不同方法及溶劑對黃連小檗堿的提取效果比較

席國萍，宋國斌

（山西大同大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，山西 大同 037009）

黃連為毛莨科植物黃連的干燥根莖，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品[1]。黃連中的有效成分主要為多種生物堿，如小檗堿、黃連堿、棕櫚堿、藥根堿、表小檗堿、非洲防己堿、小檗亭堿和木蘭花堿等，其中以小檗堿含量最高，約為3%～9%[2]。研究表明，黃連素具有顯著的抗心力衰竭、抗心律失常、降低膽固醇、抑制血管平滑肌增殖、改善胰島素抵抗、抗血小板、抗炎等作用[3]?，F(xiàn)有的小檗堿提取方法主要有：稀硫酸法、石灰乳法、有機溶劑法、液膜法、水提取法等[4]。本文通過比較不同方法及溶劑對黃連小檗堿的提取效果，為黃連資源開發(fā)利用提供參考。

1 實驗部分

1.1 藥品與器材

黃連購于貴陽市花溪區(qū)中西藥結(jié)合第四藥店，經(jīng)鑒定為毛茛科植物黃連；鹽酸小檗堿（標(biāo)準(zhǔn)品中國藥檢所）。

FA1004電子天平（青島揚中儀器有限公司）；UNICOUV-2000型紫外-可見分光光度計（上海肯強儀器有限公司）；RE-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上?？婆d儀器有限公司）；KS康氏振蕩器（上海圣科儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 黃連的前處理

將黃連放入50℃烘箱中烘烤變脆，粉碎，放入冰箱保存。

1.3 黃連總小檗堿提取液及不同方法提取液制備

1.3.1 黃連總小檗堿提取液的制備 稱取5g黃連，以乙醇為溶劑，提取溫度為60℃，索氏提取器提取至提取液無色，濃縮至干，用60%乙醇溶解定容至50mL，待測。

1.3.2 不同方法黃連小檗堿提取液的制備

1.3.2.1 回流提取法 稱取3份黃連，每份5g，在60℃下，分別以5倍體積（W/V）乙醇、丙酮、水溶液，回流提取3次，每次1h；分別合并不同溶劑提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60℃減壓濃縮至干，用60%乙醇溶解定容至50mL，待測。

1.3.2.2 振蕩提取法 稱取3份黃連，每份5g，分別以5倍體積（W/V）乙醇、丙酮、水溶液，室溫下振蕩提取3次，每次1h；分別合并不同溶劑提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60℃減壓濃縮至干，用60%乙醇溶解定容至50mL，待測。

1.3.2.3 浸提法 稱取3份黃連，每份5g，在60℃下，分別以5倍體積（W/V）乙醇、丙酮、水溶液，提取3次，每次1h；分別合并不同溶劑提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60℃減壓濃縮至干，用60%乙醇溶解定容至50mL，待測。

1.4 黃連小檗堿測定方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 以鹽酸小檗堿為標(biāo)準(zhǔn)品，無水乙醇為溶劑，準(zhǔn)確配制濃度為 3、6、9、12、15、18μg·mL-1鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，于345nm處測定吸光度，由最小二乘法得濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，并根據(jù)此方程計算黃連小檗堿含量[5]。

1.4.2 黃連總小檗堿測定 準(zhǔn)確量取1mL黃連總小檗堿提取液，于345nm處測定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算小檗堿濃度及小檗堿總含量。

1.4.3 不同方法黃連提取液中小檗堿含量測定 準(zhǔn)確量取1mL提取液，于345nm處測定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，由對應(yīng)的吸光度計算小檗堿濃度及小檗堿含量。

1.5 黃連小檗堿提取率的計算

1.6 提取率重復(fù)性實驗

根據(jù)1.5結(jié)果，選擇提取效果最好的方法及溶劑進行重復(fù)性實驗，檢測提取效果的穩(wěn)定性。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

根據(jù)1.4.1結(jié)果，用最小二乘法作線性回歸，得鹽酸小檗堿濃度C（μg·mL-1）與吸光度A的關(guān)系：A=0.05492C-0.03143，R=0.9997

2.2 黃連總小檗堿含量

按1.4.2方法，黃連總小檗堿含量經(jīng)測定為102.36mg·-1g，根據(jù)此結(jié)果計算不同提取液中小檗堿的提取率。

2.3 不同溶劑和方法下黃連小檗堿的提取率

按1.4.3方法，測定不同提取液中黃連小檗堿的含量，按1.5方法計算小檗堿提取率，結(jié)果見表1。

表1 不同方法和溶劑對黃連小檗堿的提取率Tab.1 Extraction rates of berberine in rhizoma of Coptis chinensis Franch by different ways and solvents

由表1可以看出，回流提取和乙醇分別在所考察方法及溶劑中提取效果最好，采用回流提取法，乙醇作為提取溶劑，黃連小檗堿的提取率達81%以上。

2.4 提取率重復(fù)性實驗

采用1.3.2.1方法，乙醇作為提取溶劑，做3次平行實驗，計算每次黃連小檗堿的提取率，考察提取效果的穩(wěn)定性，實驗結(jié)果見表2。

表2 提取率重復(fù)性實驗結(jié)果Tab.2 Repetitivenessexperimentresultsontheextractionrate

由表2可以看出，回流提取作為提取方法，乙醇為溶劑，提取效果重復(fù)性良好。

3 結(jié)論

本文分析比較了不同方法及溶劑對黃連小檗堿的提取效果，實驗結(jié)果表明：采用回流提取法，乙醇作為提取溶液，黃連小檗堿提取率和重復(fù)性良好。

［1］岑志芳,何作民.滲漉法提取黃連中小檗堿的工藝研究［J］.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2009,27（4）:79-81.

［2］王傳芬.黃連中小檗堿的提取工藝［J］.華西藥學(xué)雜志，2007,22（4）:476-477.

［3］王志華,陳碧,陳新玉.黃連提取方法的試驗研究［J］.實用藥物與臨床，2008,11（3）:191-192.

［4］黃志強,周民杰.黃連中小檗堿的超聲波提取工藝［J］.化學(xué)工程師,2006,（8）:54-56.

［5］孫波,張永光.正交法優(yōu)選黃連中鹽酸小檗堿的提取工藝［J］.海峽藥學(xué),1999,11（2）:100-101.