張銀田 ，何奮義 ，鄂承鈞 ，車小蛟 ，豆思遠病 ，段曉紅

（1.中國動物疫預防控制中心，北京 100125；2.甘肅省動物疫病預防控制中心，甘肅蘭州 730046；3.蘭州正大，甘肅蘭州 730000）

2011年8月8—12日，由農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局舉辦、蘭州獸醫(yī)研究所承辦的中歐口蹄疫防控技術(shù)培訓班在蘭州舉行，培訓班歷經(jīng)5天，培訓班由農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局孫研調(diào)研員主持開班儀式，有來自聯(lián)合國糧農(nóng)組織、中國動物疫病預防控制中心、中國動物衛(wèi)生與流行病學中心、中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、國家口蹄疫參考實驗室的有關(guān)專家以及全國32個省、市、自治區(qū)動物疫病預防控制中心的口蹄疫防控技術(shù)骨干100余名學員參加了本次培訓。

1 情況介紹

這次培訓班是由農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局和歐盟消費者健康總署主辦，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所、迪瑞思咨詢有限公司、家畜疫病病原微生物學國家重點實驗室和OIE/中國國家口蹄疫參考實驗室承辦，中農(nóng)威特生物科技股份有限公司協(xié)辦。有來自澳大利亞動物健康實驗室、哺乳動物病毒實驗室負責人、診斷病毒學家Chris Morrissy博士；澳大利亞西澳洲首席獸醫(yī)官、世界動物衛(wèi)生組織東南亞區(qū)協(xié)調(diào)官、默多克大學動物和生物醫(yī)學院院長、中澳商會教育委員會主席John Edwards教授；中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所、OIE/中國國家口蹄疫參考實驗室的有關(guān)專家進行了口蹄疫防控技術(shù)相關(guān)方面的授課。采用英語授課，同步翻譯；中英文對照，課堂互動等形式授課。同時對OIE/中國國家口蹄疫參考實驗室進行了實地參觀考察學習。

2 學習內(nèi)容

2.1 口蹄疫疫情

2.1.1 世界口蹄疫流行情況

北美、澳洲和大洋洲無口蹄疫，歐洲多數(shù)西歐國家無疫。亞洲、非洲大多數(shù)地區(qū)是口蹄疫的重災區(qū)。O、A、C型流行于全世界，南非1-3型，流行于非洲，亞洲1型流行于亞洲。2010年發(fā)生型別鑒定結(jié)果表明：O型占68%，A型占16%，南非1占10%，南非2占6%，C型、亞洲1、南非3均為0%。2010年中國香港、中國臺灣、越南、韓國、日本、蒙古、阿富汗、伊朗、土耳其、保加利亞等國都有流行發(fā)生，且都以O型為主。非洲南部地區(qū)主要流行南非型毒株，撒哈拉沙漠以南地區(qū)也流行O型和A型。

2.1.2 東南亞流行情況

口蹄疫疫情在東南亞流行比較活躍。亞洲1型近年來少見發(fā)生；A型近年來在越南和韓國暴發(fā)；O型非?；钴S，流行范圍大，危害嚴重，東南亞多個國家地區(qū)暴發(fā)。2010年越南、韓國、蒙古、日本等國和我國的臺灣、香港地區(qū)發(fā)生的都是O型流行。序列分析顯示：新近在東亞流行的O型和A型口蹄疫病毒均源于東南亞地區(qū)。

2.2 中國口蹄疫防控對策

口蹄疫的防控政策取決于政府態(tài)度，而控制口蹄疫屬于政府行為。政府來自于國際和國內(nèi)各方面的壓力比較大。我國政府在防控口蹄疫方面出臺了相關(guān)的法律文件，在防疫經(jīng)費、裝備、人力方面提供強大的支持，而且在有先進的科學防控技術(shù)做保證的同時，建立了一支懂政策、懂技術(shù)能深入實際的防疫隊伍。我國目前實行的防控政策主要為：免疫防控+撲滅根除。具體來說一是對易感動物實行免疫接種；二是限制動物及動物產(chǎn)品的移動；三是嚴格強化動物衛(wèi)生措施等。防控措施的要點：免疫預防是核心，撲殺病畜是關(guān)鍵，嚴格控制疫源移動并且加強監(jiān)測是保證。按照國家動物疫病防治中長期規(guī)劃（2010-2020）制定好重大動物疫病—口蹄疫防治計劃，并組織實施。

2.3 OIE/EU口蹄疫診斷指南

口蹄疫病毒（FMDV）分為 O、A、C、亞洲 1、南非1、南非2和南非3共7個血清型，型與型之間不能交互免疫。FMD與一些水泡性疫病，如豬水泡病、水皰疹、水皰性口炎等在臨床上難以區(qū)別。典型口蹄疫的癥狀是發(fā)熱，在口腔粘膜、乳房以及蹄部皮膚上出現(xiàn)水泡。不同動物臨床癥狀嚴重程度不同，新生幼畜通常以死亡為結(jié)局。

2.3.1 口蹄疫樣品采集 首選的診斷樣品是未破裂的、新鮮的水泡皮或者水泡液。如果采集不到上述材料也可采集血液或用探杯收集反芻動物的OP液，用拭子收集豬的咽喉液。對于死亡病例，可采集心肌組織或血液，但如果有可能還是以水泡皮為好?？梢刹±龢悠繁仨氃诎踩珬l件下按照國際規(guī)范包裝運輸，樣品應送到權(quán)威機構(gòu)檢測。

2.3.2 口蹄疫的確診 只有分離到病毒，或者在組織或者水泡液樣品中檢測到口蹄疫病毒抗原或者核酸才能確診。檢測病毒特異性抗體也可以診斷。檢測病毒非結(jié)構(gòu)蛋白（NSPs）抗體也可以確定動物是否感染FMDV，不需要考慮動物的免疫狀態(tài)。

2.3.3 病原鑒定 檢測到FMDV抗原和核酸就可以作出陽性判斷。由于FMD具有高度的傳染特性以及對經(jīng)濟的重大影響，實驗室診斷和病毒血清型鑒定應當在OIE 4級病原微生物安全實驗室中進行。

2.3.3.1 病原檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）用于FMD病原檢測和血清型鑒定。橫向流系統(tǒng)可用來快速高效地檢測FMD抗原。如果樣品量過少或者診斷結(jié)果仍無法判定，可對樣品進行RT-PCR檢測或進行病毒分離。

2.3.3.2 血清學檢測 口蹄疫血清檢測有兩種：病毒結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測和非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測。結(jié)構(gòu)蛋白檢測具有血清型特異性，疫苗免疫和感染都能檢測出結(jié)構(gòu)蛋白抗體。檢測方法有病毒中和實驗（口蹄疫檢測方法中的金標準方法），固相競爭ELISA（SPCE）和液相阻斷ELISA（LPBE）。這些試驗具有型特異性，如果使用的病毒或抗原與檢測流行的毒株很接近（如A/Malaysia/97，SE Asia），血清學試驗具有高度的敏感性。對結(jié)構(gòu)蛋白檢測是貿(mào)易中指定的檢測方法，也用于對非免疫動物曾經(jīng)或正在感染的確診，還用于免疫后的效果監(jiān)測。非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP）抗體檢測，OIE手冊中介紹了南美廣泛應用的方法：（1）間接酶聯(lián)免疫吸附試驗；（2）酶聯(lián)免疫點轉(zhuǎn)移印跡技術(shù)（EITB），確認試驗。盡管NSP ELISAs沒有被指定為貿(mào)易中的檢測方法，在尚不知病毒血清型或亞型的情況下，非結(jié)構(gòu)蛋白ELISA是一個有價值的輔助檢測方法。其它檢測牛3ABC抗體的間接和競爭性ELISA方法等具有同等性能。

口蹄疫血清學檢測目前有以下四個主要目的：（1）進出口前動物檢疫；（2）確認疑似口蹄疫病例；（3）證實感染的情況；（4）證明疫苗的效力。

2.4 口蹄疫診斷與控制

2.4.1 疫情診斷 暴發(fā)疫情后，田間獸醫(yī)負責臨床診斷，收集信息/病史，免疫與最近動物的移動情況，采集實驗室診斷樣品，采取相應的控制措施，并進行檢疫、移動控制和消毒等處理。實驗室負責臨床診斷的確診，包括血清定型ELISA、PCR與序列測定、病毒分離、分子流行病學與特征分析、疫苗配比、向參考實驗室送樣本，并且將診斷結(jié)果信息共享。

2.4.2 疫情監(jiān)測 田間獸醫(yī)做好疫病發(fā)生狀況的血清學監(jiān)測和免疫后的血清學監(jiān)測，收集信息、病史、免疫與疫苗使用情況，并且調(diào)查疫苗免疫失敗的可能性，將采集樣本用于實驗室診斷。實驗室確認疫病流行狀況，確認免疫后抗體產(chǎn)生情況，進行病毒特征分析（帶毒動物）。

2.4.3 病原檢測方法 參考OIE/EU標準細則，主要有：病毒分離（要求具有專門用于操作病毒與細胞培養(yǎng)的設施）、分子檢測技術(shù)（PCR的應用）、電子顯微鏡和抗原捕獲ELISA（定型ELISA）。

2.4.4 血清學檢測方法 參考OIE/EU標準細則，主要有：測定結(jié)構(gòu)蛋白抗體的競爭ELISA（OIE）（由于血清型特異性至少7種ELISA試劑）、液相阻斷ELISA（是測定疫苗免疫保護水平的標準方法）、非結(jié)構(gòu)蛋白抗檢測方法（檢測感染產(chǎn)生抗體的標準方法）、病毒中和試驗（OIE）。

2.5 口蹄疫診斷方法的新發(fā)展

以前的口蹄疫診斷都是由發(fā)現(xiàn)疑似病例再到臨床觀察，最后進入實驗室進行診斷。而目前國際上新的發(fā)展趨勢要求口蹄疫的診斷要更加快速，能夠支持臨床診斷。目前已經(jīng)出現(xiàn)的幾種新診斷方法有：（1）檢測抗原試紙條；（2）移動PCR；（3）等溫擴增檢測技術(shù)。

2.6 實驗室質(zhì)量控制

質(zhì)量保障是要保證實驗操作標準化，制定相應規(guī)程，并且結(jié)果是國際認可的。質(zhì)量保障系統(tǒng)要素包括：質(zhì)量保障管理機構(gòu)、標準作業(yè)程序和質(zhì)量手冊、內(nèi)控（IQC）、熟練操作、質(zhì)量控制負責人、員工培訓、生物安全和生物安保（生物安全實驗室）、儀器設備維護和校準、所有員工。實驗室質(zhì)量保障主要包括：實驗方法、樣品處理流程、PCR、生物安全、人員培訓。質(zhì)量保證才能質(zhì)量控制，詳細完善的記錄是質(zhì)控的關(guān)鍵點。實驗室中樣品要有詳細記錄，試驗流程中的記錄要有詳細情況介紹，要顯示所有操作的正確性。實驗室的內(nèi)部質(zhì)量控制分為技術(shù)質(zhì)量控制和工作質(zhì)量控制。技術(shù)質(zhì)量控制包括：測試方法，操作水平，儀器設備校準，樣品耗材核查，環(huán)境監(jiān)測等。工作質(zhì)量控制包括：遵守實驗室程序文件，下一道工序?qū)ι弦坏拦ば虻臋z查，及時糾錯，預防措施，最終檢測報告質(zhì)量控制等。實驗室要制訂有效的質(zhì)量控制計劃，其中包括檢測對象，項目，標準，控制方式，控制頻率等。

2.7 口蹄疫監(jiān)測

一般來說，監(jiān)測的目的在于證明疫情的存在或病原的感染，確定疫情或病原感染發(fā)生和分布情況，同時也要盡早盡可能的檢測出外來的或正在發(fā)生的疾病。動物健康狀況的監(jiān)測是一個必不可少的工具，因為主要有以下幾個原因：監(jiān)測可以發(fā)現(xiàn)疫情發(fā)生和病原的感染；可以監(jiān)測疫情的發(fā)展趨勢；便于控制疫情；為避免疫病和病原感染提供依據(jù)；為風險評估，動物和公眾的健康提供數(shù)據(jù)支持；為衛(wèi)生措施的制定提供充分的理論基礎。口蹄疫的監(jiān)測可以為國家，區(qū)域，地區(qū)建立、維持和重新建立無病原狀態(tài)提供指導，能夠提供一個可靠的論據(jù)來證明情況處于可以接受的可信度?？谔阋弑O(jiān)測也解釋了口蹄疫在某個地區(qū)的流行，提供科學依據(jù)和如何應對危險因素。口蹄疫監(jiān)測分為：臨床監(jiān)測、病毒學監(jiān)測和血清學監(jiān)測。臨床病例的鑒定是口蹄疫監(jiān)測的基本原則；病毒學監(jiān)測旨在監(jiān)測高危群體，追蹤觀察陽性血清學結(jié)果；血清學監(jiān)測旨在對口蹄疫病毒抗體檢測。

2.8 口蹄疫的風險分析

對可能遇到的自然環(huán)境的災難和危害的潛在頻率和后果，所提出的各種備選方案，做出評估和分析。我們?nèi)粘９ぷ髦械娘L險包括動物健康、產(chǎn)品安全、公共衛(wèi)生等方面，風險類型主要有經(jīng)濟貿(mào)易風險、市場風險等。經(jīng)濟貿(mào)易風險來源有人類活動、自然現(xiàn)象、政策改變以及技術(shù)改進等。市場風險來源主要和流通程度有關(guān)，包括生物性因素，全球一體化導致人類活動范圍增加的風險等。風險分析實際上就是貫穿在疫病防控過程中的一系列風險管理步驟，其中包括：風險識別、風險評估、風險管理和風險交流等四個主要方面。

2.8.1 風險識別 風險因素識別應注意借鑒歷史經(jīng)驗，尋找可能導致方案“不可行”的因素，以充分揭示方案實施的風險來源。風險識別要根據(jù)行業(yè)和項目的特點，采用分析和分解原則，把綜合性的風險問題分解為多層次的風險因素。常用的方法主要有風險分解法、流程圖法和情景分析法等；具體操作中，大多通過專家調(diào)查的方式完成。

2.8.2 風險評估 風險評估由四部分組成：釋放評估、暴露評估、結(jié)果評估和風險評估。風險評估的類型有定性評估，定量評估和半定量評估。（1）定性風險評估：所有風險評估都是從定性開始，是基于每一步發(fā)生的可能性作出的邏輯性綜合評價，并用文字來表達，必要時用定量和半定量風險評估予以補充。（2）定量風險評估：是以量化方式表述的非期望結(jié)果發(fā)生的可能性。（3）半定量風險評估：始于定性和定量風險評估，用分類代替分布。

2.8.3 風險管理（風險解決和風險監(jiān)督） 包括疫病的監(jiān)測，疫病預防控制方案的制定，風險下降后的影響（最難表述）等。是通過相應方式達到貿(mào)易伙伴可接受的保護水平的一系列過程，風險管理的原則是將貿(mào)易中的負面影響降到最低，目的是找一個平衡點。

貿(mào)易中的風險分析應用 家畜、肉類產(chǎn)品和生物制品進口貿(mào)易中的輸入性風險分析是做為判定公共衛(wèi)生、食品安全等方面政策的支撐，是基于風險的疫病監(jiān)測和控制。是一種專有功能的風險分析，旨在客觀準確的分析后確定有輸入有關(guān)的有害生物和疾病風險。風險分析能有效的避免病原移動，科學的解釋進口措施，把貿(mào)易限制降到最低。

2.8.4 風險交流 風險評估者，管理者，消費者和其他有關(guān)各方關(guān)于風險和風險管理的信息和意見的互動交流，并涉及整個風險管理中的溝通。落實到風險分析每一步應該是開放、互動、迭代和透明的。交流不暢有很多危害，包括打擊消費者信心、減少產(chǎn)品需求、打擊整個公眾的信心和造成間接損失（旅游、商務等），以及造成人們對獸醫(yī)或人類健康服務的信心不足等，這些影響可能長期存在。

風險分析的運用能給我們的動物疫病防控工作提供很大幫助，包括評估決策體系的正確與否，優(yōu)化配置資源，客觀而現(xiàn)實的考證風險以及識別技術(shù)要點的差異帶來的不同結(jié)果等。

2.9 口蹄疫疫苗的使用和評價

口蹄疫疫苗在預防控制口蹄疫上起著至關(guān)重要的作用，在區(qū)域化控制疫情和貿(mào)易中發(fā)揮著不可替代的作用。而影響口蹄疫疫苗質(zhì)量的因素是多方面的，首先我們要考慮到口蹄疫疫苗生產(chǎn)是昂貴和復雜的，出廠到使用之間的容忍度是很窄的，容易形成毒株和亞毒株特異性，疫苗免疫期短，還需要關(guān)注質(zhì)量、安全性、保護效力、純度和使用條件等因素。其次生產(chǎn)也要依據(jù)GMP和OIE標準生產(chǎn)疫苗，需要完成的質(zhì)量、安全性、保護效力、純度相關(guān)最低標準，也要有可接受的抗原匹配性。在許多國家為了保持疫苗質(zhì)量，在嚴刻的條件下有許多限制，比如在溫控、不完全免疫、管理和培訓等方面，影響比較大的還是冷凍影響、高溫影響和佐劑差別影響等。以不丹疫苗評估為例了解影響疫苗質(zhì)量和效力的因素，分析評估主要從九個方面入手綜合分析得出疫苗使用評價。一是在印度疫苗的生產(chǎn)和儲備；二是不丹疫苗的審批注冊；三是不丹的疫苗運輸；四是國家疫苗中心疫苗的接受、儲備和派送；五是從國家疫苗中心到地方的派送；六是地方疫苗儲備；七是鄉(xiāng)鎮(zhèn)運輸；八是鄉(xiāng)鎮(zhèn)儲備；九是田間疫苗的實施和管理。

3 學習體會

3.1 建立疫情風險分析機制

在日常工作過程中，由于存在許多不確定因素，動物疫病暴發(fā)和流行的風險是客觀存在的。因此，風險分析對于動物疫病預防和控制有決定性的作用。作為國家和省級的疫情預防控制部門，我們應該緊扣“預警預防”四字，立足于疫情的預警預報工作，根據(jù)周邊國家、省份和當前流行形式應用風險分析的方法分析對我們的影響，并提出前瞻性的防控措施。從家畜、肉類產(chǎn)品、動物皮張和生物產(chǎn)品等的貿(mào)易和運輸環(huán)節(jié)建立風險分析的長效機制，為更好的預防和控制疫情提供有效的科學依據(jù)。我們既要對口蹄疫疫情進行疫情風險分析，也要對其他病的疫情做好疫情風險分析，做到心中有數(shù)，有備無患。

3.2 動物疫病區(qū)域化管理建設

實施動物疫病區(qū)域化管理，是有效控制和撲滅動物疫病的重大舉措，也是適應保障現(xiàn)代畜牧業(yè)發(fā)展和公共衛(wèi)生安全的必然要求。有些省份在無疫區(qū)建設方面走在了前面，從政府到畜牧獸醫(yī)部門都重視動物疫病區(qū)域化管理建設。一些有條件的省份應從今年起，選擇自然屏障和防疫基礎好的縣區(qū)開展試點工作，加強制度建設，加大工作力度，探索無疫區(qū)建設經(jīng)驗。在此基礎上，按照《無規(guī)定動物疫病區(qū)管理技術(shù)規(guī)范》要求，通過不斷加強該地區(qū)動物疫病控制體系、動物衛(wèi)生監(jiān)督體系、疫情監(jiān)測體系和防疫屏障體系等建設，完善工作制度，提高疫病防控能力，使該地區(qū)建設成為符合農(nóng)業(yè)部標準的無疫區(qū)。省級疫控中心應在建設無規(guī)定動物疫病區(qū)方面從動物疫情監(jiān)測入手，開展各類疫病普查與排查。使用科學的、流行病學的方法開展各類疫病的監(jiān)測，對某些傳染病采取特殊的監(jiān)測手段。注重病原監(jiān)測和抗體監(jiān)測，做好疫情和病原感染情況的分析，為建立無規(guī)定動物疫病區(qū)提供可靠的數(shù)據(jù)來證明疫病情況處于可以控制的范圍。不僅監(jiān)測重大病流行情況，而且監(jiān)測常規(guī)病的流行情況，確保疫情監(jiān)測體系能為無規(guī)定動物疫病區(qū)建設保駕護航。

3.3 撲殺政策

在口蹄疫防控措施撲殺政策上，世界各國采取了不同的政策。對于發(fā)達國家或貿(mào)易出口為主及已消滅口蹄疫清凈無疫的國家，例如，歐洲、美洲等國家或地區(qū)一旦發(fā)生口蹄疫疫情，采取病畜和同群畜全部撲殺并進行無害化處理措施，目的是消滅口蹄疫凈化環(huán)境；對于發(fā)展中國家或口蹄疫防控情況比較好的國家，同時又有貿(mào)易出口等需求，例如，中國、俄羅斯等亞洲部分國家，對口蹄疫防控采取免疫和撲殺的綜合防控政策；對于經(jīng)濟條件差，國內(nèi)生產(chǎn)資料及生活資料比較缺乏的國家及地區(qū)，例如：朝鮮、緬甸、印度等國家，對口蹄疫防控主要采取免疫或感染自愈為主，對于病畜作為生產(chǎn)和生活資料保護，不進行消滅，所以病原在該地區(qū)長期存在，口蹄疫發(fā)生風險很大。

[1]Chris Morrissy.全球口蹄疫情況簡介[R]//農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局，蘭州獸醫(yī)研究所.中歐口蹄疫防控技術(shù)培訓班.蘭州：蘭州獸醫(yī)研究所，2011.

[2]Jhhn Edwards.亞洲國家口蹄疫情況簡介[R]//農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局，蘭州獸醫(yī)研究所.中歐口蹄疫防控技術(shù)培訓班.蘭州：蘭州獸醫(yī)研究所，2011.

[3]郭建宏.中國口蹄疫情況簡介[R]//農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局，蘭州獸醫(yī)研究所.中歐口蹄疫防控技術(shù)培訓班.蘭州：蘭州獸醫(yī)研究所，2011.

[4]張強.OIE監(jiān)督與診斷大綱[R]//農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局，蘭州獸醫(yī)研究所.中歐口蹄疫防控技術(shù)培訓班.蘭州：蘭州獸醫(yī)研究所，2011.

[5]張銀田，王功民.規(guī)模養(yǎng)殖場口蹄疫綜合防控技術(shù)的應用與研究[J].中國動物檢疫，2010，27（2）：68-70.

[6]孟國慶，王薇，張繼紅，等.口蹄疫加強免疫在實際工作中的重要性[J].中國動物檢疫，2009，26（3）：57.