腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體在卵巢上皮癌中的表達(dá)

李 艷,董自江

(江蘇省連云港市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇連云港,222002)

卵巢癌位于女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之首,死亡率最高,嚴(yán)重威脅婦女生命。近年來(lái),為癌癥患者尋求新的化療藥物靶點(diǎn)、提高化療療效已成為研究熱點(diǎn)。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)是腫瘤壞死因子(TNF)超家族新成員,有廣譜的抗瘤作用,且對(duì)正常組織細(xì)胞無(wú)毒性[1],因此有望應(yīng)用于腫瘤基因治療。Lancaster等[2]檢測(cè)了109例晚期卵巢患者的 TRAIL表達(dá),研究發(fā)現(xiàn)TRAIL高表達(dá)患者的生存率更長(zhǎng)。本文研究了不同臨床分期及組織病理分級(jí)卵巢癌組織中T RAIL的表達(dá),探討其在抑制卵巢癌細(xì)胞增殖中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

35份卵巢癌標(biāo)本均來(lái)自2006年5月～2009年7月本院收治的卵巢癌患者,平均年齡(39.91±8.59)歲(23～52歲),其中漿液性囊腺癌23例、黏液性囊腺癌12例;高分化15例,中分化9例,低分化11例;根據(jù)第7版婦產(chǎn)科學(xué)2000年FIGO分期:Ⅰ期10例,Ⅱ期14例,Ⅲ期11例。同時(shí)選取卵巢良性腫瘤組織12份,因其他原因切除的正常卵巢組織12份。均為絕經(jīng)前婦女,前半年無(wú)激素使用史、化療史,排除內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病,診斷均經(jīng)組織病理檢查證實(shí)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

試劑采用兔抗人蛋白多克隆抗體TRAIL(Cell Sciense公司),SP試劑盒(福州邁新生物技術(shù)有限公司)。所有標(biāo)本按常規(guī)石蠟切片,切成2μ m的連續(xù)切片,脫蠟水化,按免疫組化SP法進(jìn)行染色。Ⅰ抗是兔抗人蛋白多克隆抗體TRAIL(1:100稀釋),在4℃的條件下孵育24 h;Ⅱ抗是生物素化羊抗鼠或兔IgG,室溫下孵育40 min,DAB顯色孵育5 min,常規(guī)脫水 中性樹(shù)膠封片、拍照。實(shí)驗(yàn)中將已知的 TRAIL陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照,用PBS緩沖液代替Ⅰ抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果觀察及圖象分析

免疫組化染色示陽(yáng)性反應(yīng)在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜,細(xì)胞核不著色。無(wú)棕黃色為(-);淡棕黃色為(+);棕黃色為();棕褐色為( )。同樣物鏡下觀察陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為(-);陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%為(+);陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)11%～50%為( );陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%為( )。用生物圖象分析軟件對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,在20倍物鏡下每組隨機(jī)選取視野59個(gè),分別測(cè)定每個(gè)視野的平均吸光度(A)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,對(duì)多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用方差分析,率的比較用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TRAIL在各組表達(dá)的陽(yáng)性率比較

TRAIL免疫反應(yīng)的強(qiáng)度在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、不同臨床分期卵巢癌依次減弱,著色也變淡,陽(yáng)性率也依次降低,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)連續(xù)校正χ2檢驗(yàn),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 TRAIL在不同臨床分期卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)

2.2 TRAIL在各組平均吸光度比較

TRAIL表達(dá)的平均吸光度按正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、不同組織病理分期卵巢癌的順序依次遞減,各組間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但是正常卵巢組織與良性卵巢組織之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);高、中分化間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);卵巢癌其他組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 TRAIL在不同組織病理分級(jí)卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)

3 討 論

TRAIL是近年新發(fā)現(xiàn)的一種凋亡誘導(dǎo)配體,共5個(gè)受體,包括 T RAILR1(DR4)、T RAILR2(DR5)、TRAILR3(DCR1)、TRAILR4(DCR2)和OPG[3]。DR4、DR5是死亡受體,在各種腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞均有不同程度的表達(dá);DCR1、DCR2、OPG是誘騙受體,只在正常組織中表達(dá),在腫瘤組織中不表達(dá)。在正常組織中,DCR1、DCR2通過(guò)與死亡受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合TRAIL,而使正常組織逃逸TRAIL的殺傷作用。因此,TRAIL能夠選擇性有效地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)[4-5]。TRAIL通過(guò)與死亡受體特異性結(jié)合,激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),傳遞和放大凋亡信號(hào),從而誘導(dǎo)靶細(xì)胞發(fā)生凋亡。對(duì)卵巢癌細(xì)胞的研究提示,存在兩種以上的TRAIL信號(hào)傳導(dǎo)途徑[6],細(xì)胞FLICE抑制蛋白的表達(dá)[7]、IL-8[8]等也影響TRAIL的功能。王曉云等[9]通過(guò)轉(zhuǎn)染T RAIL的內(nèi)皮祖細(xì)胞作用于卵巢癌動(dòng)物模型,發(fā)現(xiàn)對(duì)移植瘤具有抑制作用,為卵巢癌靶向治療應(yīng)用于臨床提供了有力的支持。

本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化技術(shù),在卵巢上皮性癌組織中檢測(cè)到T RAIL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明T RAIL表達(dá)的陽(yáng)性率在Ⅰ期卵巢癌最高,Ⅱ期次之,Ⅲ期最低,提示隨著癌組織臨床分期的不同 TRAIL的表達(dá)有一定變化,卵巢癌臨床分期越高,陽(yáng)性率越低;反之,陽(yáng)性率越高。而且TRAIL在正常卵巢組織和卵巢良性組織的表達(dá)也不同,在良性腫瘤中陽(yáng)性率降低。同時(shí)本研究利用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)對(duì)TRAIL在不同組織病理分級(jí)卵巢癌組織中的表達(dá)進(jìn)行半定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn):TRAIL在卵巢癌中的表達(dá)按病理分級(jí)呈遞減趨勢(shì),腫瘤分級(jí)越高,表達(dá)越高,平均吸光度越大;反之,腫瘤分級(jí)越低,表達(dá)越低,平均吸光度越小。本實(shí)驗(yàn)表明,TRAIL參與了抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖過(guò)程,而且可能參與了卵巢上皮癌的腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制,若是能使生物療法同化學(xué)療法二者共同結(jié)合使用,可降低化療藥物的不良反應(yīng),提高卵巢癌患者的5年生存率,為卵巢癌的基因治療提供了可靠的理論依據(jù)。

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