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(1.解放軍第二○八醫(yī)院461臨床部，吉林 長(zhǎng)春 130051，2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130117)

天麻膠囊由天麻、羌活、獨(dú)活、鹽杜仲、牛膝、粉萆 、附子(制)、當(dāng)歸、生地黃、玄參等10味組成。具有祛風(fēng)除濕，舒筋通絡(luò)，活血止痛之功效。用于肢體拘攣，手足麻木，腰腿酸痛等癥。天麻為方中主要藥味，對(duì)其質(zhì)量控制十分重要，因此建立了以高效液相色譜法測(cè)定天麻素含量的方法，為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent 1200 series高效液相色譜儀，天麻素對(duì)照品，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào):0807-200205，供含量測(cè)定用)。乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex Luna C18(4.6×250 mm,5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-水(2∶98)；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；柱溫35 ℃；流速1 mL/min。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取80 ℃減壓干燥1 h的天麻素對(duì)照品，加流動(dòng)相制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.3 陰性對(duì)照試驗(yàn) 為進(jìn)一步考察試驗(yàn)的合理性，取不含淫羊藿的陰性對(duì)照品，依法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品色譜在與天麻素峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無(wú)干擾峰檢出，從而證明本方法是合理可行的。

2.4 供試品溶液的制備 取本品20粒內(nèi)容物，研細(xì)，取2 g，精密稱定，精密加甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h,取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，置水浴上蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解，并轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別精密吸取天麻素對(duì)照品溶液(0.040 8 mg/mL)1、3、5、7、9 μL測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Y=1 862.21X-4.830 4(r=0.999 9)，結(jié)果表明天麻素在0.04～0.36 μg范圍內(nèi),進(jìn)樣量與峰面積呈線性關(guān)系，符合外標(biāo)法定量測(cè)定的要求。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μL,注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測(cè)定其色譜峰面積值，結(jié)果其天麻素峰面積積分值的RSD為0.64%，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別與0、3、6、24、48 h按正文色譜條件測(cè)定,結(jié)果，供試品溶液在48 h內(nèi)基本穩(wěn)定。RSD=0.5%。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一供試品(吉林本草堂藥業(yè) 批號(hào)：2008010)依正文方法獨(dú)立測(cè)定6次，結(jié)果表明本法重復(fù)性良好，見(jiàn)表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.9 回收率試驗(yàn) 采取半量加樣回收法，精密量取天麻素對(duì)照品的甲醇溶液(12.61 mg/25 mL)2 mL,共6分，分別置具塞錐形瓶中，揮干溶劑，再分別精密加入已知含量的供試品(吉林本草堂藥業(yè)提供，批號(hào):20080101，含天麻素1.121 mg/g)1 g，依法測(cè)定回收率，結(jié)果測(cè)得天麻素的平均回收率為100.33%,RSD=1.59%。見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定 精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 10批樣品中天麻素含量測(cè)定結(jié)果

由于原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)天麻素的含量測(cè)定項(xiàng)，從以上測(cè)定結(jié)果看，各廠家產(chǎn)品的天麻素的含量差異較大。根據(jù)《中國(guó)藥典》2005年版一部天麻項(xiàng)下天麻素的含量測(cè)定限度規(guī)定，和該處方中天麻的量，理論上得出本品每粒含天麻素最低不得少于0.113 mg,考慮到生產(chǎn)中的損失，暫定本品每粒含天麻以天麻素(C20H22O9)計(jì)，不得少于0.10 mg。

3 小結(jié)

天麻主要含天麻素、香莢蘭醛、香莢蘭醇、琥珀酸、甙類、生物堿、黏液質(zhì)和天麻多糖等。具有平肝息風(fēng)止痙的功效；用于頭痛眩暈，肢體麻木，小兒驚風(fēng)，癲癇抽搐，破傷風(fēng)等方面有明顯的效果。參照《中國(guó)藥典》[1]2010年版一部天麻項(xiàng)下含量測(cè)定方法，采用反相高效液相色譜法測(cè)定天麻中天麻素的含量。以天麻素作為指標(biāo)性成分，控制天麻膠囊的內(nèi)在質(zhì)量，具有合理性，且方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010:97.