白術(shù)多糖對(duì)益生菌的促生長(zhǎng)作用及結(jié)構(gòu)分析

劉麗莎，王 銳，旭日花，尚 楠，王 洋，樊 秦，李平蘭*

白術(shù)多糖對(duì)益生菌的促生長(zhǎng)作用及結(jié)構(gòu)分析

劉麗莎，王 銳，旭日花，尚 楠，王 洋，樊 秦，李平蘭*

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083)

對(duì)白術(shù)、枸杞、太子參、五味子、黨參、地黃、陳皮、靈芝的篩選結(jié)果表明，白術(shù)浸提液對(duì)嬰兒雙歧桿菌體外促生長(zhǎng)效果最為明顯。白術(shù)經(jīng)水提(1:20)、醇沉(1:3)、透析(3500D)、脫蛋白(Saveg法)后經(jīng)DEAE陰離子交換柱層析分離得到中性白術(shù)多糖(AMP)。AMP對(duì)兩大類益生菌的促生長(zhǎng)結(jié)果表明：AMP具有良好的促生長(zhǎng)效果，其中對(duì)嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolesentis)、動(dòng)物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)的促生長(zhǎng)效果最佳，且AMP的促生長(zhǎng)作用與其添加濃度有關(guān)。AMP經(jīng)紅外光譜分析具有多糖特征吸收峰；經(jīng)多角度激光散射儀結(jié)合凝膠滲透色譜(GPC-MALLS)法測(cè)得其重均分子質(zhì)量(Mw)為5527g/mol，分子質(zhì)量分布(Mw/Mn)為1.726；酸水解法及高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測(cè)(HPAEC-PAD)分析表明：AMP為雜多糖，單糖組成為阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖，其物質(zhì)的量比為13.8:11.8:70.2:4.1。

白術(shù)多糖；促生長(zhǎng)作用；分子質(zhì)量；單糖組成；益生菌

白術(shù)(Atractylodes macrocephala Koidz)為菊科(Compositae)植物白術(shù)的干燥根莖，性溫，味甘苦，具有補(bǔ)脾、益胃、燥濕、和中等功效，主要產(chǎn)于我國(guó)浙江、安徽等地。已有研究表明，白術(shù)有抗衰老、治療胃腸功能紊亂、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗菌消炎等諸多作用，這與白術(shù)中的多種生物活性成分有關(guān)[1]。目前白術(shù)活性成分的研究主要集中在蒼術(shù)酮和白術(shù)內(nèi)酯類方面，少數(shù)報(bào)道了白術(shù)多糖可以增加溶血素及調(diào)節(jié)脾淋巴細(xì)胞作用[2]，但沒(méi)有關(guān)于白術(shù)多糖對(duì)益生菌的作用方面的報(bào)道。

本研究旨在從常見藥食同源性中草藥中篩選出對(duì)雙歧桿菌具有良好促生長(zhǎng)作用的中草藥，并對(duì)該中草藥的多糖進(jìn)行提取純化，結(jié)構(gòu)分析及體外促生長(zhǎng)研究，為研制與開發(fā)新型功能性益生元提供新的思路與途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白術(shù)、枸杞、太子參、五味子、黨參、地黃、陳皮、靈芝均購(gòu)自北京同仁堂百旺山藥店。

青春雙歧桿菌CICC6070(Bifidobacterium adolesentis)、嬰兒雙歧桿菌CICC6069(Bifidobacterium infantis)、長(zhǎng)雙歧桿菌CICC6068(Bifidobacterium longum)購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；兩歧雙歧桿菌1.5091(Bifidobacterium bifidum)購(gòu)自中科院微生物研究所；動(dòng)物雙歧桿菌01(Bifidobacterium animalis)、嗜酸乳桿菌2La-12(Lactobacillus acidophilus)、植物乳桿菌T1-1(Lactobacillus plantarum)為中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室保存菌株。

L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-果糖(純度≥99%) Sigma公司；NaOH Dionex公司；Millipore超純水，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。1.2儀器與設(shè)備

DIONEX ICS-3000高效離子色譜儀 美國(guó)戴安公司；HITACHI L-2000型凝膠滲透色譜儀 日本日立公司； DAWN HELEOS-II型激光光散射儀、Optilab rEX型示差折光儀 美國(guó)懷雅特技術(shù)公司；NEXUS-470傅里葉紅外光譜儀 美國(guó)Nicolet公司；UV-2102PC型紫外可見分光光度計(jì) 尤尼柯公司；DHL-A電腦恒流泵、TH-500梯度混合器、BS-100A自動(dòng)部分收集器 上海青浦滬西儀器廠公司；ML54/02電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司；玻璃離子交換柱(2.6cm×20cm)填裝DEAE-Sepharose Fast Flow、玻璃凝膠過(guò)濾柱(1.6cm× 80cm)填裝Sepharose CL-6B Pharmacia公司； FD-1D冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 益生中草藥篩選

1.3.1.1 中草藥浸提液及其促生長(zhǎng)培養(yǎng)基制備

各取10g中草藥，分別加入200mL蒸餾水浸泡24h，煎煮30min后過(guò)濾，濾渣加同量水再煎30min，合并濾液蒸發(fā)濃縮至100mL得到8種10%中草藥浸提液，按體積比1:9加入液體MRS培養(yǎng)基中，充氮后121℃滅菌20min置于冰箱備用[3]。

1.3.1.2 不同中草藥浸提液對(duì)雙歧桿菌的增殖作用

將活化好的B. infantis分別按1%(約106CFU/mL)的接種量接種于含不同中草藥浸提液的培養(yǎng)基中，同時(shí)以不加藥液的MRS培養(yǎng)基為對(duì)照，37℃培養(yǎng)12h后，進(jìn)行樣品10倍系列梯度稀釋至合適濃度，采用Hungate厭氧滾管技術(shù)[4]，37℃培養(yǎng)48h后計(jì)數(shù)。

1.3.2 白術(shù)多糖的提取純化及純度鑒定

1.3.2.1 水提醇沉法制備白術(shù)粗多糖

將白術(shù)浸提液(制備方法見1.2.1.1節(jié))濃縮后加入3倍體積的95%的乙醇，置于4℃冰箱醇沉過(guò)夜，8000r/min離心10min收集沉淀，沉淀復(fù)溶后，對(duì)水透析48h，除去乙醇、小分子糖、蛋白質(zhì)、鹽等。濃縮透析液，真空冷凍干燥，得白術(shù)粗多糖。

1.3.2.2 Saveg法除蛋白[5]

白術(shù)粗多糖熱水復(fù)溶后，將Saveg液(氯仿與正丁醇體積比4:1)與糖液以2:1體積比混合搖勻脫蛋白，重復(fù)4次，至紫外測(cè)定在260、280nm波長(zhǎng)處無(wú)蛋白質(zhì)和核酸的吸收峰。糖液對(duì)水透析48h，除去氯仿和正丁醇，濃縮，冷凍干燥得到不含蛋白質(zhì)的白術(shù)多糖。

1.3.2.3 DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子柱層析純化

將除蛋白后的白術(shù)多糖配制成10mg/mL溶液，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后上樣，50mmol/LTris-HCl和0～1.0mol/L Tris-HCl-NaCl線性梯度混合洗脫，流速4.0mL/min，2min/管，收集40管，部分收集器收集洗脫液。以苯酚-硫酸比色法[6]跟蹤檢測(cè)每管多糖含量。收集含多糖的峰對(duì)去離子水透析24h，濃縮后冷凍干燥，得到白術(shù)多糖純品并命名為AMP(Atractylodes macrocephala polysaccharides)。

1.3.2.4 多糖純度鑒定

常壓凝膠色譜層析：將AMP凍干樣品復(fù)溶，配制成10mg/mL溶液，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后上樣，0.05mol/L NaCl洗脫，流速30mL/h，12min/管，自動(dòng)部分收集器收集洗脫液。苯酚-硫酸比色法跟蹤檢測(cè)每管多糖含量，繪制曲線圖。

紫外(UV)檢測(cè)：將純品AMP制備成0.5mg/mL樣品待測(cè)液，以去離子水為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)220～580nm范圍內(nèi)利用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行紫外全波長(zhǎng)掃描，以確定AMP中是否含有核酸和蛋白質(zhì)。

1.3.3 白術(shù)多糖對(duì)雙歧桿菌體外促生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

1.3.3.1 白術(shù)多糖對(duì)雙歧桿菌體外生長(zhǎng)的影響

將活化好的5株雙歧桿菌分別以1%接種量(約106CFU/ mL)接種于AMP，添加量為0、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%的MRS培養(yǎng)基中，各添加量重復(fù)3組，37℃培養(yǎng)24h后，于600nm波長(zhǎng)處測(cè)定各培養(yǎng)液的OD值。

1.3.3.2 白術(shù)多糖對(duì)乳桿菌的體外生長(zhǎng)影響

將活化好的2株乳桿菌分別以1%接種量(約106CFU/mL)接種于AMP，添加量為0、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%的MRS培養(yǎng)基中，各添加量重復(fù)3組，37℃培養(yǎng)24h后測(cè)定OD600nm。

1.3.4 白術(shù)多糖的結(jié)構(gòu)分析

1.3.4.1 分子質(zhì)量測(cè)定

多角度激光散射儀結(jié)合凝膠滲透色譜(GPC/MALLS)法檢測(cè)AMP重均分子質(zhì)量。色譜條件：色譜柱Shodex OHpak SB-806M HR (8.0mm×300mm)；檢測(cè)器：激光光散射儀、示差折光儀；dn/dc值為0.135；流動(dòng)相：0.1mol/L NaNO3；流速：0.5mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積：200μL；樣品質(zhì)量濃度：0.2mg/mL。

1.3.4.2 紅外光譜分析

采用KBr壓片法，NEXUS-470 FTIR紅外檢測(cè)器在400～4000cm-1檢測(cè)范圍掃描32次。

1.3.4.3 單糖組成測(cè)定

準(zhǔn)確稱取AMP純品干粉5mg，加入200μL 濃H2SO4靜置，添加800μL蒸餾水，100℃恒溫水解2.5h，冷卻后定容至2mL，水解液以固體BaCO3中和，離心除去雜質(zhì)，將上清液稀釋20倍并過(guò)濾后進(jìn)行單糖定性檢測(cè)。

選擇不同質(zhì)量濃度(0.2、0.5、1.0、4.0、10.0μg/mL)的混合單糖標(biāo)準(zhǔn)品，以單糖濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，以峰面積(nC×min)為縱坐標(biāo)繪制每種單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行單糖定量檢測(cè)。

HPAEC-PAD色譜條件：糖分析柱(CarboPacTMPA10，4mm×250mm)；糖保護(hù)柱(CarboPacTMPA10，4mm×50mm)；流動(dòng)相：H2O和200mmol/L NaOH，線性梯度洗脫；ED50A電化學(xué)檢測(cè)器；進(jìn)樣體積：25μL；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生中草藥的篩選

不同中草藥浸提液按1.0%添加到MRS培養(yǎng)基中，對(duì)B. infantis生長(zhǎng)影響的結(jié)果見圖1。

圖1 1.0%中草藥浸提液對(duì)B. infantis 體外生長(zhǎng)的影響Fig.1 Promoting effects of 1.0% water extracts from eight common medicinal and edible Chinese herbs on the growth of B. infantis

圖1 顯示，8種中草藥浸提液對(duì)B. infantis生長(zhǎng)的影響有較大差異，其中白術(shù)浸提液的促生長(zhǎng)效果最為明顯，與空白對(duì)照相比，達(dá)到了極顯著水平(P＜0.01)；而枸杞、五味子則有一定的抑制作用，其余中草藥浸提液對(duì)B. infantis生長(zhǎng)無(wú)明顯促進(jìn)作用(P＞0.05)，這可能與藥液添加濃度、處理方式及受試菌株有關(guān)。

許多研究報(bào)道中草藥浸提液及中草藥多糖可以促進(jìn)雙歧桿菌的增殖[7-9]，但到目前為止，還沒(méi)有關(guān)于白術(shù)多糖對(duì)益生菌促生長(zhǎng)作用的報(bào)道。因此，本研究進(jìn)一步分離純化該白術(shù)多糖，并對(duì)其促生長(zhǎng)作用進(jìn)行考察與驗(yàn)證。

2.2 白術(shù)多糖提取純化

白術(shù)浸提液經(jīng)水提醇沉后獲得粗多糖，得率為1g/10g白術(shù)，呈灰白色，片狀或粉末狀，水溶性良好。粗多糖經(jīng)DEAE Sepharose F F柱層析(Tris-HCl和Tris-HCl-NaCl線性梯度混合洗脫)結(jié)果見圖2。

圖2 白術(shù)多糖的DEAE陰離子交換柱洗脫曲線Fig.2 Elution profile of crude polysaccharides from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae on DEAE Sepharose FF column

由圖2的DEAE陰離子交換柱洗脫曲線可以看出，白術(shù)粗多糖在Tris-HCl洗脫時(shí)得到一個(gè)中性多糖洗脫峰，峰形單一對(duì)稱，將此峰命名為AMP。

2.3 純度鑒定

采用常壓凝膠色譜層析和紫外檢測(cè)對(duì)AMP的純度進(jìn)行鑒定，結(jié)果見圖3、4。

圖3 AMP的Sepharose CL-6B凝膠層析洗脫曲線Fig.3 Elution profile of the neutral polysaccharide fraction of crudepolysaccharides from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae on Sepharose CL-6B column

圖3 顯示，AMP經(jīng)Sepharose CL-6B分子篩柱層析，苯酚-硫酸法跟蹤多糖含量時(shí)在26～35管處得到一峰，峰形單一對(duì)稱，無(wú)雜峰，表明經(jīng)此方法純化獲得的白術(shù)多糖為均一多糖。

圖4 AMP的紫外掃描圖Fig.4 UV scanning spectrum of the purified neutral polysaccharide from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae

從圖4對(duì)白術(shù)多糖進(jìn)行的紫外全波長(zhǎng)掃描(220～580nm)結(jié)果可以看出，白術(shù)多糖在280nm附近沒(méi)有蛋白質(zhì)的特征吸收峰，在260nm附近沒(méi)有核酸特征吸收峰，說(shuō)明該多糖中不含蛋白質(zhì)和核酸。

2.4 白術(shù)多糖對(duì)益生菌促生長(zhǎng)作用

2.4.1 不同添加量白術(shù)多糖對(duì)雙歧桿菌促生長(zhǎng)作用

圖5 不同添加量AMP對(duì)雙歧桿菌生長(zhǎng)的影響Fig.5 Effect of amount of the purified neutral polysaccharide from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae added to medium on the growth of Bifidobacterium

由圖5可知，隨著AMP添加量的增加，B. adolescentis、B. infantis和B. animalis的生長(zhǎng)表現(xiàn)為逐漸增加的趨勢(shì)，在2.0%添加量時(shí)達(dá)到了飽和，其中對(duì)B. adolescentis、B. infantis的促生長(zhǎng)效果尤為顯著。當(dāng)AMP添加量高于2.0%時(shí)，促生長(zhǎng)效果反而減弱，這可能是由于高濃度的糖引起了滲透壓、pH值改變及代謝產(chǎn)物的積累等限制了雙歧桿菌的生長(zhǎng)。而不同添加量的AMP對(duì)B. longum及B. bifidum的促生長(zhǎng)作用均不顯著，促進(jìn)效果不明顯。

2.4.2 不同添加量白術(shù)多糖對(duì)乳桿菌的促生長(zhǎng)作用

圖6 不同添加量AMP對(duì)乳桿菌生長(zhǎng)的影響Fig.6 Effect of amount of the purified neutral polysaccharide from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae added to medium on the growth of Lactobacillus

由圖6可知，AMP對(duì)2株乳桿菌的促生長(zhǎng)作用與其添加量密切相關(guān)。在2.0%的添加量范圍內(nèi)，隨著AMP添加量的增加，對(duì)L. plantarum的促生長(zhǎng)作用顯著增強(qiáng)，添加量為2.0%時(shí)達(dá)飽和。但對(duì)L. acidophilus而言，僅在1.0%的范圍內(nèi)，促生長(zhǎng)效果隨AMP添加量增加而增強(qiáng)，但明顯低于對(duì)L. plantarum的促生長(zhǎng)效果。2.5AMP摩爾質(zhì)量測(cè)定

表1 白術(shù)多糖AMP的摩爾質(zhì)量Table 1 Results of determining the neutral polysaccharide from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae by GPC-MALLS

由表1可知，AMP的Mw為5.527×103g/mol，Mn為3.203×103g/mol，Mw/Mn比值為1.726。Mw/Mn比值為多糖摩爾質(zhì)量多分散系數(shù)(d)，其大小可作為判斷樣品摩爾質(zhì)量分布是否均勻的指標(biāo)。如果樣品分子大小比較均一，d值應(yīng)比較小或接近1.0，本結(jié)果顯示AMP的d值為1.726，說(shuō)明AMP的摩爾質(zhì)量分布較均一。

池玉梅等[10]將水提醇沉后經(jīng)DEAF纖維素柱分離得到的兩個(gè)水溶性白術(shù)多糖，經(jīng)高效液相(HPLC)測(cè)得平均相對(duì)分子質(zhì)量分別為1.36×105和1.04×105。梁中煥等[1]將Sephadex G-75層析柱制得的水溶性白術(shù)粗多糖經(jīng)HPLC測(cè)得相對(duì)分子質(zhì)量為8374。黃海英[11]用HPLC法測(cè)得生白術(shù)中性多糖相對(duì)分子質(zhì)量為5896.43。侯軒等[12]采用復(fù)合酶法提取白術(shù)多糖經(jīng)DEAE纖維素柱層析純化后經(jīng)凝膠滲透色譜法測(cè)得其重均分子質(zhì)量(Mw)為4360 D。而本實(shí)驗(yàn)分離純化的白術(shù)多糖(AMP)重均分子質(zhì)量為5527g/mol。

2.6 AMP紅外光譜

圖7 白術(shù)多糖AMP的FT-IR譜圖Fig.7 FT-IR spectrum of the neutral polysaccharide from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae

由圖7可知，3382.28cm-1處的極強(qiáng)而寬的吸收峰歸屬于羥基，是O－H伸縮振動(dòng)峰；2934.83cm-1和2885.03cm-1處的中強(qiáng)峰是C－H伸縮振動(dòng)峰；1453.98cm-1處是C－H彎曲振動(dòng)峰；在1114.67、1033.69cm-1和988.53 cm-1處的強(qiáng)峰是C－O伸縮振動(dòng)峰，并表明糖環(huán)形式為吡喃糖苷；這些特征峰都是典型的多糖特征吸收峰，說(shuō)明該物質(zhì)為多糖類化合物；1633.10cm-1處的強(qiáng)吸收峰是C＝O鍵伸縮振動(dòng)峰；1342.23cm-1處出現(xiàn)的是O－H鍵的彎曲振動(dòng)峰；1280～1240cm-1處是環(huán)醚的不對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰。

2.7 AMP單糖組成

圖8 單糖標(biāo)品(1.0g/mL)HPAEC-PAD色譜圖Fig.8 HPAEC-PAD chromatogram of standard monosaccharides

圖9 AMP的HPAEC-PAD色譜圖Fig.9 HPAEC-PAD chromatogram of the neutral polysaccharide from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae

由圖8、9可以看出，圖譜基線平穩(wěn)，雜質(zhì)干擾少，各單糖的分離效果好，峰型單一且對(duì)稱。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)譜圖和各單糖的回歸方程，得到了樣品的單糖組成和比例。結(jié)果顯示，AMP是一種雜多糖，主要含有阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖，并含有少量的甘露糖。阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖的含量摩爾比為13.8:11.8:70.2:4.1。

目前已報(bào)道的白術(shù)多糖都是雜多糖，單糖組成中通常含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖和木糖中的3～4種單糖。池玉梅等[10]分離得到的兩個(gè)水溶性白術(shù)多糖中，一個(gè)由半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖組成；另一個(gè)由木糖、阿拉伯糖、半乳糖組成。梁中煥等[1]報(bào)道的白術(shù)水溶性多糖的單糖組成為葡萄糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖，物質(zhì)的量比為7.36:1.00:3.05:1.52。本實(shí)驗(yàn)中AMP由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和少量甘露糖組成，其中葡萄糖的含量較高，與已報(bào)道的白術(shù)多糖的單糖組成結(jié)果不完全一致，這也有可能與該白術(shù)的來(lái)源和分離純化方法不同有關(guān)。

3 結(jié) 論

本研究從8種中草藥中篩選出具有明顯益生作用的白術(shù)，并從中分離提取了活性成分白術(shù)多糖(AMP)，分析測(cè)定了AMP的分子質(zhì)量與單糖組成等結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，考察了AMP對(duì)益生雙歧桿菌和乳桿菌的促生長(zhǎng)效果。結(jié)果表明AMP是一個(gè)雜多糖，由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和少量甘露糖組成，在MRS培養(yǎng)基中以2.0%的添加量加入后，對(duì)B. adolescentis、B. infantis、B. animalis和L. plantarum具有明顯的促生長(zhǎng)效果；1.0%的添加量對(duì)L.acidophilus具有良好的促生長(zhǎng)作用。顯示出該AMP具有作為新型益生元開發(fā)的巨大潛力和應(yīng)用前景。

[1]梁中煥. 硫酸化修飾對(duì)白術(shù)多糖理化性質(zhì)及生物活性影響的研究[D].長(zhǎng)春: 東北師范大學(xué), 2008.

[2]湯新慧. 白術(shù)多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響[J]. 中醫(yī)研究, 1998, 11(2): 7-9.

[3]李平蘭, 時(shí)向東, 呂燕妮. 常見中草藥對(duì)兩種腸道有益菌體外生長(zhǎng)的影響[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 8(5): 33-36.

[4]HUNGATE R E. A roll tube method for cultivation of strict anaerobes[J]. Methods in Microbiology, 1969, 3B: 117-132.

[5]歐陽(yáng)清波, 李平蘭, 李偉欣, 等. 雙歧桿菌22-5胞外多糖(EPS)的分離、純化及純度鑒定[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2005, 31(6): 127-130.

[6]徐斌, 董英, 林琳, 等. 改良苯酚-硫酸法測(cè)定苦瓜多糖含量[J]. 食品科學(xué), 2005, 26(7): 79-82.

[7]邱宏端, 林娟, 宋智晶, 等. 植物多糖的提取及對(duì)雙歧桿菌的增殖作用[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào), 2002, 18(2): 96-100.

[8]張火云. 枸杞及其他中藥對(duì)雙歧桿菌(Bifidobacteria)增殖和發(fā)酵影響的研究[D]. 成都: 四川大學(xué), 2004.

[9]張耀, 朱偉云. 中草藥對(duì)消化道微生物的影響[J]. 微生物學(xué)通報(bào), 2007, 34(3): 569-571.

[10]池玉梅, 李偉, 文紅梅, 等. 白術(shù)多糖的分離純化和化學(xué)結(jié)構(gòu)研究[J].中藥材, 2001, 24(9): 647-648.

[11]黃海英. 白術(shù)活性成分的提取、純化及功能性研究[D]. 南昌: 南昌大學(xué), 2006.

[12]侯軒, 周家容, 田允波. 白術(shù)多糖的提取、分離純化及分子量測(cè)定[J]. 仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院學(xué)報(bào), 2009, 22(2): 18-21.

Promoting Effect of Polysaccharides Isolated from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae on the Growth of Probiotics and Structure Analysis

LIU Li-sha，WANG Rui，XU Ri-hua，SHANG Nan，WANG Yang，F(xiàn)AN Qin，LI Ping-lan*
(College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China)

Among eight common medicinal and edible Chinese herbs, namely Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Fructus Lycii Chinensis, Radix Pseudostellariae, Fructus Schisandrae Chinensis, Radix Codonopsitis, Radix Rehmanniae, Pericarpium Citri Reticulatae and Glossy Ganoderma), the water extract from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae had the most obvious promoting effect on the in vitro growth of Bifidobacterium infantis. A neutral polysaccharide fraction was obtained from Rhizoma Atractylodis Macrocephalae after water extraction (1:20 raw material/water ratio), absolute ethanol precipitation (1:3 concentrated crude extract/absolute ethanol), dialysis (through a membrane with a molecular weight cut-off of 3500 D), Sevag deproteinization and DEAE anion exchange column chromatographic separation. The polysaccharide fraction had a promoting effect on the growth of Bifidobacterium and Lactobacillus, especially on B. infantis, B. animalis, B. adolescentis and Lactobacillus plantarum in a concentration-dependent fashion. The infrared spectral analysis showed that the fraction had characteristic absorption peaks of polysaccharides, and its weight-average molecular weight (Mw) was measured to be 5527 g/mol using GPC coupled with a multiangle laser light scattering photometer (GPC-MALLS) and its molecular weight distribution (Mw/Mn) was 1.726. The analysis using acidic hydrolysis followed by high-performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detection (HPAEC-PAD) revealed that the polysaccharide was a hetero polysaccharide and its monosaccharide composition consisted of rabinose, galactose, glucose and mannose in a molar ratio of 13.8:11.8:70.2:4.1.

Rhizoma Atractylodis Macrocephala polysaccharide；growth promoting effect；molecular weight；monosaccharide composition；probiotics

TS201.4；R282.6

A

1002-6630(2010)19-0124-05

2010-06-23

國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(091001924)；國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2008AA10Z324)

劉麗莎(1989—)，女，本科生，研究方向?yàn)橐嫔c益生元的開發(fā)與利用。E-mail：liulisha0616@sina.com *通信作者：李平蘭(1964—)，女，教授，博士，研究方向?yàn)槭称肺⑸锱c發(fā)酵工程。E-mail：plli@sohu.com