抗HCV靶向藥物篩選及相關(guān)中藥研究進(jìn)展

李杏花，吳修紅，王喜軍

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)是已知唯一能造成慢性感染的RNA病毒(除逆轉(zhuǎn)錄病毒外)［1］。HCV感染者中，55% ～85%會發(fā)展為慢性感染，發(fā)展為肝硬化、肝癌的比例也較高［2］。目前，標(biāo)準(zhǔn)的HCV治療方案是α－干擾素(interferon alfa，IFN－α)或聚乙二醇化α－干擾素(pegylated interferon alpha，peg－IFNα)和利巴韋林(ribavirin，RBV)聯(lián)合使用，對丙型肝炎能起到一定的治療作用，但對I型HCV病毒感染者的療效僅為40% ～50%，且治療周期長，費(fèi)用高，副作用也較高［3］。臨床上迫切需要更為有效的抗HCV藥物。目前，抑制HCV的感染和復(fù)制的靶向治療藥物的研究成為主要趨勢，并獲得了重大進(jìn)展。本文就目前HCV的靶向藥物篩選及相關(guān)中藥研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

1 HCV靶向治療藥物的研究方向

一般情況下，只要抑制HCV感染和復(fù)制的任何一個環(huán)節(jié)就能對丙型肝炎起到治療作用。

1.1 阻斷病毒進(jìn)入細(xì)胞的過程

Tao W［4］研究發(fā)現(xiàn)，HCV感染過程中 E2中的I414T的突變是HCV獲得較高感染力和高突變性的重要因素;Keck ZY［5］研究發(fā)現(xiàn)，CD81分子是HCV病毒對中和抗體的免疫逃逸的重要影響因素。

1.2 阻斷病毒大分子的生物合成

1.2.1 抑制病毒RNA的翻譯

梁雪松等［6］研究發(fā)現(xiàn)，酵母細(xì)胞的一段60nt核酸片段IRNA及其互補(bǔ)體RNA(cIRNA)對HCV IRES介導(dǎo)的蛋白翻譯體有體外抑制作用，而對帽狀結(jié)構(gòu)RNA形成的依賴性蛋白翻譯僅有輕微的抑制作用，以此可以考慮作為HCV感染的基因治療。Kapadia SB［7］研究發(fā)現(xiàn)，siRNA可抑制HCV復(fù)制子的復(fù)制。

1.2.2 阻斷病毒的復(fù)制

病毒復(fù)制所需的酶有NS2－3蛋白酶、NS3－4A絲氨酸蛋白酶、NS3解旋酶和NS5B RNA依賴性RNA多聚酶。對HCV復(fù)制酶的抑制劑的研究已是目前HCV靶向藥物研究的主要方向。

1.2.2.1 NS2 －3 蛋白酶

NS4A衍生的肽，在體外對NS2－3蛋白酶有抑制作用［8］。Ciesek S［9］研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)孢素 A 是通過抑制NS2來抑制HCV復(fù)制的。

1.2.2.2 NS3 －4A 絲氨酸蛋白酶

目前NS3－4A絲氨酸蛋白酶抑制劑藥物主要有:Te1aprevir(VX95O)、Boceprevir(SCH50303)、BILN －2061、ITMN －191(R7227)、Vaniprevir(MK －7009)等。

1.2.2.3 NS3 解旋酶

現(xiàn)有的NS3解旋酶抑制劑抑制劑主要是硫代疊氮化合物和取代嘧啶核苷［10］。

1.2.2.4 NS5B RNA 依賴性 RNA 多聚酶

NS5B RNA依賴性RNA多聚酶的抑制劑主要有核苷類抑制劑和非核苷類抑制劑;核苷類抑制劑多數(shù)為底物類似物，通過與正常底物競爭插入到RNA鏈中導(dǎo)致HCV病毒復(fù)制終止。非核苷類抑制劑主要有苯并噻二嗪、苯并咪唑及其衍生物、雙取代的苯丙氨酸/噻吩羥胺化合物、吡喃類化合物等。

2 抗HCV藥物篩選的模型

2.1 動物模型

2.1.1 黑猩猩

迄今為止，黑猩猩是唯一適合HCV感染并支持復(fù)制的動物模型，其感染HCV后的免疫反應(yīng)、致病過程與人類相似［11］，可用于研究病毒在體內(nèi)的復(fù)制過程、發(fā)病機(jī)制及篩選HCV疫苗。

2.1.2 樹鼩

Zhao X［12］發(fā)現(xiàn)，HCV患者血清可感染原代分離培養(yǎng)的樹鼩肝細(xì)胞，并可在其中傳代，提示樹鼩可能對HCV易感。由于樹鼩體積小，來源容易，可以進(jìn)行人工繁殖，將有可能替代黑猩猩用于HCV研究。

2.1.3 小絹猴，絨猴

GB病毒B型(GBV－B)與HCV病毒有高度核酸同源性。研究發(fā)現(xiàn)，GBV－B可以感染小絹猴，絨猴，因此這兩種動物可能替代黑猩猩用于HCV篩選［13－14］。

2.1.4 小鼠

2.1.4.1 轉(zhuǎn)基因小鼠

Mofiya等［15］用 HBV X基因啟動子來控制 HCV核心蛋白的表達(dá)獲得的核心基因轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)肝脂肪變性、膽管損害和淋巴細(xì)胞浸潤，有1/3進(jìn)一步發(fā)展為肝腫瘤。Masciopinto等［16］通過CAG開關(guān)有效地控制CD81的表達(dá)，獲得了CD81轉(zhuǎn)基因小鼠。

2.1.4.2 嵌合小鼠

Labonte等［17］通過異種移植將未感染HCV的人肝癌細(xì)胞移植到無胸腺的裸鼠體內(nèi)，并用HCV陽性血清進(jìn)行感染，證實(shí)HCV可以感染移植人肝細(xì)胞的小鼠;Mercer等［18］將嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠(SCID)與尿激酶型纖溶酶原激活物轉(zhuǎn)基因小鼠(uPA)的屬性聯(lián)合起來，產(chǎn)生了一種新的模型系統(tǒng)。Kamiya N［19］利用telaprevir對上述模型進(jìn)行了實(shí)際評估，結(jié)果表明，給予與臨床等量的藥量后，血清中HCV快速轉(zhuǎn)陰，在治療10天后肝臟中HCV轉(zhuǎn)陰率與血清HCV轉(zhuǎn)陰率具有相關(guān)性。

2.1.4.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染鼠模型

詹林盛等［20］將pHCV－neo4表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到小鼠體內(nèi)，在小鼠肝臟檢測到熒光素酶的高水平表達(dá)，同時HCV IRES介導(dǎo)的熒光素酶在小鼠心、脾、腎臟組織中也得到表達(dá)，可以作為體內(nèi)瞬時評價以HCV IRES為靶位的抗HCV藥物活性的小鼠模型。

2.2 細(xì)胞模型

2.2.1 HCV全長基因感染細(xì)胞模型

Yoo等［21］應(yīng)用體外轉(zhuǎn)錄的全長HCV RNA經(jīng)脂質(zhì)體法傳染Huh7細(xì)胞建立了HCV連續(xù)復(fù)制模型。Wakita等［22］以HCV全基因組復(fù)制子細(xì)胞(JFH1)轉(zhuǎn)錄本RNA體外轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞從而建立了細(xì)胞模型，該細(xì)胞模型能穩(wěn)定地支持HCV RNA復(fù)制。

2.2.2 HCV基因片段轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型

Dubuisson等［23］應(yīng)用重組的痘病毒和辛德比斯病毒暫時表達(dá)載體，傳染人HEPG2、PK－15和BHK－21細(xì)胞系，分別研究了HCV－1株和BK株包膜蛋白的表達(dá)。Matsuura等［24］應(yīng)用重組的桿狀病毒表達(dá)載體(AC316)和表達(dá)質(zhì)粒(PSR316)轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞和猴腎COS細(xì)胞，研究了HCV包膜蛋白的真核表達(dá)。

3 中藥HCV靶向治療藥物的研究

由于干擾素治療的副作用大，治療費(fèi)用高，且療效不理想。近年來，篩選有效的抗HCV中藥成為了研究熱點(diǎn)。中藥在保護(hù)肝細(xì)胞、退黃降酶、抗肝纖維化方面有著獨(dú)到的優(yōu)勢，且中藥治療HCV是多靶點(diǎn)，多角度的，盡管中藥與干擾素治療丙型肝炎的近期療效相似，但從遠(yuǎn)期療效上看，中藥抗病毒效果更為持久、穩(wěn)定，中藥治療無不良反應(yīng)或較少，對比干擾素治療具有明顯的優(yōu)勢。

3.1 專方專病

中醫(yī)藥治療HCV大多采用固定方治療，且對癥下藥。目前，治療HCV的復(fù)方主要有丙肝靈、丙肝湯、丙肝寧、小柴胡湯、甘露消毒丹、健脾補(bǔ)腎方、肝舒膠囊、苦參素制劑、蟻珠湯、益爾肝湯、加味三參湯、清補(bǔ)飲、益肝飲等。洪寧［25］觀察丙肝I號與α－干擾素對照治療HCV6個月后表明，兩者臨床療效相似，有顯著降低患者ALT和AST作用，并可抑制病毒的復(fù)制，具有較好的遠(yuǎn)期病毒學(xué)應(yīng)答。楊沈秋［26］應(yīng)用肝樂膠囊治療慢性丙肝60例，總有效率為93.3%。殷杰［27］使用丙肝寧沖劑治療慢性丙型肝炎，有明顯抗丙型肝炎病毒療效，且耐受性好，無嚴(yán)重不良反應(yīng)。黃朝陽［28］使用丙肝康治療丙型肝炎32例，總有效率96.8%。劉秀英［29］使用松梔丸治療慢性丙型肝炎，血清學(xué)標(biāo)志物陰轉(zhuǎn)作用明顯;ALT復(fù)常率及臨床有效率高，服用安全，無毒副作用。李曉霞［30］采用健脾補(bǔ)腎方治療慢性丙型肝炎20例，結(jié)果表明，健脾補(bǔ)腎方治療慢性丙型肝炎有恢復(fù)肝功能的作用，而且在抗纖維化方面具有優(yōu)勢。牛桂玲［31］用益肝飲治療慢性丙型肝炎，結(jié)果表明，益肝飲對慢性丙型肝炎的保肝，降酶，抗纖維化作用較好。

3.2 中西藥聯(lián)合治療

采用中藥對干擾素治療進(jìn)行干預(yù)，可減少副作用，提高療效。王曉忠［32］利用復(fù)方小柴胡湯對長效干擾素α－2a不良反應(yīng)進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果表明，小柴胡湯能顯著減輕長效干擾素不良反應(yīng)。王麗［33］用苦參素和干擾素聯(lián)合治療丙型肝炎，結(jié)果表明，苦參素能明顯提高干擾素抗病毒療效，且苦參素能減少干擾素致粒細(xì)胞下降的不良反應(yīng)。杜偉［34］采用加味甘露消毒丹聯(lián)合干擾素α－2b治療慢性丙型病毒性肝炎，結(jié)果表明，加味甘露消毒丹聯(lián)合干擾素可以更好的改善丙肝患者的臨床癥狀體征，加強(qiáng)肝功能的修復(fù)，恢復(fù)肝損害，增強(qiáng)干擾素抑制丙肝病毒的作用。

目前，對于HCV的靶向研究大多為單靶點(diǎn)研究，病毒容易突變發(fā)生耐藥性，從而影響藥物的治療效果，采用聯(lián)合療法可以盡量減少病毒的耐藥性，提高治療效果，使HCV篩選模型取得了較大進(jìn)展。中西藥聯(lián)合治療丙型肝炎，可以進(jìn)一步提高機(jī)體清除病毒能力，促進(jìn)肝功能的改善和修復(fù)，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫能力，抗肝纖維化，降低復(fù)發(fā)率，減少干擾素毒副作用。中西醫(yī)結(jié)合治療丙型肝炎效果肯定，值得臨床推廣應(yīng)用。

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