柴江平，王曉飛，葛海生，于 玲

柴辛鼻敏顆粒是由柴胡、細(xì)辛、川芎等多味中藥加工而成的中藥膠囊制劑，臨床用于過敏性鼻炎，療效顯著。為保證和控制該制劑的質(zhì)量，本試驗(yàn)建立了方中柴胡、細(xì)辛的TLC色譜定性鑒別方法，采用HPLC色譜法測定制劑中阿魏酸的含量，方法簡單可靠，重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Angilent1200高效液相色譜儀及其色譜工作站(安捷倫);TLC半自動(dòng)點(diǎn)樣儀(CAMAG)。

1.2 試藥

柴胡皂苷 a(中檢院，110777-200507);柴胡對照藥材(中檢院，120992-200504);細(xì)辛對照藥材(中檢院，121204-200803);阿魏酸 (中檢院，110773-200611);乙 腈 (SK Chemicals，14VA1H);甲 醇(Fisher Chemicals，043388);硅膠 G薄層板(青島海洋化工廠，20100108);柴辛鼻敏康膠囊(批號20101102，20101217，20110109，自制)。

2 薄層鑒別［1］

2.1 柴胡TLC鑒別

圖1顯示，取本品內(nèi)容物約5g，加乙醇40 mL，超聲處理20 min濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20mL。合并提取液，用氨試液洗滌2次，每次20mL。正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材1.5 g，加水30mL，加熱回流1h放冷濾過，自“用飽和正丁醇”起，同樣品制備法制成對照藥材溶液。另取柴胡皂苷a對照品適量，加甲醇制成含柴胡皂苷 a(1mg·mL－1)對照品溶液。制備不含柴胡藥材的柴辛鼻敏康膠囊內(nèi)容物，按樣品溶液制備方法制成陰性對照溶液。吸取上述4種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65︰35︰10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開、取出、晾干，噴以2%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱數(shù)分鐘，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2 細(xì)辛TLC鑒別

圖2顯示，取本品內(nèi)容物6g，加甲醇30mL，超聲處理30 min濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取細(xì)辛對照藥材0.5g，加甲醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。制備不含細(xì)辛藥材的柴辛鼻敏康膠囊內(nèi)容物，按樣品溶液制備方法，制成陰性對照溶液。吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯 (3︰1)為展開劑，展開取出晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，105℃加熱加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。

圖1 柴胡TLC圖

圖2 細(xì)辛TLC圖

3 阿魏酸含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱:SHISEIDO ODS C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相:乙腈-0.1% 磷酸溶液(15 ︰85)，檢測波長:320 nm，流速:1.0 mL·min－1，柱溫:30℃。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對照品溶液 精密稱取阿魏酸對照品約5mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇適量、超聲，使溶解后放冷，加甲醇至刻度搖勻，得濃度約為0.1 mg·mL－1的對照品溶液作為儲備液。精密量取上述儲備液2mL置10mL容量瓶中，定容至刻度搖勻，得對照品溶液。

3.2.2 供試品溶液 精密稱取本品內(nèi)容物約5g，置入50 mL錐形瓶中，精密加甲醇25mL稱重，超聲處理40min，放冷稱重，用甲醇補(bǔ)足損失重量，2500r離心5min，取上清液再用濾膜(0.45μm)濾過，即得供試品溶液。

3.2.3 陰性樣品溶液 制備不含川芎藥材的柴辛鼻敏康膠囊內(nèi)容物，按“3.2.2”項(xiàng)下方法操作，即得。

3.3 專屬性考察

精密吸取陰性樣品溶液、對照品溶液、供試品溶液各5μL，注入 HPLC，按“3.1”色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，樣品在與阿魏酸對照色譜相應(yīng)位置處有相同保留時(shí)間的色譜峰，保留時(shí)間分別為23.023min、23.050min，見 A、B;陰性樣品溶液相應(yīng)位置無干擾峰，方法專屬性良好。

3.4 線性考察

精密量取對照品溶液(0.02148 mg·mL－1)各1μL、3μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL 注入高效液相色譜儀，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄阿魏酸峰面積，以測得峰面積值為縱坐標(biāo)(Y)、芍藥苷的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:y=127.49x+6.8096(r=0.9999，n=7)。結(jié)果表明，芍藥苷在0.0215～0.5370μg內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

精密量取對照品溶液(0.02148 mg·mL－1)，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為5μL，記錄阿魏酸峰面積，計(jì)算得 RSD 0.99%(n=6)。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(20101102)樣品6份，按“3.2.2”項(xiàng)下方法操作制成6份供試品溶液，精密量取5μL注入高效液相色譜儀，按芍藥苷含量計(jì)算，RSD 0.17%(n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(20110109)樣品1份，按“3.2.2”項(xiàng)下方法操作制成供試品溶液，在室溫放置 0、2、4、6、8、10、12 h 后，分別進(jìn)樣 5 μL 測定，以芍藥苷峰面積計(jì)算，RSD 0.84%(n=7)，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，精密稱取已知含量的樣品(批號 20110109，含量為 0.10754mg·g－1)約 5g，共6份，精密稱定，分別置于50mL錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制成供試液，精密吸取供試液 5 mL，阿魏酸儲備液(0.10740 mg·mL－1)1 mL置10mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，過濾，精密吸取續(xù)濾液5μL注入高效液相色譜儀，測定阿魏酸含量并計(jì)算回收率(結(jié)果見表1)，得平均回收率為99.84%，RSD 1.23%。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3.9 樣品測定

表2顯示，取3個(gè)批次樣品，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，進(jìn)樣量為5μL，以外標(biāo)法計(jì)算阿魏酸的含量。

表2 樣品測定結(jié)果(n=3)

4 討論

4.1 本實(shí)驗(yàn)對方中主要成分柴胡、細(xì)辛采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，色譜斑點(diǎn)明顯、豐富，分離效果較好，專屬性強(qiáng)，可用于該制劑的定性鑒別。

4.2 實(shí)驗(yàn)中取相同批號的樣品，分別用甲醇、乙醇、70%甲醇、70%乙醇為溶劑考察了加熱回流1h、超聲處理40min和1h等方法。結(jié)果:由于樣品含糖量較高，用70%甲醇、70%乙醇為溶劑時(shí)，樣品難以過濾固不做選擇;以測得阿魏酸的含量為指標(biāo)比較，選擇甲醇超聲40min，提取充分，方法簡潔。

4.3 在色譜條件的選擇中，對不同流動(dòng)相［2～4］下阿魏酸含量測定，以及不同的柱溫條件進(jìn)行篩選，以流動(dòng)相為乙腈︰0.1%磷酸溶液(15︰85)，流柱溫為30℃時(shí)，阿魏酸與雜峰的分離效果理想，理論塔板數(shù)以阿魏酸計(jì)不低于2000，且方法簡單、易操作，可有效控制柴辛鼻敏康膠囊的質(zhì)量。

［1］ 中國藥典.一部［S］.2005.

［2］ 朱 偉，王學(xué)美.黃芪劑量對補(bǔ)陽還五湯中芍藥苷、阿魏酸含量的影響［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12(3):11-13.

［3］ 毛曉敏，張小波，陳小清，等.HPLC同時(shí)測定十二烏雞白鳳丸中芍藥苷、阿魏酸和丹皮酚含量［J］.中成藥，2008，30(5):678-681.

［4］ 李福如，繆 婧，顧海琳，等.清腦寧顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國藥業(yè)，2010，19(9):27-28.