張海容

(1.德州學(xué)院農(nóng)學(xué)系,山東 德州 253023;2.德州兔業(yè)工程中心,山東德州253023)

豬鏈球菌病在我國(guó)已流行多年,2008年下半年,蘭州市許多養(yǎng)豬場(chǎng)暴發(fā)了以發(fā)熱、關(guān)節(jié)腫脹、敗血癥和神經(jīng)癥狀為特征的急性傳染病,通過(guò)對(duì)疑似鏈球菌病料進(jìn)行病原分離鑒定及藥敏試驗(yàn)等,現(xiàn)已確診為豬鏈球菌病,經(jīng)采取綜合防治,病情已得到控制。報(bào)告如下。

1 臨床診斷

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀和病理變化做出初步診斷。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

來(lái)自蘭州市4個(gè)豬場(chǎng)的疑似鏈球菌病料1#、2#、3#、4#。病豬的肝、肺 、脾、腎 、腦和關(guān)節(jié)液 ,進(jìn)行革蘭染色鏡檢,然后分別接種鮮血瓊脂平板37℃需氧培養(yǎng)24h,挑取可疑菌落革蘭染色鏡檢,然后挑取單個(gè)菌落再接種鮮血瓊脂平板,純化后放置4℃,冷藏備用。

取單個(gè)保存好菌落分別在普通瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、麥康凱瓊酯平板,37℃培養(yǎng)24h后觀察。同時(shí)取分離菌株接種10%雞血清的肉湯,37℃培養(yǎng)48h。取血清肉湯中的絮狀沉淀物抹片,分別革蘭染色,并鏡檢。將分離的菌株接種到pH9.6肉湯中,經(jīng) 60℃、30min后移植到鮮血瓊脂平板,接種pH9.6的葡萄糖肉湯、6.5%的NaCl肉湯中。

生化試驗(yàn)：取上述分離菌血清肉湯培養(yǎng)物1#、2#、3#、4#,分別接種蔗糖、山梨醇、葡萄糖、甘露糖、乳糖、馬尿酸鈉及淀粉培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)24h,觀察對(duì)糖的利用情況,全部重復(fù)3次。

動(dòng)物感染試驗(yàn)：將分離菌株24h血斜面用滅菌的生理鹽水適當(dāng)稀釋,配成懸濁液,腹腔注射4只健康小鼠,接種量0.3mL/只,另外 4只作對(duì)照,注射同劑量的生理鹽水,觀察結(jié)果。

藥物試驗(yàn)：采用紙片擴(kuò)散法,取分離菌的血清肉湯培養(yǎng)物,涂布于鮮血瓊脂平板,37℃培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果。結(jié)果按抑菌圈直徑大小和各抗菌藥具體標(biāo)準(zhǔn),評(píng)定為高度敏感、中度敏感或耐藥。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 病料及分離物涂片革蘭染色后鏡檢,4個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)的疑似病料中含有大量的革蘭陽(yáng)性單在、呈雙或鏈狀排列的球菌。

3.2 培養(yǎng)特性和生理特性 37℃培養(yǎng)24h后,在鮮血瓊脂平板肉湯中形成大量圓形不透明、表面光滑隆起的灰白色直徑為1～2μm小菌落,菌落β-溶血。在普通平板和麥康凱培養(yǎng)基上,單個(gè)菌落生長(zhǎng)貧瘠。10%雞血清肉湯中培養(yǎng)48h,可見(jiàn)管底形成絮狀沉淀,上液清亮,無(wú)菌膜和菌環(huán)。染色鏡檢見(jiàn)大量革蘭陽(yáng)性單在、呈雙或鏈狀排列的球菌。在pH9.6肉湯經(jīng)30min、60℃后移到鮮血瓊脂平板仍能生長(zhǎng),在pH9.6葡萄糖肉湯中生長(zhǎng)表現(xiàn)上液清亮,而管底有絮狀沉淀,6.5%NaCl肉湯中生長(zhǎng)狀況為均勻混濁。

3.3 生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果 見(jiàn)表1。

表1 分離鏈球菌的生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表1表明分離的1#、2#、3#、4#菌生化反應(yīng)結(jié)果均符合豬鏈球菌生化特性,說(shuō)明分離菌均為豬鏈球菌。

3.4 動(dòng)物感染試驗(yàn)結(jié)果 小鼠注射病原菌第4天開(kāi)始死亡,死亡小鼠皮膚發(fā)紺,剖檢肝、脾、肺、心出血,注射部位有直徑0.9～1.1cm膿腫,膿汁呈黃綠色。對(duì)照均未見(jiàn)死亡,從死亡小鼠肝臟重新分離到革蘭陽(yáng)性單在、呈雙或鏈狀排列球菌。表明分離的菌株對(duì)小鼠有致病性。

3.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表2。

表2表明,敏感的藥物依次是：頭孢菌素、環(huán)丙沙星;中度敏感的是：青霉素和卡那霉素;而對(duì)土霉素、鏈霉素、慶大霉素具有抗藥性。此為臨床用藥提供了科學(xué)依據(jù)。

4 綜合防治

4.1 預(yù)防 病豬隔離治療,帶菌母豬盡可能淘汰。污染的用具和環(huán)境用3%來(lái)蘇兒液或1/300的菌毒敵徹底消毒。急宰豬或宰后發(fā)現(xiàn)可疑病變的豬胴體,經(jīng)高溫處理后方可食用。

清除豬圈和飼槽等處的尖銳物體及可能引起外傷的物體。新生的仔豬無(wú)菌結(jié)扎臍帶,并用碘酊消毒。

免疫接種疫苗：每頭肌肉注射2～3頭份,4周后加強(qiáng)1次。

4.2 治療 根據(jù)藥敏結(jié)果選擇高敏藥物治療。對(duì)淋巴結(jié)膿腫,待膿腫成熟及時(shí)切開(kāi),排除膿汁,用3%雙氧水或0.1%高錳酸鉀液沖洗涂以碘酊。環(huán)丙沙星治療,每千克體重用 2.5～10.0 mg,每12h注射1次,連用3d。對(duì)敗血癥型及腦膜腦炎型應(yīng)早期大劑量使用抗生素。青霉素每頭每次40萬(wàn)～100萬(wàn)IU,每天肌肉注射2～4次;革慶增安注射液,每千克體重0.1mL,肌肉注射,每日2次,也有好的療效。為鞏固療效,可連續(xù)用藥5d以上。有明顯發(fā)熱癥狀,用退熱劑退熱,體質(zhì)虛弱的,注射維生素C,全群口服抗生素;每噸飼料加入200g阿莫西林或500g土霉素,連用7d以防繼發(fā)感染。