周霞，馬云桐，徐瑞超，熊飛宇，馬慶，吳清華

威靈仙種子為毛茛科植物威靈仙（Clematis chinensis Osbeck）的成熟種子。威靈仙藥用部分為根及根莖；具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)的功效，主要用于治療風(fēng)濕痹痛，肢體麻木，筋脈拘攣，屈伸不利等癥[1]，是古今中醫(yī)臨床常用的祛風(fēng)濕止痛藥[2]。威靈仙藥材目前主要為野生來(lái)源，僅有少量引種栽培。且栽培生產(chǎn)中所使用的威靈仙藥材種子尚處于農(nóng)民自發(fā)生產(chǎn)或半原始的自然生長(zhǎng)、采集狀態(tài)，品種混亂。目前還沒(méi)有威靈仙種子萌發(fā)的研究報(bào)道，我們采用不同貯藏條件和試劑處理對(duì)威靈仙種子進(jìn)行萌發(fā)研究，初步探討不同試劑和貯藏條件對(duì)威靈仙種子萌發(fā)的影響，尋找適于威靈仙種子萌發(fā)的最佳條件，為威靈仙種子最佳萌發(fā)條件的確定提供參考，并為威靈仙引種栽培提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用威靈仙種子采自于四川省峨眉山市、青神縣等地，原植物經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)馬云桐副教授鑒定為威靈仙（Clematis chinensis Osbeck）的成熟種子，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)自然風(fēng)干裝入塑料瓶?jī)?nèi)以備用。

1.2 試驗(yàn)方法

采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)考察不同試劑和貯藏條件對(duì)威靈仙種子萌發(fā)的影響。

1.2.1 種子處理

①自來(lái)水處理（ck）將50粒種子浸入自來(lái)水中，室溫浸種6 h后，取出種子備用[3]。

1.2.2 不同貯藏條件

將室溫貯藏和低溫貯藏1個(gè)月的種子，分別浸入不同試劑中，室溫浸種一定時(shí)間后，用清水洗凈種子備用。

1.2.3 發(fā)芽床的制備

在培養(yǎng)皿底部放一層脫脂棉，脫脂棉上鋪一層濾紙，將不同處理后的種子均勻擺放到該層濾紙上，種子表面再覆蓋一層濾紙，加適量水，即得。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，4次重復(fù)，各處理每發(fā)芽床50粒，置于20℃恒溫箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)，考察不同試劑和貯藏條件對(duì)威靈仙種子萌發(fā)的影響。

1.3 觀察指標(biāo)

定時(shí)檢查培養(yǎng)皿內(nèi)濕度情況，保持其相應(yīng)濕度，當(dāng)有種子發(fā)芽（發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)為胚根突破種皮）時(shí)開(kāi)始記錄，每2～3天記錄一次種子發(fā)芽數(shù)，以發(fā)芽高峰出現(xiàn)的日期統(tǒng)計(jì)發(fā)芽勢(shì)，以連續(xù)5 d平均發(fā)芽率不足1%的日期統(tǒng)計(jì)總發(fā)芽率。并采用新復(fù)極差法（SSR）對(duì)低溫貯藏條件下威靈仙種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

不同處理方法對(duì)威靈仙種子萌發(fā)的影響結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同處理方法對(duì)威靈仙種子萌發(fā)的影響結(jié)果(x±S)

2.2 低溫貯藏種子的萌發(fā)過(guò)程

不同處理方法下的種子開(kāi)始發(fā)芽后，每5天的發(fā)芽數(shù)見(jiàn)圖1。

圖1 不同處理方法下種子開(kāi)始發(fā)芽后每5天發(fā)芽數(shù)

2.3 結(jié)果分析

濃硫酸處理后，威靈仙種子并未發(fā)芽，表明濃硫酸浸種處理抑制了威靈仙種子的萌發(fā)。

由表1可知，室溫貯藏與低溫貯藏比較，低溫貯藏的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)顯著高于室溫貯藏。低溫貯藏條件下，與ck比較，赤霉素處理、硝酸鉀處理、多菌靈處理、萘乙酸處理后的種子發(fā)芽率明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），而赤霉素處理后比硝酸鉀處理、萘乙酸處理后的種子發(fā)芽率明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。且赤霉素處理的種子發(fā)芽勢(shì)明顯高于其它各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。從圖1可知，赤霉素處理后，威靈仙種子較其它處理方法發(fā)芽時(shí)間早，周期短，高峰期集中，第45天到第60天，發(fā)芽率達(dá)64%。

實(shí)驗(yàn)表明，低溫貯藏條件下的種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)較高；低溫貯藏條件下，赤霉素處理后的種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)較高，分別為71.00%，56.50%。

3 討論

3.1 種子萌發(fā)是植物生存和繁衍的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，大量研究報(bào)道表明[7,8]外源激素處理能打破種子的休眠，提高種子的發(fā)芽率。許多研究認(rèn)為植物激素對(duì)種子休眠與萌發(fā)的調(diào)控起著重要作用，外源激素處理能促進(jìn)種子內(nèi)部產(chǎn)生生理生化變化而使休眠解除[9]。本試驗(yàn)中，低溫貯藏條件下的種子經(jīng)赤霉素處理后，威靈仙種子發(fā)芽時(shí)間早，周期短，高峰期集中。說(shuō)明低溫貯藏有利于促進(jìn)威靈仙種子萌發(fā)，而赤霉素處理是一種較為合適的促進(jìn)威靈仙種子萌發(fā)的外源激素處理方法。

3.2 因威靈仙種子種皮較厚，發(fā)芽所需時(shí)間較長(zhǎng)，所以選擇濃硫酸處理，以期能減弱種皮對(duì)種子的保護(hù)力度，使得發(fā)芽時(shí)間提前，周期縮短，但濃硫酸處理后的種子并未發(fā)芽，且霉?fàn)€現(xiàn)象嚴(yán)重，可能是因?yàn)楦邼舛鹊膹?qiáng)酸損傷了種子本身的生理活性，故而不適合用于威靈仙種子萌發(fā)前的預(yù)處理。本實(shí)驗(yàn)前期曾采用20℃光照培養(yǎng)和20℃暗培養(yǎng)進(jìn)行萌發(fā)環(huán)境對(duì)比，結(jié)果光培養(yǎng)較暗培養(yǎng)萌發(fā)時(shí)間滯后，所以采用20℃暗培養(yǎng)作為種子在各種激素處理后的萌發(fā)環(huán)境。

3.3 目前威靈仙市場(chǎng)需求量不斷增加[10]。而在自然條件下威靈仙種子萌發(fā)率低，出苗情況不理想，制約了引種栽培的步伐。威靈仙種子萌發(fā)特性研究是開(kāi)展引種栽培研究的基礎(chǔ)性工作，本實(shí)驗(yàn)僅探討了威靈仙種子萌發(fā)的貯藏條件和不同試劑影響因素。而對(duì)于威靈仙種子本身的特性如：是否具有休眠特性，是否具有春化現(xiàn)象，種皮較厚，是否會(huì)影響種子萌發(fā)等并未探討，還有待于進(jìn)一步研究。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:234.

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