧離子化源及離子阱質(zhì)量分析器的液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀LCQ Deca XP進(jìn)行分析。

2.4 數(shù)據(jù)庫檢索初步鑒定蛋白質(zhì)

數(shù)據(jù)庫檢索程序根據(jù)輸入的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)、分子量范圍及肽質(zhì)量指紋譜數(shù)據(jù)和其他一些參數(shù)在數(shù)據(jù)庫中尋找與這些參數(shù)相匹配的蛋白質(zhì)。檢索數(shù)據(jù)庫為：htto：／／www．matrixscience．com。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)由SPSS統(tǒng)計(jì)軟件（SPSS13．0 for Windows）處理，計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差（±S），組間比較采用雙因素方差分析，組內(nèi)比較采用配對(duì)T檢驗(yàn)，顯著性標(biāo)準(zhǔn)為：P＜0．05。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)對(duì)SHR大鼠和WKY大鼠血壓的影響

4組大鼠6周游泳訓(xùn)練前，收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓的情況見表1。運(yùn)動(dòng)前，SHR大鼠收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓明顯高于WKY大鼠；SHR大鼠隨周齡增長，收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓呈持續(xù)上升趨勢(shì)。運(yùn)動(dòng)后，SHR大鼠收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓仍然高于WKY大鼠，且SHR安靜組的增高幅度顯著高于SHR運(yùn)動(dòng)組，P＜0．01。游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后的SHR運(yùn)動(dòng)組大鼠收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓與SHR安靜組大鼠相比第4周即開始下降，運(yùn)動(dòng)6周后降低具有顯著性P＜0．01；6周游泳訓(xùn)練后，SHR運(yùn)動(dòng)組收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓較運(yùn)動(dòng)前沒有顯著性變化，但SHR安靜組這3個(gè)指標(biāo)比6周前顯著升高，P＜0．05。WKY大鼠運(yùn)動(dòng)組和安靜組在這6周內(nèi)收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓的變化均不具有顯著性。

3.2 各組血清蛋白質(zhì)2-DE圖譜的制備和比較

3.2.1 各組血漿蛋白質(zhì)2-DE譜圖的制備 將去除高豐度蛋白后的SHR運(yùn)動(dòng)組，SHR安靜組，WKY安靜組，WKY運(yùn)動(dòng)組血漿進(jìn)行二維凝膠電泳。圖象經(jīng)ImageMaster 2D Platinum 6．0凝膠圖像分析軟件分析發(fā)現(xiàn)，在SHR安靜組蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖中發(fā)現(xiàn)674個(gè)蛋白點(diǎn)，在SHR運(yùn)動(dòng)組蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖中發(fā)現(xiàn)644個(gè)蛋白點(diǎn)，在WKY安靜組蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖中發(fā)現(xiàn)695個(gè)蛋白點(diǎn)，在WKY運(yùn)動(dòng)組蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖中發(fā)現(xiàn)627個(gè)蛋白點(diǎn)。以SHR運(yùn)動(dòng)組血漿蛋白質(zhì)2-DE譜圖中作為參考膠，其他譜圖與之匹配，WKY安靜組血漿蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖的平均匹配率為 73．0396%，WKY運(yùn)動(dòng)組血漿蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖的平均匹配率為74．1149%，SHR安靜組血漿蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖的平均匹配率為77．3900%。

表1 6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)對(duì)SHR大鼠和WKY大鼠血壓的影響（mmg）Table 1 Effects of six-week load-free swimming on the blood pressure in SHR and WKY rats（mmg）n=8

3.2.2 運(yùn)動(dòng)改善高血壓血漿蛋白質(zhì)的表達(dá)變化 經(jīng)過對(duì)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，SHR運(yùn)動(dòng)組與SHR安靜組相比較，共發(fā)現(xiàn)13個(gè)蛋白點(diǎn)的含量發(fā)生了明顯改變，其中在SHR運(yùn)動(dòng)組血漿中有6個(gè)蛋白點(diǎn)升高，7個(gè)蛋白點(diǎn)降低；SHR運(yùn)動(dòng)組與WKY運(yùn)動(dòng)組相比較，有33個(gè)蛋白點(diǎn)的含量發(fā)生了明顯改變，其中在SHR運(yùn)動(dòng)組血漿中有8個(gè)蛋白點(diǎn)升高，25個(gè)蛋白點(diǎn)降低；SHR運(yùn)動(dòng)組與WKY安靜組相比，27個(gè)蛋白點(diǎn)的含量發(fā)生了明顯改變，其中在SHR運(yùn)動(dòng)組血漿中有20個(gè)蛋白點(diǎn)升高，7個(gè)蛋白點(diǎn)降低；SHR安靜組與WKY安靜組相比較，發(fā)現(xiàn)33個(gè)蛋白點(diǎn)發(fā)生了明顯改變，其中在SHR安靜組血漿中8個(gè)蛋白點(diǎn)升高，25個(gè)蛋白點(diǎn)降低。它們?cè)谀z中的位置見圖1所示。統(tǒng)計(jì)分析顯示這些差異蛋白點(diǎn)的相對(duì)含量均具有顯著性差異。

圖1 運(yùn)動(dòng)改善高血壓血漿中表達(dá)差異的蛋白點(diǎn)分析Fig.1 Analysis of proteins for different expression in plasma under the condition of high blood pressure after exercise

3.3 差異蛋白質(zhì)的鑒定

選取有顯著改變的6個(gè)差異蛋白點(diǎn)，經(jīng)過膠內(nèi)酶切和MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析后，得到了各個(gè)蛋白點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋譜圖，鑒定出了6個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)（見表2）。與SHR安靜組相比，3個(gè)蛋白質(zhì)在SHR運(yùn)動(dòng)組血漿中含量升高，這些蛋白包括：錨定蛋白重復(fù)域13家族成員D、胎球蛋白B前體和γ-肌動(dòng)蛋白。3個(gè)蛋白質(zhì)在SHR運(yùn)動(dòng)組血漿中含量降低包括：甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A鏈、Ras相關(guān)域1家族同型A和rCG45257。

4 討 論

4.1 6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)對(duì)SHR大鼠和WKY大鼠血壓的影響

Song等人的研究指出，4周游泳訓(xùn)練可以使SHR大鼠收縮壓由 （208．4±6．8）mmHg 顯著下降到 （187．2±4．1）mmHg[2]。Bobillier等人發(fā)現(xiàn)3周齡雄性SHR大鼠經(jīng)過8周游泳訓(xùn)練后收縮壓下降了24 mmHg[3]。Vogt亦認(rèn)為游泳運(yùn)動(dòng)可以使SHR大鼠運(yùn)動(dòng)組比安靜組收縮壓和舒張壓顯著下降[4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與SHR安靜組相比，SHR運(yùn)動(dòng)組血壓4周開始下降，至6周末非常顯著性下降（P＜0．01），說明6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)能有效降低SHR大鼠的血壓。

表2 鑒定出的蛋白質(zhì)的名稱Table 2 ldentified proteins

4.2 運(yùn)動(dòng)改善SHR大鼠血壓的血漿蛋白質(zhì)組學(xué)分析

應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)對(duì)去除白蛋白后的大鼠血漿進(jìn)行分析，選取6個(gè)濃度上變化比較大的蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。其中有4個(gè)蛋白既在運(yùn)動(dòng)改善SHR血壓過程中有變化，又在SHR發(fā)病過程中有變化即：rCG45257、錨定蛋白重復(fù)域13家族成員D、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A鏈、Ras相關(guān)域1家族同型A；有2個(gè)蛋白只在運(yùn)動(dòng)改善SHR血壓過程中發(fā)生變化，它們分別是胎球蛋白B前體和γ-肌動(dòng)蛋白。由于rCG45257是尚未被命名的蛋白產(chǎn)物，現(xiàn)將主要蛋白的功能總結(jié)如下。

4.2.1 甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A鏈 甲狀腺素運(yùn)載蛋白在體內(nèi)大多數(shù)為同源四聚體，少數(shù)以單體形式存在[5]。其每個(gè)亞單位含有125～136個(gè)氨基酸序列，這些氨基酸序列形成β折疊結(jié)構(gòu)，以利于維持分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性[6]。臨床和基礎(chǔ)研究均發(fā)現(xiàn)，甲狀腺素運(yùn)載蛋白與老年全身性淀粉樣變性、家族性淀粉樣多神經(jīng)病、家族性淀粉樣心肌病有一定的相關(guān)性。但至今尚無甲狀腺素運(yùn)載蛋白A鏈的相關(guān)報(bào)道。

4.2.2 Ras相關(guān)域家族1同型A Rass相關(guān)域家族1（Rassf1）蛋白是腫瘤抑制基因的產(chǎn)物，得到了大家廣泛的關(guān)注[7-9]。Rassf1的編碼基因位于染色體3p21．3上，大約 11 000 bp，它包括8個(gè)外顯子和2個(gè)不同的啟動(dòng)子，進(jìn)行選擇性剪接后可以形成8個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄物，即Rassf1A-Rassf1H。目前只有Rassf1A和Rassf1C的生物學(xué)意義被廣泛研究[10]。Rassf1A分子量為39 kDa，包含340個(gè)殘基。Rassf1A和Rassf1C在C-氨基端有4個(gè)相同的外顯子，Rassf1A的N-氨基端有一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)，與蛋白激酶C保守區(qū)域C1具有很高的同源性[11]。

Rassf1A已經(jīng)被公認(rèn)為在各種腫瘤中的腫瘤抑制因子[12-13]。研究發(fā)現(xiàn)，Rassf1 A經(jīng)常在許多癌癥細(xì)胞鏈和新生組織中缺失[11，14-15]。Rassf1A具有傳遞抑制生長的信號(hào)的功能，在腫瘤形成過程中這些起抑制作用的信號(hào)通路可能會(huì)被滅活Rassf1A在C-氨基端Salvador Rassf Hippo（SARAH）區(qū)后的，與蛋白相互作用有關(guān)的Ras相關(guān)區(qū)域（RA區(qū)）發(fā)揮這些生物學(xué)作用[16]。Rassf1A已經(jīng)被證明可以和有活性的Ras即Ras．GTP相結(jié)合提示它可能是Ras的一種效應(yīng)器。Rassf1A已經(jīng)被證明存在于心肌細(xì)胞中，并且與鈣離子泵在肌漿中有相同的定位點(diǎn)[17]。持續(xù)的機(jī)械壓力存在時(shí)，Rassf1A缺乏會(huì)通過增加ERK1/2信號(hào)通路的活性，引起心肌肥大和心室結(jié)構(gòu)改變。

4.2.3 γ-肌動(dòng)蛋白 γ-肌動(dòng)蛋白的分子量為43 KD，根據(jù)氨基酸和cDNA序列可將γ-肌動(dòng)蛋白分為平滑肌γ-肌動(dòng)蛋白和胞漿γ-肌動(dòng)蛋白。哺乳動(dòng)物中通常γ-肌動(dòng)蛋白分布在內(nèi)臟器官平滑肌，而血管平滑肌主要分布為α-肌動(dòng)蛋白。肌動(dòng)蛋白亞型表達(dá)與平滑肌分化狀態(tài)之間的有一定的聯(lián)系，平滑肌細(xì)胞處于分化狀態(tài)時(shí)γ-肌動(dòng)蛋白表達(dá)增加和α-肌動(dòng)蛋白表達(dá)降低，去分化狀態(tài)時(shí)肌動(dòng)蛋白亞型的表達(dá)正好相反[18]。有學(xué)者推測(cè)，γ-肌動(dòng)蛋白表達(dá)增加及其轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜可能通過以下機(jī)制促進(jìn)平滑肌收縮：增加組織中收縮蛋白含量和支持肌細(xì)胞與周圍膠原蛋白基質(zhì)的相互作用[19]。平滑肌細(xì)胞是血管中最主要的細(xì)胞，其主要功能在于維持血管結(jié)構(gòu)與血壓的調(diào)控。當(dāng)血管處于病變情況下，平滑肌細(xì)胞表型的改變是一個(gè)主要的特征。很多學(xué)者對(duì)管壁壓力對(duì)容量血管的影響進(jìn)行了大量研究，并一致認(rèn)為：管壁壓力可以通過擴(kuò)張血管容量，重塑管腔結(jié)構(gòu)來維持組織的物理應(yīng)力處于相對(duì)正常水平。在此過程中，血管平滑肌細(xì)胞收縮以彌補(bǔ)血管損傷部位的再生障礙，其發(fā)生機(jī)制類似于血管成形術(shù)后的動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄[20]。此外，有文獻(xiàn)報(bào)道，當(dāng)心臟擴(kuò)大和肥厚的小鼠特異性心臟α-肌動(dòng)蛋白缺陷時(shí)內(nèi)臟平滑肌γ-肌動(dòng)蛋白的異位表達(dá)來彌補(bǔ)[21]。而且細(xì)胞質(zhì)中多余的的γ-肌動(dòng)蛋白是肌營養(yǎng)不良蛋白的缺失時(shí)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)或基因表達(dá)異常的原因[22]。

5 結(jié) 論

（1）6周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)可以有效降低SHR大鼠的血壓。（2）通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索，成功鑒定了6個(gè)差異蛋白，分別為：既在運(yùn)動(dòng)改善SHR血壓過程中有變化，又在SHR發(fā)病過程中有變化的蛋白質(zhì)：rCG45257、錨定蛋白重復(fù)域13家族成員D、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A鏈、Ras相關(guān)域1家族同型A；只在運(yùn)動(dòng)改善SHR血壓過程中發(fā)生變化的蛋白質(zhì)：胎球蛋白B前體和γ-肌動(dòng)蛋白。

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Plasma Proteomics of Six-Week Load-Free Swimming Training Decreasing Blood Pressure in SHR

FENG Hong1，WU Jingqiong2，ZHOU Chunming2，HE Qinghua2，WEN Li3
（1.Dept.of Health&Exercise Science，Tianjin University of Sport，Tianjin 300381，China；2.Dept.of Postgraduate，Tianjin University of Sport，Tianjin 300381，China；3.Medical Center of Luliang People's Hospital，Luliang 3000031，China）

Objective：Using the comparative proteomics method，the plasma protein expression was examined under the situation of blood pressure decreased by six-week load-free swimming training in spontaneously hypertensive rats（SHR）to further demonstrate the mechanism of hypertension improved by exercise.Methods：Sixteen male four-week old SHR and sixteen Wistar-Kyoto （WKY）rats were randomly divided into SHR exercise group，SHR rest group，WKY exercise group and WKY rest group.Rats in SHR exercise group and WKY exercise group exercised with a six-week load-free swimming protocol（1 hour per day，5 days per week）.The blood pressure of rat was tested by CODATM2 single non-invasive blood pressure measurement appliance.The samples were used to do the two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry.Results：The blood pressure was decreased significantly after six-week load-free swimming.The six proteins were identified by mass spectrometry and data base retrieval.They are rCG45257，similar to ankyrin repeat domain 13 family，member D，chain A，rat Transthyretin，Ras association domain family 1 isoform A，fetuin B precursor and γ-actin.

six-week load-free swimming；hypertension；plasma proteomics；SHR

G 804.7

A

1005-0000（2010）05-0400-04

2010-06-07；

2010-09-06；錄用日期：2010-09-10

天津市高等學(xué)?？萍及l(fā)展基金項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：20060201）

馮 紅（1971-），女，天津市人，副教授，博士，研究方向?yàn)檫\(yùn)動(dòng)生理學(xué)、細(xì)胞與分子生物學(xué)。