李作堂

（哈藥集團三精制藥諾捷有限責任公司，黑龍江 綏化 152000）

康兒靈顆粒由刺五加、白術(shù)(炒)、蓮子、六神曲(炒)、茯苓、麥芽(炒)、陳皮、枳殼(炒)、山楂(炒焦)、甘草(炙)、胡黃連、使君子組成，在臨床上具有益氣健脾，開胃消食。用于脾胃虛弱，食欲不振，消化不良，形體瘦弱。該質(zhì)量標準為衛(wèi)生部藥品標準，標準中無含量測定項，為了有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們擬對處方中的君藥進行含量測定，從而確保產(chǎn)品在臨床上的有效性。

1 材料

高效液相色譜儀：LC-10ATVP，日本導津制作所。

工作站：浙大2000。

甲醇：色譜純。

水：二次蒸餾水。

康兒靈顆粒：哈藥集團三精諾捷制藥有限公司；批號：060801、060802、060803

紫丁香苷：中國生物制品檢定所提供，批號：111574-200201

2 方法

2.1 色譜分析條件：

色譜柱：C18柱（250mm×6mm，5um）；

流動相：甲醇-水（用冰醋酸調(diào)pH值為3.0）（20：80）

流速：1.0ml/min

檢測波長：267nm

2.2 對照品溶液制備：取紫丁香苷適量，加甲醇溶解并定量稀釋成每1ml中含80ug的溶液。

2.3 檢測波長的確定：取紫丁香苷對照品溶液適量，在190～400nm波長范圍內(nèi)進行掃描結(jié)果對照品溶液在267nm波長處有最大吸收，因此確定檢測波長為267nm。

2.4 供試品溶液的制備：取樣品研細，稱取適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30 分鐘，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5 專屬性實驗：分別精密吸取上述供試品溶液、對照品溶液、陰性樣品溶液各20ul，在確定的色譜條件下，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖 1～3。

結(jié)果：樣品中干擾紫丁香苷測定的峰與紫丁香苷峰分離度良好，不干擾測定。

2.6 線性關(guān)系的考察：精密吸取上述對照品液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL 于 lOmL 量瓶中，加甲醇稀至刻度，按上述色譜條件，分別進樣20ul，測定其峰面積，并以峰面積A對對照品濃度作圖，其回歸方程為：A=5770.1×C+27401.3，r=0.9996。

結(jié)果表明，紫丁香苷在4～20μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 重復(fù)性試驗：取同一批供試品，分別照上述供試品溶液制備方法制備6份，測得其含量的平均值為標示量的4.82μg/g，SD為1.2%。

2.8 加樣回收率試驗：精密稱取已知含量的供試品顆粒劑適量(約相當于紫丁香苷12μg/g)9份，分別置25m L量瓶 中，分別精密加入對照品儲備液（80ug/ml）0.1、0.15、.0.21mL 各 3 份，按擬定的色譜條件進行測定，計算回收率，平均回收率為98.6%，RDS為1.3%。

2.9 穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一濃度供試品溶液于 0、2、4、8、24小時進樣測定，計算日內(nèi)誤差；于第二天進樣測定，計算日間誤差。結(jié)果表明：樣品穩(wěn)定性良好。峰面積基本穩(wěn)定。日內(nèi)測得結(jié)果的RDS為1.4%，日間測得結(jié)果的RSD為1.5%。

2.10 樣品測定：取3批制劑 (批號：060801，060802，060803) 按“2.4”項制備成供試品溶液，分別精密量取供試品液和對照品液(8ug/ml)各20進樣，記錄色譜圖，測量對照品和樣品的峰面積，按外標峰面積計算含量，3批樣品的含量見表1。

表1 三批樣品測得結(jié)果

3 討論：

3.1 色譜條件確定：我們先用流動相甲醇-水-冰醋酸（15：85：1.5）進行測定，結(jié)果紫丁香苷對照品峰的前沿峰較大，峰形不好，我們又對其流動相進行了調(diào)整，調(diào)整為：甲醇-水（用冰醋酸調(diào) pH 值為 3.0）（20：80）

3.2 供試品溶液制備篩選：對提取溶劑的篩選：在供試品的配制過程中，提取工藝是重要的一個環(huán)節(jié)，紫丁香苷屬于極性成分，溶于水及甲醇或乙醇，根據(jù)提取工藝可知經(jīng)過了水提醇沉，所以采用溶劑為不同濃度的甲醇進行提取溶劑的篩選。結(jié)果用甲醇提取收率最高，因此確定提取溶劑為甲醇。

[1]康兒靈顆粒質(zhì)量標準