• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      離子交換色譜-積分脈沖安培法測定大蒜中的蒜氨酸*

      2010-11-02 06:26:19李存芝黃雪松
      食品與發(fā)酵工業(yè) 2010年12期
      關(guān)鍵詞:安培氨酸法測定

      李存芝,黃雪松

      (暨南大學(xué)食品科學(xué)與工程系,廣東廣州,510632)

      離子交換色譜-積分脈沖安培法測定大蒜中的蒜氨酸*

      李存芝,黃雪松

      (暨南大學(xué)食品科學(xué)與工程系,廣東廣州,510632)

      為測定新鮮大蒜中蒜氨酸,采用離子交換色譜-積分脈沖安培(IEC-IPA)分析法,以離子交換分離柱分離,積分脈沖安培電化學(xué)檢測,柱溫:30℃;流動(dòng)相:離子水、250 mmol/L NaOH及1mol/L醋酸鈉進(jìn)行梯度洗脫;流速:0.25mL/min。測得結(jié)果:蒜氨酸保留時(shí)間為5.100~5.200 min,濃度在0.45~3.0μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)0.997 9,檢測限0.05μg/mL,加樣回收率為96.7%,標(biāo)準(zhǔn)差1.7%;測得的廣東蒜及山東蒜的蒜氨酸含量分別是1.262 9%、1.511 4%。

      大蒜(Allium sativum L.),蒜氨酸,離子色譜法,積分脈沖安培檢測

      大蒜(Allium sativum L.)是百合科蔥屬植物蒜的鱗莖,含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)[1]。據(jù)報(bào)道新鮮大蒜中含有大量大蒜素的前體物質(zhì)——蒜氨酸(S-烯丙基-L-半胱氨酸亞砜)[2]。研究亦表明,蒜氨酸是大蒜中的主要活性成分,具有抗氧化、清除自由基、降脂、抗腫瘤、抗血栓等多項(xiàng)功能[3]。所以測定蒜氨酸的含量已成為評(píng)定大蒜及其制品品質(zhì)的重要指標(biāo)。

      由于大蒜成分的多樣性和不穩(wěn)定性,直接測定蒜氨酸含量存在一定困難,且各種分析結(jié)果有很大差異,至今尚未有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)方法測定大蒜中蒜氨酸含量。傳統(tǒng)的定硫法精確度極低;薄層掃描法[4]、高效液相色譜法[5~8]、液質(zhì)聯(lián)用法[9]、高效毛細(xì)管電泳法[10]、4-MP[11]測定法、高效離子對(duì)色譜法[12]、柱前或柱后衍生化后測定[13]等方法前處理復(fù)雜,檢測周期長,或需特殊的儀器,在應(yīng)用中受到限制。

      離子交換色譜(IEC)法對(duì)于分離氨基酸類物質(zhì)具有柱效高、分離效果好的特點(diǎn),積分脈沖安培檢測器(IPA)是一種氧化還原檢測器,對(duì)于含有硫原子的蒜氨酸應(yīng)當(dāng)具有較好的響應(yīng)。因此,本文探討離子交換色譜-積分脈沖安培(IEC-IPA)法用于測定蒜氨酸的可行性。

      1 材料與方法

      1.1 原料和試劑

      新鮮廣東大蒜和山東大蒜,購于廣東石牌蔬菜市場。

      250 mmol/L NaOH 溶液(Fisher公司,美國),1mol/L醋酸鈉(戴安公司,批號(hào)050205),超純水(蒸餾水再經(jīng)過Millipore超純水系統(tǒng)制備),合成蒜氨酸[13](自制),無水乙醇,雙蒸水。

      1.2 樣品配制

      1.2.1 合成蒜氨酸溶液的配制

      精密稱取22.5 mg蒜氨酸,用體積分?jǐn)?shù)20%乙醇定容至25mL,使之成為900μg/mL的蒜氨酸母液,以此溶液作倍比稀釋及3∶2倍稀釋,配制成600、450、300、225、112.5μg/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后,再用超純水將上述濃度的標(biāo)準(zhǔn)液分別稀釋到3、2.25、1.125、0.9、0.6、0.45μg/mL,用 0.2 μm 濾膜過濾進(jìn)樣。在離子交換色譜條件下分析蒜氨酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液,并繪制溶液的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

      1.2.2 不同大蒜樣品液的制備

      稱取購自農(nóng)貿(mào)市場的新鮮、去皮的廣東金山火蒜或山東金鄉(xiāng)大蒜各30.00 g,加入50mL的水,微波煮沸5 min,研缽研碎,無損失地轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中定容,搖勻后離心過濾(4 000 r/min,20 min),取上清液用超純水稀釋至100倍,用0.2 μm一次性濾頭過濾后,吸取0.25μL進(jìn)樣,測定樣品中的蒜氨酸。

      1.3 IEC-IPA測定條件

      ICS-2500型離子色譜儀(戴安公司,美國),主要配置:含在線脫氣裝置的四元梯度泵GP50、柱溫箱LC30、淋洗液自動(dòng)發(fā)生器EG50、脈沖安培電化學(xué)檢測器ED50(Au為工作電極,Ag/AgCl為參比電極)、離子交換色譜柱(即氨基酸分離柱,Amino PACPA10,2 mm ×250 mm),氨基酸保護(hù)柱(Amino PAC PA10,2 mm ×50 mm),柱溫:30℃,流速:0.25mL/min,進(jìn)樣量:0.25μL,流動(dòng)相 A:去離子水,流動(dòng)相B:250 mmol/L氫氧化鈉溶液,流動(dòng)相C:1mol/L醋酸鈉,用上述3種流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,詳細(xì)梯度淋洗程序見下表1,結(jié)果分析采用Chromeleon 6.0工作站。

      表1 離子色譜梯度淋洗程序(體積分?jǐn)?shù))

      2 結(jié)果與分析

      2.1 17種常見標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的離子色譜圖

      圖1是利用IEC-IPA法分析的17種常見標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的離子色譜圖,由圖1可見IEC-IPA法對(duì)17種常見氨基酸的分離效果較好。

      圖1 17種常見標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的離子色譜圖

      2.2 合成蒜氨酸的離子色譜圖

      圖2是合成蒜氨酸的離子色譜圖,其保留時(shí)間為5.200 min,其含有少量的精氨酸(1.175 min)雜質(zhì)。比較圖1與圖2的色譜峰可以看出,在本實(shí)驗(yàn)條件下,蒜氨酸(5.200 min)不會(huì)與相鄰的賴氨酸(3.517 min)、丙氨酸(6.15 min)色譜峰重合,即蒜氨酸與其他氨基酸混在一起時(shí),仍可以取得較好的分離效果。

      圖2 合成蒜氨酸的離子色譜圖

      2.3 線性關(guān)系的考察

      測定上述1.2.1項(xiàng)配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣量均為5μL。以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度(X,μg/mL)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。得出合成蒜氨酸的工作曲線為Y=36.397 X+1.903 7,相關(guān)系數(shù)r=0.997 9,表明蒜氨酸在質(zhì)量濃度在0.45~3.0μg/mL時(shí),峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

      2.4 檢測限和精密度

      分別精確量取上述1.2.1項(xiàng)中配制的蒜氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.45μg/mL)1mL,置于5mL容量瓶中,加超純水稀釋至刻度,搖勻,進(jìn)樣量5μL。以信噪比S/N=5計(jì),蒜氨酸的檢測限為0.05μg/mL。將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣5次,測得峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.7%。該檢測限較用紫外檢測等方法要低得多[14],這是因?yàn)榉e分脈沖安培檢測器是一種氧化還原型檢測器,蒜氨酸具有較好的氧化還原性,因而對(duì)該類檢測器具有較好的響應(yīng),所以,檢測限較低。

      2.5 蒜氨酸回收率的測定

      在供試品溶液中加入已知量的合成蒜氨酸,進(jìn)行回收率測定,測定結(jié)果(表2)表明其回收率一般為95.5%~98.8%,可見,其回收率較高。

      2.6 廣東蒜及山東蒜中蒜氨酸含量測定

      圖3和圖4分別是廣東蒜及山東蒜的蒜氨酸色譜圖,其酸氨酸的保留時(shí)間分別是5.200和5.185 min,與圖2中合成標(biāo)準(zhǔn)蒜氨酸的保留時(shí)間(5.200 min)基本一致,其微小差異應(yīng)為進(jìn)樣誤差所致。

      所測廣東蒜及山東蒜樣品的蒜氨酸含量見表3。

      表3表明,不同產(chǎn)地的大蒜中蒜氨酸含量差異較大;山東大蒜的酸氨酸含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于廣東蒜,這可能與廣東蒜生長季節(jié)短、含水量相對(duì)較高有關(guān)。

      表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

      表3 廣東蒜及山東蒜樣品的蒜氨酸含量

      圖3 廣東蒜的蒜氨酸色譜圖

      圖4 山東蒜的蒜氨酸色譜圖

      3 結(jié)論

      利用IEC-IPA法測定大蒜樣品中的酸氨酸,線性范圍為0.45~3.0μg/mL,檢測限低至 0.05μg/mL,可以同時(shí)測定其他氨基酸。該法簡便、快速、準(zhǔn)確、分離效果好。

      [1]陶華君.大蒜在我國的開發(fā)利用現(xiàn)狀、存在問題及對(duì)策[J].糧食與食品工業(yè),2004,11(4):6-10.

      [2]于文濤,盧定強(qiáng),李暉.GC/MS法分析影響大蒜油活性成分的幾個(gè)因素[J].精細(xì)化工,2004,21(9):696-697,713.

      [3]賈江濱,許重遠(yuǎn),羅景慧,等.大蒜中含硫氨基酸的研究進(jìn)展[J].中草藥,2000,31(6):468-470.

      [4]王巖,李新霞,陳堅(jiān).薄層掃描法測定大蒜中蒜氨酸的含量[J].中國藥學(xué)雜志,2003,38(3):217-218.

      [5]黃雪松,溫麗兒,晏日安.反相高壓液相色譜法測定鮮蒜中的蒜氨酸[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2005,31(5):106-109.

      [6]王曉明,陳堅(jiān).HPLC法測定蒜氨酸含量[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,26(6):602.

      [7]王偉,喬旭光,李福偉.高效液相色譜法測定大蒜中蒜氨酸含量[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2006,32(4):115-117,121.

      [8]王偉萍,常軍民,陳堅(jiān).HPLC法測定蒜酶催化蒜氨酸生成大蒜辣素的配比及穩(wěn)定性研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,26(6):534-536.

      [9]常軍民,向陽,張麗靜,等.HPLC-MS法測定小鼠血漿中蒜氨酸的濃度[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,26(6):532-533,536.

      [10]馬海樂,楊恒星,代春華,等.高效毛細(xì)管電泳法測定大蒜中蒜氨酸含量[J].食品科學(xué),2005,26(2):189-192.

      [11]黃雪松,溫麗兒,晏日安.利用4-MP測定大蒜中的蒜氨酸[J].食品科學(xué),2006,27(1):171-174.

      [12]Arnault I,Christides J P,Mandon N,et al.High-performance ion-pair chromatography method for simultaneous analysis of alliin,deoxyalliin,allicin and dipeptide precursors in garlic products using multiple mass spectrometry and UV detection[J].Journal of Chromatography A,2003,991:69-75.

      [13]楊毅,謝慧明,吳澤宇,等.AQC柱前衍生化 RPHPLC法測定大蒜中蒜氨酸含量[J].食品科學(xué),2009,30(4):214-214..

      [14]黃雪松,晏日安.利用新鮮大蒜生產(chǎn)結(jié)晶蒜氨酸[J].食品科學(xué),2004,25(11):200-203.

      Ion-exchange Chromatography-integrated Pulsed Amperometric for Determination of Alliin

      Li Cun-zhi,Huang Xue-song
      (Department of Food Science and Engineering,Jinan University,Guangzhou 510632,China)

      To develop ion-exchange chromatography-integrated pulsed amperometric(IEC-IPA)method for the determination of alliin in fresh garlic.The IEC-IPA conditions were:ion-exchange separation column,an integrated electrochemical pulsed amperometric detector,column temperature:30℃,mobile phase:deionized water、250 mmol/L NaOH and 1mol/L NaAC,flow rate was at:0.25mL/min.The result showed that good relationship was linear in the range of 0.45~3.0μg/mL(r=0.997 9)alliin concentration.The limits of detection were 0.05μg/mL.The recovery was 96.7%and relative standard deviations was less than 1.7%.The retention time of alliin is 5.100~5.200 min.And the alliin content of Guangdong and Shandong Garlic are 1.262 9%、1.511 4%respectively.We concluded that IEC-IPA method has good separation efficiency for detection of alliin.This method is sensitive,simple,rapid and the results are good,accurate and reliable.IEC-IPA is suitable for determining the alliin in garlic and its products.

      garlic(Allium sativum L.),alliin,ion chromatography,integrated pulsed amperometric detector

      博士,講師。

      *國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(2007AA10Z300)和國家自然科學(xué)基金(30671472)資助

      2010-02-15,改回日期:2010-10-11

      猜你喜歡
      安培氨酸法測定
      蒜氨酸抗菌機(jī)制研究
      南京市學(xué)黨史辦實(shí)事線上“安培超市”一網(wǎng)通辦
      ICP-OES法測定鋼和鐵中微量元素
      昆鋼科技(2020年6期)2020-03-29 06:39:40
      電學(xué)巨人—安培
      HPLC法測定桂皮中的cinnamtannin D-1和cinnamtannin B-1
      中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:56
      UPLC法測定萹蓄中3種成分
      中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
      高羊毛氨酸硒提高豬肌肉中硒沉積
      廣東飼料(2016年7期)2016-12-01 03:43:36
      HPLC法測定炎熱清片中4種成分
      中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:41
      健忘的安培
      蒜氨酸的分離純化研究進(jìn)展
      城市| 山西省| 南京市| 德格县| 中宁县| 玉溪市| 乌兰浩特市| 斗六市| 大宁县| 伊春市| 安图县| 宜兴市| 宁德市| 新余市| 罗山县| 扬中市| 淅川县| 池州市| 乌拉特后旗| 上杭县| 隆林| 楚雄市| 商南县| 庄浪县| 萨迦县| 怀柔区| 广南县| 田东县| 崇义县| 太仆寺旗| 千阳县| 仁寿县| 凤台县| 中卫市| 宁海县| 巍山| 麟游县| 孟村| 永春县| 子洲县| 广州市|