蔡 斌，范尚坦，張 勇，康設(shè)旺

(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學(xué)科，福州 350025)

深Ⅱ度兔子燙傷模型的建立

蔡 斌，范尚坦，張 勇，康設(shè)旺

(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學(xué)科，福州 350025)

目的 建立深Ⅱ度家兔燙傷模型。方法 采用自行設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)易高溫燙傷裝置建立新西蘭兔燙傷模型，通過溫度和時(shí)間兩個(gè)因素控制燙傷的深度，進(jìn)行病理切片做組織學(xué)檢查，判定燙傷的深度。結(jié)果 當(dāng)燙傷溫度為180℃，燙傷時(shí)間10 s，可以建立比較標(biāo)準(zhǔn)的深Ⅱ度家兔燙傷模型。結(jié)論 使用本方法建立模型方法簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

新西蘭兔;燙傷;燒傷;組織學(xué)診斷;模型，動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)性燒燙傷動(dòng)物模型的建立，是關(guān)系到燒傷藥物研究成敗與否的關(guān)鍵。建立燒傷面積恒定，燒傷程度深淺一致的符合燒傷藥效學(xué)研究的燒燙傷動(dòng)物模型比較困難，盡管文獻(xiàn)中報(bào)道的造模方法很多，如燃 燒法［1］，直接熱水燙傷法［2］，蒸汽燙傷法［3］，但這些方法都不同程度存在著難以控制致傷面積和致傷程度深淺不一的問題。通過不斷摸索，我們自行設(shè)計(jì)了簡(jiǎn)易的高溫燙傷裝置，使用該裝置能夠建立燙傷面積恒定，燙傷程度一致的動(dòng)物模型，而且結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象:新西蘭兔48只［上海市松江區(qū)松聯(lián)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)，SCXK(瀘)2007-0011］，雌雄不計(jì)，體重 2.0±0.2 kg。

1.1.2 燙傷裝置:自制圓柱形鐵筒，底部直徑5cm，高16cm，重量1.2 kg，內(nèi)部為空心，上方有一小孔，由此小孔倒入蓖麻油，放入溫度計(jì)用于控制溫度(圖1)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 燙傷模型的制備:在兔子背部涂上10%硫化鈉脫毛劑，然后用生理鹽水洗凈脫毛區(qū)，使背部脫毛面積約10cm×10cm。脫毛后24 h，以25 g/100mL的烏拉坦按4mL/kg麻醉［4］。將裝有蓖麻油簡(jiǎn)易高溫燙傷裝置放在電爐上加熱后，利用裝置自重將裝置底部置于燙傷區(qū)域造成燙傷。致傷條件包括致傷溫度及致傷時(shí)間，致傷溫度分別為100℃，120℃ ，150℃，180℃四個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)再按致傷時(shí)間劃分5 s，8 s和10 s兩個(gè)點(diǎn)。將48只兔子分為12組，每一致傷點(diǎn)燙傷4只兔子，于燙傷后24 h取材，組織塊用病理固定液固定，做組織檢查，按組織學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢查篩選出導(dǎo)致深Ⅱ度燙傷的時(shí)間點(diǎn)。

圖1 簡(jiǎn)易高溫燙傷裝置Fig.1 Simple device for high-temperature scald

1.2.2 組織學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］:Ⅰ度燒傷傷及表皮淺層，基底細(xì)胞層健在。淺Ⅱ度燒傷傷及整個(gè)表皮和部分真皮乳頭層，創(chuàng)面愈合靠殘存的生發(fā)層和汗腺、毛囊等皮膚附件的上皮增殖，如無(wú)繼發(fā)感染，可治愈，一般不留疤痕。深I(lǐng)I度燒傷達(dá)真皮乳頭層以下，但殘留部份網(wǎng)狀層及皮膚附件。如無(wú)繼發(fā)感染，傷后3周創(chuàng)面依皮膚附件上皮增殖而治愈，常留疤痕。Ⅲ度燒傷系全層皮膚燒傷，可傷及皮下、肌肉、骨骼、和臟器。因喪失上皮再生來源，創(chuàng)面修復(fù)靠自體皮移植或周圍健康上皮長(zhǎng)入。

2 結(jié)果

燙傷后24 h病理切片觀察，100℃和120℃(5 s，8 s，10 s)者均為淺Ⅱ度燙傷(圖2，見彩插 2)，150℃(5 s，8 s)者燙傷程度淺Ⅱ度和深Ⅱ度之間。150℃(10s)，180℃(5 s，8 s，10 s)為深Ⅱ度。

3 討論

在燒傷藥物的研究中，為了能客觀的評(píng)判和比較藥物的療效，動(dòng)物模型燒燙傷程度的選擇，也是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。我們的體會(huì)是:Ⅰ度和淺Ⅱ度燒傷或燙傷，藥物組和陽(yáng)性對(duì)照組甚至空白組的動(dòng)物，只要治療過程中無(wú)繼發(fā)感染，創(chuàng)面的愈合時(shí)間最后的愈合過程都相差不顯著，這是因?yàn)棰穸群蜏\Ⅱ度燒傷或燙傷，其創(chuàng)傷程度較輕，僅傷及表皮和真皮層，如無(wú)繼發(fā)感染，其愈合過程以自然愈合為主。因此，在燒燙傷藥物的藥效學(xué)研究中，以上兩種深度的損傷難以比較出所研究藥物與陽(yáng)性對(duì)照藥治療燒傷療效的差別。而Ⅲ度燒燙傷由于創(chuàng)傷嚴(yán)重，動(dòng)物全身反應(yīng)大，容易死亡，還存在治療周期長(zhǎng)，影響因素多等原因，也不適合做燒傷藥物研究的動(dòng)物模型。比較理想的是選用深Ⅱ度的燒燙傷動(dòng)物模型，創(chuàng)傷程度適中，傷達(dá)真皮乳頭層，損傷部分網(wǎng)狀層及皮膚附件，愈合周期在20 d左右，能明顯區(qū)分各組藥物的療效。

建立燒燙傷模型的成敗主要取決于燒傷面積是否恒定，燒傷深度是否一致。燃燒法常因燃料涂布不均勻及未能達(dá)到一次同時(shí)滅火而致燒傷創(chuàng)面深淺不一致，從復(fù)制燒/燙傷模型的角度看，燙傷模型對(duì)致傷的時(shí)間和溫度容易控制，所造模型創(chuàng)面深度均勻一致，一般比燒傷模型穩(wěn)定準(zhǔn)確。而建立燙傷模型的方法很多，但多數(shù)方法的熱力作用依賴于水產(chǎn)生，溫度只能在100℃以內(nèi)調(diào)節(jié)，要造成深Ⅱ度燙傷所需的時(shí)間較長(zhǎng)，另外某些燙傷方法如直接熱水燙傷法和熱蒸汽燙傷法需要在特制的防護(hù)裝置的保護(hù)下保證燙傷面積的恒定，操作起來比較復(fù)雜且常出現(xiàn)防護(hù)不嚴(yán)的問題。所以雖然文獻(xiàn)中報(bào)道的造模方法很多，但都不同層次反應(yīng)出以下缺陷:(1)深度不易控制;(2)面積不易恒定;(3)方法復(fù)雜;(4)重現(xiàn)性不好。這些問題長(zhǎng)期影響燒燙傷研究的結(jié)果。而本方法借助裝置自重，壓力恒定，且致傷的溫度和時(shí)間均可控制，故所得模型創(chuàng)面深度一致，重現(xiàn)性好。本方法采用油產(chǎn)生熱力，溫度可遠(yuǎn)高于水，有效地縮短了造模的時(shí)間。燙傷的面積取決于裝置底部面積的大小，接觸燒傷區(qū)的面積是恒定的故燙傷面積恒定，無(wú)需使用防護(hù)裝置，操作簡(jiǎn)單，為建立動(dòng)物燙傷模型提供了一個(gè)較為滿意的方法。

燒燙傷的程度還取決于燒燙傷組織的情況和動(dòng)物的機(jī)體反應(yīng)性［6］，動(dòng)物燒燙傷模型的建立應(yīng)在麻醉狀態(tài)下進(jìn)行，如在非麻醉狀態(tài)下操作下，動(dòng)物因疼痛掙扎導(dǎo)致燙傷部位受力不均造成創(chuàng)面深淺不一，疼痛掙扎導(dǎo)致的體位改變可能會(huì)造成創(chuàng)傷面積不能恒定等問題。為了保證燙傷深度的一致還應(yīng)盡可能地減短被毛，脫毛劑10%硫化鈉，使用時(shí)用棉花蘸取脫毛劑浸濕脫毛區(qū)，然后立即用溫生理鹽水清洗，用此種方法脫毛可以將毛脫凈且對(duì)脫毛區(qū)皮膚損傷較輕。

燒傷和燙傷的標(biāo)準(zhǔn)要明確一致，一般以病理檢驗(yàn)的組織學(xué)改變作為劃分標(biāo)準(zhǔn)。燙傷后，由于熱力對(duì)皮膚組織的損傷是一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的過程［7］，燒傷創(chuàng)面的組織可能會(huì)因?yàn)闊崃Φ倪M(jìn)一步作用，從而表現(xiàn)出創(chuàng)面深度的加深，因此我們認(rèn)為制作燙傷模型判定燙傷深度應(yīng)以傷后24 h后的結(jié)果為準(zhǔn)。

使用本方法復(fù)制燙傷模型具有方法簡(jiǎn)單，模型穩(wěn)定，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。但本方法缺少對(duì)燒傷面積的調(diào)節(jié)和控制，燒傷后的嚴(yán)重程度取決于燒傷創(chuàng)面的深度和面積，燒傷面積是按體表面積確定的，而不是絕對(duì)面積，所以本方法只適用于燒傷創(chuàng)面的觀察，不適合重度燒傷(大面積燒傷)嚴(yán)重程度判斷，此為本方法的不足之處。

［1］王大鵬，孫笑非，徐華彪，等.燒傷合并人工海水浸泡后對(duì)實(shí)驗(yàn)兔腎臟病理形態(tài)學(xué)的影響［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2006，16(9):533－536.

［2］王友臣，宋淑君，刑利和，等.磷燒傷對(duì)大鼠肝臟及線粒體的損傷［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2005，15(5):295－297.

［3］葉建勛，葉偉宏，蔡立民，等.創(chuàng)面靈治療燒燙傷的藥效學(xué)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2001，7(1):38－39.

［4］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)(第2版)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:1180.

［5］中華人民共和國(guó)國(guó)家職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)［S］.GBZ103－2007，2007.

［6］劉毅，陳璧，賈赤宇.不同深度小鼠蒸汽燙傷模型的建立［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，17:94－96.

［7］孫家玲，王曉紅，葛繩德，等.燒傷創(chuàng)面早期深度變化病理學(xué)研究［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，17(增刊):77.

Establishment of the Second-degree Scalded Model in Rabbit

CAI Bin，F(xiàn)AN Shang-tan，ZHANG Yong，KANG She-wang
(Department of Pharmacy，F(xiàn)uzhou General Hospital of Nanjing Military Region，F(xiàn)uzhou 350025，China)

Objective To establish deep second-degree scalded model in rabbit.Methods The scalded model with NewZealand rabbit was replicated by simple high-temperature device which was self-designed.The degree of scald was controlled through temperature and time，and determined by the histological examination of the pathological section.Results A quite standard deep second-degree scalded model with rabbit was established when scalded with the temperature of 180℃continuing 10 seconds.Conclusion The established method is simple，stable and reproductive.

NewZealand rabbit;Scald;Burn;Histological diagnosis;Model，animal

R332

A

1671-7856(2010)07-0010-03

2010-03-29

圖2 家兔背部皮膚深Ⅱ度燙傷 （HEx100）
Fig.2 Deep second-degree scald on the back of rabbit（HEx100）

蔡斌(1985－)，男，藥師，研究方向:藥物制劑學(xué)。E-mail:muncb6313@yahoo.com.cn