張鐵濤 張志強 劉匯濤 高秀華＊ 楊福合 邢秀梅

(1.中國農業(yè)科學院飼料研究所,北京 100081;2.吉林省特種經濟動物分子生物學省部共建實驗室,吉林 1321093;3.中國農業(yè)科學院特產研究所,吉林 132109)

水貂是一種嚴格的肉食性動物,其消化道短,對飼糧中蛋白質的需求較高,以動物性飼料為主[1-2]。蛋白質是動物體內除水分外含量最多的物質,它不僅是生物體的組成部分,而且在體內執(zhí)行著各種各樣的生物學功能。蛋白質是影響水貂生長發(fā)育、皮毛成熟的重要營養(yǎng)因素,血清生化指標能夠適當反映水貂對飼糧蛋白質的利用情況[3-4],因而測定水貂在飼喂不同蛋白質水平飼糧下血清生化指標的變化有助于研究動物機體內的代謝變化規(guī)律。國內外專家以新鮮飼料飼喂水貂進行了部分研究[1-4],而以干粉料作為飼糧來研究蛋白質水平對水貂血清生化指標的影響還未見報道。因此,本試驗基于冬毛生長期水貂對蛋白質的需求,擬以干粉料替代新鮮飼料,研究飼糧蛋白質水平對水貂血清含氮物質、氮代謝和抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗飼糧

參照 NRC(1982)[5]水貂和狐貍營養(yǎng)需求量設計飼糧的蛋白質水平分別為 28%、30%、32%、34%、36%和 38%。試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表 1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diets(air-dry basis) %

1)每千克預混料含有 Contained the following per kg of prem ix：VA 1 000 000 IU,VD3200 000 IU,VE 6 000 IU,VB1600mg,VB2800m g,VB6300mg,VB1210mg,VK3100mg,VC 40 000mg,煙酸 niacin acid 4 000mg,泛酸 pantothenic acid 1 200mg,生物素 biotin 20mg,葉酸 folic acid 80mg,膽堿 choline 30 000m g,Fe 8 200mg,Cu 800 mg,Mn 1 200m g,Zn 5 200mg,I 50mg,Se 20mg,Co 50mg。

2)粗蛋白質、鈣、總磷為測定值,其他為計算值。CP,Ca and TPweremeasured values,while others were calculated values。

1.2 試驗動物與飼養(yǎng)管理

選擇 90日齡、平均體重為(1.13±0.14)kg的健康公貂 60只,隨機分為 6組,每組 10個重復,每個重復 1只,單籠飼養(yǎng)。6組水貂分別飼喂蛋白質水平為 28%(Ⅰ組)、30%(Ⅱ組)、32%(Ⅲ組)、34%(Ⅳ組)、36%(Ⅴ組)和 38%(Ⅵ組)的試驗飼糧。預試期 7 d,正試期 90 d。試驗開始前,對水貂進行常規(guī)免疫接種,每天 08：00和 15：00各飼喂 1次,自由飲水。

1.3 血清制備

養(yǎng)殖試驗結束后,各試驗組分別選擇 6只水貂,心臟采血,并用鹽酸琥珀膽堿心臟注射處死。采血時間為 07：40—09：30,每只采血 10m L,裝于促凝管中,靜置析出血清后 3 500 r/m in、4～8℃離心 10min,血清分裝于 1.5m L的 Eppendorf管中,于 -80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 測定指標及方法

尿素氮(UN)采用二乙酰一肟法測定,總蛋白(TP)采用雙縮脲法測定,白蛋白(ALB)采用溴甲酚綠法測定,球蛋白(GLOB)采用總蛋白與白蛋白的差值表示,谷草轉氨酶(GOT)采用賴氏法測定,谷丙轉氨酶(GPT)采用賴氏法測定,總氨基酸(TAA)采用銅離子絡合法測定,超氧化物歧化酶(SOD)采用抽提法測定,丙二醛(MDA)采用硫代巴比妥酸法測定,谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)采用非酶促反應法測定。測定儀器主要有奧普森AM S-18全自動生化分析儀和 Analytik jena Specord 50分光光度計。

1.5 數(shù)據處理

結果以平均值 ±標準差表示,試驗數(shù)據采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析,采用 One-way ANOVA進行差異顯著性檢驗,其中 P＜0.05為差異顯著,P＜0.01為差異極顯著。

2 結 果

2.1 血清含氮物質

由表 2可以看出,Ⅲ組水貂的血清白蛋白含量極顯著高于Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ組(P＜0.01),顯著高于Ⅰ和Ⅵ組(P＜0.05),Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組間差異不顯著(P＞0.05);血清球蛋白和總蛋白含量的差異性趨勢變化相同,均為Ⅲ組極顯著高于其他試驗組(P＜0.01),其他試驗組間差異均不顯著(P＞0.05);在血清總氨基酸含量上,Ⅳ組極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P＜0.01),Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組間以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ組間差異均不顯著(P＞0.05)。

表 2 血清含氮物質Table 2 Nitrogen heterocyclic compounds in serum

2.2 血清氮代謝指標

由表 3可以看出,Ⅲ組水貂的血清尿素氮顯著高于Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ組(P＜0.05),其他試驗組間差異不顯著(P＞0.05);Ⅴ組水貂的血清谷草轉氨酶活性顯著高于Ⅱ和Ⅳ組(P＜0.05),與Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ組相比差異不顯著(P＞0.05),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ組間差異亦不顯著(P＞0.05);Ⅳ組水貂的血清谷丙轉氨酶活性顯著高于Ⅲ組(P＜0.05),與Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ和Ⅵ組相比差異不顯著(P＞0.05)。

表 3 血清氮代謝指標Table 3 Nitrogen metabolism indices in serum

2.3 血清抗氧化指標

由表 4可以看出,各試驗組間血清丙二醛含量差異不顯著(P＞0.05);在血清超氧化物歧化酶活性上,Ⅴ組極顯著高于Ⅱ和Ⅲ組(P＜0.01),Ⅳ和Ⅵ組顯著高于Ⅱ組(P＜0.05),Ⅲ組極顯著低于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組(P＜0.01);Ⅳ組水貂的血清谷胱甘肽過氧化物酶活性顯著高于Ⅵ組(P＜0.05),其他試驗組間差異均不顯著(P＞0.05)。

表 4 血清抗氧化指標Table 4 Antioxidant indices in serum

3 討 論

3.1 飼糧蛋白質水平對血清含氮物質含量的影響

本試驗中,飼糧蛋白質水平增加到 32%后,血清白蛋白、球蛋白和總蛋白含量不再隨著飼糧蛋白質水平的增加而提高。血清總蛋白是機體蛋白質的一個來源,用于修補組織和提供能量,在一定程度上也代表了飼糧的蛋白質水平以及動物對蛋白質的消化吸收程度。血清蛋白質(白蛋白和球蛋白以及總蛋白)的含量與動物對飼糧蛋白質的攝取量有關,同時受內源蛋白質分解代謝、血管內外及細胞外液增加等眾多因素的影響[6]。余紅心等[7]的研究表明,云南武定雞血清總蛋白、白蛋白含量隨著飼糧蛋白質水平的增加而提高。水貂在飼糧營養(yǎng)水平不足或禁食條件下,血液中的單核細胞和淋巴細胞數(shù)量下降,出現(xiàn)免疫抑制現(xiàn)象[8],免疫球蛋白是組成血清總蛋白的一部分,免疫球蛋白的含量降低也能導致血清總蛋白含量的降低。Tuitoek等[9]研究表明,飼糧中氨基酸比值一定時,降低飼糧中蛋白質水平會對試驗動物的蛋白質代謝產生明顯影響。本試驗中,32%蛋白質飼糧組水貂的血清蛋白質含量顯著高于其他試驗組,可能是由于蛋白質的氧化分解引起的;28%蛋白質飼糧組水貂除與 32%蛋白質飼糧組水貂差異顯著外,與其他試驗組未有顯著差異,表明 28%蛋白質飼糧組水貂未出現(xiàn)營養(yǎng)失衡現(xiàn)象。何欣等[10]以氨基酸平衡飼糧對豬進行試驗,結果發(fā)現(xiàn),提高飼糧中蛋白質水平有可能打破了原有的氨基酸的平衡模式。本試驗中,水貂血清總氨基酸含量在飼糧蛋白質水平達到 34%時達到最高值,這可能是由于其氨基酸比例適宜所致。

3.2 飼糧蛋白質水平對血清氮代謝的影響

血清尿素氮是衡量動物體內蛋白質代謝和氨基酸平衡的一個重要指標。通常,較低的尿素氮含量表明氨基酸平衡較好,機體蛋白質合成率較高[11]。血清尿素氮過高,則會使氮通過尿液排出體外,降低飼糧中氮的利用率,其含量可以反映動物蛋白質代謝狀況,并可作為蛋白質沉積的一個指標[12]。在可消化氨基酸適當范圍內,增加氨基酸的水平能夠降低血清尿素氮含量,繼續(xù)增加氨基酸采食量,血清尿素氮含量增加[13]。谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶是動物體內重要的轉氨酶,在非必需氨基酸的合成和蛋白質分解中起著重要的中介作用,其活性反映了蛋白質合成和分解代謝的狀況[14]。轉氨酶在機體主要起轉氨基作用,使氨基酸生成相應的 α-酮酸后轉變成糖、脂、氨基化以及氧化供能等。轉氨作用引起的谷氨酰胺濃度升高會增加 N-乙酰谷氨酸的合成,從而激活氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ,加速氨基甲酰磷酸合成,推動尿素循環(huán)。谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶較高的活性與氨基酸的代謝強度相關[15]。本試驗中,34%蛋白質飼糧組水貂血清尿素氮含量較低,而谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活性較高,表明該組水貂的氨基酸代謝強度高,有利于蛋白質的合成過程。

3.3 飼糧蛋白質水平對血清抗氧化能力的影響

機體在代謝過程中產生大量超氧陰離子自由基(O2-?),該自由基是一種強氧化劑,會對機體產生損傷,而超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶可催化?還原為減少?對機體的損傷[16]。丙二醛是 O-2?攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸,引發(fā)脂質過氧化反應后產生的。丙二醛的量?？梢苑从硻C體內脂質氧化的程度,間接的反映出細胞損傷的程度。超氧化物歧化酶和谷胱甘肽氧化酶是消除自由基的重要物質,其活性的高低間接反映了機體清除氧自由基的能力。本試驗中,各試驗組水貂的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活性與丙二醛含量呈現(xiàn)一定的相關性,飼糧蛋白質水平達到 34%時,抗氧化物質活性相對較高,細胞損傷程度相對較低。

4 結 論

冬毛期水貂的飼糧蛋白質水平達到 34%時,機體具有相對較高的蛋白質合成效率和較強的抗氧化能力。

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