程細(xì)祥

(上海仁愛醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200235)

解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum，Uu)和沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，Ct)是泌尿生殖道感染的重要致病因子，是婦科不孕癥的常見病因，而其感染率有逐年上升的趨勢(shì)[1]。生育期婦女通過性接觸感染Ct和Uu，可引起陰道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、急慢性輸卵管炎和盆腔炎等生殖道感染，常以無明顯癥狀為特征，但最終可導(dǎo)致不孕癥及異位妊娠[2]。由于無癥狀患者觀察的困難性，以及檢測(cè)方法的局限性，目前Uu、Ct對(duì)于女性不孕的致病性和致病機(jī)理仍有待深入研究。為了深入探討Uu和Ct感染與女性不孕癥的關(guān)系，本研究通過熒光定量PCR方法，檢測(cè)女性不孕癥患者宮頸分泌物中Uu-DNA與Ct-DNA的表達(dá)情況，以探討Uu與Ct在女性不孕患者中的感染情況和致病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 觀察組選自2008年5月至2009年7月在我院婦科門診就診的121例女性不孕患者，年齡22～41歲,平均31.7歲。選擇102例正常生育婦女作為對(duì)照組，均來自本院正常體檢人群，年齡21～38歲平均29.6歲。兩組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 標(biāo)本采集方法 所有分泌物標(biāo)本采樣應(yīng)在非月經(jīng)期進(jìn)行；采樣前3d內(nèi)不使用陰道內(nèi)藥物，不沖洗陰道；24h內(nèi)不應(yīng)有性行為。用棉球沾無菌生理鹽水洗去宮頸外分泌物(去除白帶)，再用無菌棉拭子插入宮頸內(nèi)，停5s后旋動(dòng)棉拭子采取宮頸分泌物，將帶有標(biāo)本的棉拭子置1.5ml無菌離心管 (加1ml無菌生理鹽水)中漂洗，將蓋子壓緊用膠布密封管口以防標(biāo)本外泄。處理標(biāo)本時(shí)要做到無菌操作，立即送檢。

1.3 檢測(cè)方法 采用熒光定量PCR方法，每份標(biāo)本均進(jìn)行Uu-DNA和Ct-DNA核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)。Ct和Uu PCR引物及Ct和Uu核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒，以及DNA純化試劑盒，均由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司合成和生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照廠家實(shí)際說明書執(zhí)行，實(shí)驗(yàn)儀器為羅氏的licycle 480全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

1.4 檢測(cè)結(jié)果的處理分析 全部數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，率的檢驗(yàn)使用卡方分析，P＜0.05提示差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 解脲脲原體DNA檢測(cè)結(jié)果：觀察組宮頸分泌物中檢測(cè)出解脲脲原體DNA陽性率為44.6%(54/121)，定量值 1.9×103～2.7×106copies；對(duì)照組陽性率17.6%(18/102)，定量值 7.3×103～4.3×106copies，兩組比較差異有非常顯著性(P＜0.01，見表1)。

2.2 沙眼衣原體DNA檢測(cè)結(jié)果 觀察組宮頸分泌物中檢測(cè)出沙眼衣原體DNA陽性率為27.3%(33/121)，定量值 3.9×103～1.7×107copies；對(duì)照組陽性率6.9%(7/102)，定量值 1.5×104～6.1×106copies，兩組比較差異有非常顯著性(P＜0.01，見表1)。

2.3 觀察組宮頸分泌物中，解脲脲原體DNA和沙眼衣原體DNA均陽性者19例，對(duì)照組宮頸分泌物中，解脲脲原體DNA和沙眼衣原體DNA均陽性者1例，兩組比較差異有非常顯著性(P＜0.01，見表1)。

表1 女性不孕患者宮頸分泌物中Uu-DNA和Ct-DNA的表達(dá)情況例數(shù)(%)

3 討論

支原體是能在細(xì)胞外獨(dú)立生存的最小微生物，種類繁多，其中Uu是引起人類泌尿生殖系統(tǒng)感染的病原體之一，與性傳播有關(guān)；Ct為專性上皮細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞型微生物，易侵犯泌尿及生殖道上皮，可引起女性尿道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎，并最終導(dǎo)致不孕癥及異位妊娠。

國內(nèi)外研究表明，Ct導(dǎo)致女性不孕的致病機(jī)制比較明確，一方面，Ct能產(chǎn)生內(nèi)毒素，導(dǎo)致生殖腔道的炎癥、黏連和阻塞，使黏膜細(xì)胞壞死，輸卵管纖毛運(yùn)動(dòng)停滯，引起不孕[3]。另外，Ct感染可使宮頸黏液的葡萄糖含量降低，影響進(jìn)入宮頸管中的精子的活力而致不孕[4]。

Uu導(dǎo)致女性不孕的致病機(jī)理目前仍不清楚，有研究認(rèn)為，炎癥所致的輸卵管性不孕與生殖道(通常指宮頸)Uu感染有關(guān)[5]。然而也有人認(rèn)為，不孕癥患者宮頸、陰道Uu陽性率與輸卵管損傷不相關(guān)[6]。因此，Uu的致病性及其致病機(jī)制有待深入研究。本研究通過熒光定量PCR方法，觀察女性不孕癥患者宮頸黏液Uu-DNA和Ct-DNA的表達(dá)情況。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在我院就診的女性不孕患者中，Uu-DNA和Ct-DNA的表達(dá)與對(duì)照組相比均有顯著增加，提示Uu與Ct的感染與女性不孕密切相關(guān)，研究也發(fā)現(xiàn)，在正常對(duì)照組中，Uu也有相當(dāng)高的感染率 (17.6%)，提示Uu可能是一種條件致病菌，與Uu相比，Ct在觀察組和對(duì)照組中的感染率都較低，提示Ct與女性不孕癥的相關(guān)性更高，應(yīng)該是女性不孕癥的重要致病因素，Uu與Ct的混合感染率也提示這兩種介于細(xì)菌和病毒之間的微生物可能在致病方面有一定的協(xié)同作用。

在臨床實(shí)踐中，使用Uu-DNA檢測(cè)陽性和Uu培養(yǎng)陽性作為抗生素用藥指標(biāo)的做法非常普遍，在Uu檢測(cè)出現(xiàn)反復(fù)陽性時(shí)又往往誤判為耐藥，從而更換或聯(lián)合使用另外的抗生素，最終導(dǎo)致抗生素的濫用，而抗生素大量使用造成的菌群失調(diào)會(huì)進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，造成惡性循環(huán)，給病人帶來更多的痛苦和負(fù)擔(dān)。本研究結(jié)果提示，在女性不孕的致病機(jī)理中，Ct-DNA檢測(cè)可能更適合作為造成女性不孕癥的病因診斷，而Uu-DNA檢測(cè)則更適合作為炎癥病因判斷和混合感染導(dǎo)致女性不孕的輔助性病因診斷指標(biāo)。

[1]黃美瓊,李北坤,陸翠群.女性不孕患者解脲支原體感染檢測(cè)及耐藥性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(10):773-774.

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[6]彭慧蘭,曹來英,魏敏.孕婦與不孕癥婦女解脲支原體、沙眼衣原體感染的研究[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,26(1):64-66.