何進(jìn)林，張志華

(1.廣西出入境檢驗(yàn)檢疫局賀州辦事處，廣西 賀州 542800；2.山西出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，山西 太原 030024)

高效液相色譜法測(cè)定水果中吡蟲啉農(nóng)藥殘留量

何進(jìn)林1，張志華2

(1.廣西出入境檢驗(yàn)檢疫局賀州辦事處，廣西 賀州 542800；2.山西出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，山西 太原 030024)

建立高效液相色譜法測(cè)定水果中的吡蟲啉殘留量的檢測(cè)方法。采用改進(jìn)的QuEChERS方法，乙腈勻漿提取，提取液加C18和PSA填料凈化，液相色譜法檢測(cè)。結(jié)果表明：方法的定量檢測(cè)限為0.05mg/kg，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)0.9988；當(dāng)添加水平在0.05～0.20mg/kg范圍內(nèi)時(shí)，回收率均可在92%～102%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在5%～11%之間。本方法是一種快速、準(zhǔn)確、靈敏度高的同時(shí)檢測(cè)水果中吡蟲啉殘留的檢測(cè)方法。

水果；高效液相色譜法；吡蟲啉

吡蟲啉為高效廣譜殺蟲劑，具有內(nèi)吸、胃毒、拒食、驅(qū)避作用，其毒性呈典型的昆蟲神經(jīng)干擾作用，主要用來防治刺吸式口器害蟲。近年來，吡蟲啉在果樹上的使用量的逐年增加。目前，國(guó)內(nèi)外已制訂了多種農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，尤其是日本開始實(shí)施的“肯定列表制度”，對(duì)農(nóng)藥的限量進(jìn)行了嚴(yán)格規(guī)定，例如梨中的限量為1mg/kg[1]。為使我國(guó)水果產(chǎn)品順利出口，探索水果中吡蟲啉殘留快速準(zhǔn)確的分析方法顯得極為迫切，吡蟲啉的測(cè)定方法多為色譜法，但操作繁瑣，文獻(xiàn)[2-15]報(bào)道用乙腈或乙醇提取樣品，經(jīng)反萃取或固相萃取凈化后進(jìn)行測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合QuEChERS前處理技術(shù)，采用HPLC法檢測(cè)。QuEChERS方法是2003年由美國(guó)化學(xué)家Steven J. Lehotay 和德國(guó)Michelangelo Anastassiadas 提出的一種快速、簡(jiǎn)單、低成本的樣品處理方法，該方法的關(guān)鍵是采用分散固相萃取凈化法，即提取液直接加入PSA吸附劑粉末進(jìn)行凈化，經(jīng)離心后上清液上機(jī)檢測(cè)[15-17]。本實(shí)驗(yàn)在此方法的基礎(chǔ)上，對(duì)樣品的提取及凈化都進(jìn)行了改進(jìn)，除用PSA粉外，加入ODSC18粉提高凈化效果，旨在為水果中吡蟲啉殘留量的檢測(cè)方法的建立提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

水果 市售。

乙腈(色譜純)、Cleanert PSA填料、Cleanert C18填料、0.45μm的有機(jī)相濾膜 博納艾杰爾科技；氯化鈉(分析純) 天津科密歐公司；吡蟲啉(imidacloprid)標(biāo)準(zhǔn)品(純度97.0%) Dr.Ehrenstorfer公司。

吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品溶于乙腈，配成100μg/mL的儲(chǔ)備液，使用時(shí)再稀釋成適當(dāng)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2 儀器與設(shè)備

2690高效液相色譜儀(配有紫外檢測(cè)器) 美國(guó)Waters公司；23K臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sigma公司；Vortex Genie2旋渦混合器 美國(guó)Vortex-Genie公司；FASTH21高通量勻漿機(jī) 瑞士Consual公司。

1.3 色譜分析條件

色譜柱：Ultimate OR C18(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：室溫；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；進(jìn)樣量：20μL；流動(dòng)相為乙腈-水(70:30，V/V)。

1.4 樣品處理

取試樣可食用部分，粉碎并混合均勻，準(zhǔn)確稱取5g(精確至0.01g)，置于勻漿管中，加入10.0mL乙腈和1g氯化鈉，10000r/min勻漿1min。以4000r/min離心5min。取1mL上清液加入25mg PSA和25mg C18，渦流混合30s，過0.45μm的有機(jī)相濾膜待測(cè)。

1.5 高效液相色譜法測(cè)定

將配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液和處理好的樣品溶液按照1.3節(jié)的色譜條件依次進(jìn)樣，進(jìn)行定性及定量分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

在190～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，在270nm波長(zhǎng)處有最大吸收。因此本實(shí)驗(yàn)選270nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。流動(dòng)相中乙腈的比例越高，吡蟲啉出峰越早，比較流動(dòng)相V(乙腈):V(水)為80:20、70:30、50:50三種比例，發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動(dòng)相比例為V(乙腈):V(水)=70: 30時(shí)，目標(biāo)峰和雜質(zhì)可以實(shí)現(xiàn)完全分離，而且峰型較好。因此選取流動(dòng)相比例為V(乙腈):V(水)=70:30。

2.2 提取凈化條件的選擇

綜合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉殘留的提取溶劑有4種，即乙腈、甲醇、丙酮、乙酸乙酯。考慮到乙腈是一種多殘留方法中常用的溶劑，對(duì)于方法的多殘留農(nóng)藥檢測(cè)的適用性，而且它在飽和NaCl溶液的存在下能很好的與水分層，使得溶于水的一部分干擾雜質(zhì)被去除，而對(duì)于非極性干擾物可以進(jìn)一步用固相萃取等方法凈化，這樣可以避免CH2Cl2的使用。因此用乙腈作為提取溶劑提取吡蟲啉農(nóng)藥。

原QuEChERS快速多農(nóng)藥殘留分析方法采用振蕩提取，然后從提取液中取2mL進(jìn)行凈化；改進(jìn)后的方法采用乙腈均質(zhì)提取，提取效率更高，尤其對(duì)于纖維較長(zhǎng)、不易制備為均勻試樣的樣品。水果中主要是一些有機(jī)酸、部分色素、維生素有干擾。PSA去除脂肪酸效果較好，在去除色素、甾醇和維生素方面效果一般，而ODS C18可以去除一些維生素、色素、甾醇。對(duì)于色素石墨化炭黑的去處效果最佳，但是水果提取液中量不大，當(dāng)加入PSA和C18時(shí)即可滿足要求。因此本方法加入兩種填料來凈化。分別加入PSA和C18兩種填料5、10、25、40、50mg比較凈化效果，發(fā)現(xiàn)隨著填料的增多，凈化效果越來越顯著，當(dāng)增加到25mg后再增加沒有效果，固最終確定為添加PSA和C18各添加25mg，同時(shí)做了回收率實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)回收率滿足要求。

按本實(shí)驗(yàn)方法處理的蘋果、梨的空白色譜圖和添加0.05mg/kg吡蟲啉的色譜見圖1，可以看出本方法處理的樣品對(duì)吡蟲啉的檢測(cè)沒有干擾。

圖1 各樣品的色譜圖Fig.1 Chromatogram of each sample

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

將吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)貯備液依次稀釋至0.02、0.05、0.10、0.20、0.50μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，用上述色譜條件進(jìn)行色譜分析。每個(gè)質(zhì)量濃度進(jìn)樣至少重復(fù)3次，得到峰面積的平均值。根據(jù)不同進(jìn)樣濃度和相應(yīng)峰面積大小繪制吡蟲啉的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程是y=9×10-6x-0.0016，相關(guān)系數(shù)為r=0.9988，線性范圍為0.02～0.50μg/mL。

按照國(guó)際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)(IUPAC)的定義，定量限以RSN＞10計(jì)。以空白基質(zhì)加標(biāo)的方法，確定本方法定量限為0.05mg/kg，完全符合國(guó)內(nèi)外最高殘留限量(MRL)的要求。吡蟲啉的液相色譜見圖2。

圖2 0.025mg/L吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)色譜圖Fig.2 Chromatogram of imidacloprid standard

2.4 精密度和回收率實(shí)驗(yàn)

用空白樣品加標(biāo)方法進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn)。分別對(duì)蘋果和梨進(jìn)行3個(gè)不同水平的加標(biāo)，每個(gè)水平平行測(cè)定10次，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表1。從表1可以看出，當(dāng)添加水平在0.05～0.20mg/kg范圍內(nèi)，回收率均可在92%～102%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在5%～11%之間。

表1 水果中吡蟲啉殘留量的回收率和變異系數(shù)(n=10)Table 1 Recovery rates and relative standard deviations ofimidacloprid residue in spiked blank fruits (n=10)

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)建立高效液相色譜檢測(cè)蘋果、梨中吡蟲啉殘留量的方法，該法的定量限為0.05mg/kg，可以滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)水果中吡蟲啉殘留量的要求；方法的回收率和精密度符合實(shí)驗(yàn)要求，同時(shí)方法簡(jiǎn)便、易操作、成本低，適用于日常檢驗(yàn)。

[1]食品中農(nóng)藥化學(xué)品殘留限量編委會(huì). 食品中農(nóng)藥化學(xué)品殘留限量: 藥品卷[M]. 北京: 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2006: 758.

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Determination of Imidaclprid Residue in Fruits by HPLC

HE Jin-lin1，ZHANG Zhi-hua2
(1. Hezhou Dumex, Guangxi Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Hezhou 542800, China；2. Technology Center, Shanxi Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Taiyuan 030024, China)

A high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed to determine imidaclprid residue in fruits. Samples were extracted by the improved QuEChERS method using acetonitrile as the solvent and purified on C18/PSA column. The detection limit of this developed HPLC method was 0.05 mg/kg and the linear correlation coefficient of standard curve was 0.9988. Recovery rates for imidaclprid in spiked samples at 0.05, 0.1 mg/kg and 0.20 mg/kg was in the range of 92%-102% with a relative standard deviation varying from 5% to 11%. Therefore, this developed method is characteristics of rapid determination, high accuracy and sensitivity so that it is suitable for the detection of imidaclprid residue in fruits.

fruits；HPLC；imidaclprid

O651；TS207.53

A

1002-6630(2011)06-0230-03

2010-05-07

何進(jìn)林(1972—)，男，工程師，研究方向?yàn)榛さV產(chǎn)品和食品理化檢測(cè)。E-mail：87418262@qq.com