高效液相色譜法測(cè)定竹筷中噻苯咪唑、鄰苯基苯酚和聯(lián)苯

何淑娟，范 斌*，李潤(rùn)巖，俞 婧，張 京

(河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050051)

高效液相色譜法測(cè)定竹筷中噻苯咪唑、鄰苯基苯酚和聯(lián)苯

何淑娟，范 斌*，李潤(rùn)巖，俞 婧，張 京

(河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050051)

建立高效液相色譜測(cè)定竹筷中噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯的方法。以甲醇為提取溶劑，用索氏提取法提取竹筷中噻苯咪唑、鄰苯基苯酚和聯(lián)苯3種保鮮劑。以甲醇-水(體積比70∶30)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，采用C18柱(250mm×4.6mm，5μm)分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)247nm，進(jìn)樣量20μL。方法的相關(guān)系數(shù)均大于0.999，最低檢出限為0.01μg/mL，平均回收率為95.8%～97.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%～2.6%。應(yīng)用所建立的方法測(cè)定一次性竹筷中噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯的殘留量，結(jié)果表明：該方法樣品處理簡(jiǎn)單，色譜分離完全，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適于竹筷中噻苯咪唑、鄰苯基苯酚和聯(lián)苯的分析檢測(cè)。

高效液相色譜；竹筷；噻苯咪唑；鄰苯基苯酚；聯(lián)苯

噻苯咪唑別名 2-(4-噻唑基)-苯并咪唑、殺菌靈、涕必靈，為廣譜性抗真菌劑，具有內(nèi)吸性，即它可通過(guò)蒸騰流而在整個(gè)植物內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)分布，具有很長(zhǎng)的殘效。它可控制感染，而且可抑制芽孢發(fā)芽、干擾菌絲體的生長(zhǎng)，并影響分生孢子的形成?？捎糜谒ｕr，具體應(yīng)用可制成膠懸劑、液劑等供浸果，也可制成果醬和煙薰劑，用于柑橘、香蕉、等貯藏期防腐。鄰苯基苯酚又名2-羥基聯(lián)苯或2-苯基苯酚，為白色薄片或塊狀物或淡紅色粉末，極易溶于水。鄰苯基苯酚是用途十分廣泛的有機(jī)化工產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于殺菌防腐[1-3]、合成纖維的染色載體[4]，合成新型塑料、樹(shù)脂和高分子材料的穩(wěn)定劑和阻燃劑[5]等領(lǐng)域。

噻苯咪唑(TBZ)、鄰苯基苯酚(DPP)、聯(lián)苯(DP)3種殺真菌劑具有高效廣譜的殺菌防霉作用。已廣泛應(yīng)用于采收后的水果和蔬菜的防腐保鮮[6-12]。但過(guò)量使用對(duì)人體有致癌性、致畸性，并可造成肝臟和腎臟嚴(yán)重受損[13]。近年來(lái)，人們對(duì)防霉劑的研究越來(lái)越重視，主要以氣象色譜和液相色譜法為主[14-20]。在竹制、木制衛(wèi)生筷生產(chǎn)、運(yùn)輸過(guò)程中，常有過(guò)量加入殺真菌劑的情況。我國(guó)是竹筷消費(fèi)和出口大國(guó)，因此，建立一種準(zhǔn)確、快速的檢驗(yàn)方法具有重大意義。

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定竹筷中的噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯，通過(guò)對(duì)樣品提取和色譜條件的優(yōu)化，使回收率有很大的提高。方法分辨率高、靈敏度高、精密度好，適用于竹筷中噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯的檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

竹筷為河北省內(nèi)以原竹為材料，經(jīng)加工而成的一次性筷子；甲醇(色譜純) 中國(guó)迪馬公司；噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯(標(biāo)準(zhǔn)品) 德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1200超快速液相色譜儀(配有自動(dòng)進(jìn)樣器、二元泵、紫外檢測(cè)器) 美國(guó) Agilent公司；KQ-250DV型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；3K15離心機(jī) 美國(guó)Sigma公司；N-EVAP 111氮吹儀 美國(guó)OA-SYS公司；B-811索氏提取器 瑞士步琪公司；XHB旋渦混勻器 江蘇康健醫(yī)療用品有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取適量的噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至100mL，配置成噻苯咪唑100μg/mL、鄰苯基苯酚100μg/mL、聯(lián)苯100μg/mL的儲(chǔ)備液。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要用甲醇將上述3種儲(chǔ)備液混合后稀釋成20、40、60、80、100μg/mL。

1.3.2 樣品前處理

從抽取的實(shí)驗(yàn)室樣品中取樣，把附在試樣上的竹屑或碎片等清除干凈。再將樣品劈成厚約1mm、長(zhǎng)小于1cm的竹條，精密稱取1g(準(zhǔn)確至0.001g)試樣置于索氏提取裝置中，加入150mL甲醇到接收瓶中，溫度設(shè)置為90～95℃，抽提4h。用氮吹儀將提取液吹干，準(zhǔn)確加入5.0mL甲醇溶解，樣液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾至自動(dòng)進(jìn)樣瓶中，供儀器分析用。

1.3.3 色譜分析條件

色譜柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(體積比70∶30)；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：247nm；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：25℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品預(yù)處理的選擇與優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)在相同色譜條件下，對(duì)不同提取方式、提取溶劑和提取時(shí)間進(jìn)行分析。結(jié)果表明：以甲醇為提取溶劑，采用索氏提取法連續(xù)不斷地萃取樣品中的噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯4h，能夠得到更有效的提取，得到了很好的分離效果和峰形。采用索氏提取法，回收率也較前兩種方法有明顯提高，詳見(jiàn)表1、2。

表1 不同樣品處理的結(jié)果Table 1 Comparison among different sample pre-treatment methods

表2 不同提取方法回收率比較Table 2 Comparison of recovery rates of different extraction methods for TBZ, OPP and DP

2.2 色譜條件的優(yōu)化

分別以甲醇-水及十二烷基磺酸鈉-甲醇-乙腈-水-磷酸兩組流動(dòng)相體系進(jìn)行色譜分析，結(jié)果顯示：用這兩個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行色譜分析，都能得到較好的峰形和分離度。但乙腈是一種神經(jīng)性毒劑，毒性比甲醇大，可經(jīng)皮膚、消化道吸收。其蒸氣則可經(jīng)呼吸道侵入體內(nèi)。因此，利用甲醇-水為流動(dòng)相，更為簡(jiǎn)單低毒高效，操作簡(jiǎn)便快捷。試驗(yàn)還分別以甲醇、甲醇-水=80∶20、甲醇-水=70∶30、甲醇-水=60∶40、甲醇-水=1∶1為流動(dòng)相進(jìn)行色譜分析，結(jié)果表明：當(dāng)以甲醇-水的體積比為70∶30為流動(dòng)相時(shí)得到了分離度和峰形均較好的結(jié)果(圖1)。

圖1 噻苯咪唑(1)、鄰苯基苯酚(2)、聯(lián)苯(3)的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖Fig.1 Standard chromatograms of TBZ, OPP and DP

2.3 工作曲線和最低檢出限

將100μg/mL的噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成質(zhì)量濃度20、40、60、80、100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，每種質(zhì)量濃度平行測(cè)3次，取平均值，用標(biāo)品的質(zhì)量濃度對(duì)色譜峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得3種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù)，見(jiàn)表3。

表3 線性關(guān)系和檢出限Table 3 Linear equations and detection limits of the method for TBZ, OPP and DP

表3結(jié)果表明，噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯在20～100μg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)其峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，按3倍信噪比得出方法檢出限為0.01μg/mL。

2.4 精密度和回收率

選擇未檢出噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯的竹筷為基體，分別添加質(zhì)量濃度為5、10、50mg/kg的噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)液，每個(gè)質(zhì)量濃度水平重復(fù)測(cè)定7次，求得加標(biāo)回收率及精密度，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的測(cè)定結(jié)果(n=7)Table 4 Spike recovery rates and relative standard deviations of the method for TBZ, OPP and DP (n=7)

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)檢測(cè)一次性竹筷中噻苯咪唑、鄰苯基苯酚及聯(lián)苯殘留量的方法進(jìn)行研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)樣品前處理方法和流動(dòng)相的選擇進(jìn)行優(yōu)化，通過(guò)精密度、分離度和回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，該方法具有操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性和準(zhǔn)確度高等特性，各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)均完全滿足檢測(cè)需要。

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Determination of Thiabendazole, O-phenylphenol and Diphenyl Residues in Chopsticks by High Performance Liquid Chromatography

HE Shu-juan，F(xiàn)AN Bin*，LI Run-yan，YU Jing，ZHANG Jing
(Key Laboratory of Food Safety of Hebei, Hebei Institute of Food Quality Supervision Inspection and Research, Shijiazhuang 050051, China)

A high performance liquid chromatography method was developed for determining three fungicides including thiabendazole (TBZ), o-phenylphenol (OPP) and diphenyl (DP) residues in chopsticks. The resi dues were extracted with methanol by Soxhlet extraction, separated on Cosmosil C18 column by using a mixture of methanol and water (70∶30) as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min and detected at 247 nm. The correlation coefficient and detection limit of this method were 0.999μ g/mL and 0.01μ g/mL, respectively. The recovery rates and relative standard deviations for TBZ, OPP and DP in a blank sample across three spike levels were 95.8%-97.1% and 1.4%-2.6%, respectively. This method proved simple, fast, highly efficient and accurate.

high performance liquid chromatography；chopsticks；thiabendazole (TBZ)；o-phenylphenol (OPP)；diphenyl (DP)

TS207.5

A

1002-6630(2011)14-0312-03

2010-11-01

何淑娟(1982—)，女，工程師，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称芳跋嚓P(guān)產(chǎn)品的檢測(cè)技術(shù)。E-mail：heshuj@163.com

*通信作者：范斌(1979—)，男，工程師，碩士研究生，研究方向?yàn)閮x器分析。E-mail：fbin2006@126.com