復(fù)方林可霉素乳膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

林 宏，陳貴起

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300074)

復(fù)方林可霉素乳膏由鹽酸林可霉素、曲安縮松等藥物組成，臨床用于治療異位性皮炎，療效與復(fù)方氯霉素乳膏相同，且避免了氯霉素可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)。同時(shí)該藥也可用于治療濕疹、接觸性皮炎、神經(jīng)性皮炎和摩擦性苔癬樣疹等變態(tài)反應(yīng)性皮膚病[1]。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters高效液相色譜儀，配備600E型泵，486型可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，800工作站(美國(guó))；萬(wàn)分之一天平(德國(guó)Sartourius BP 110S)。

1.2試藥 鹽酸林可霉素(華北制藥集團(tuán)華欒有限公司，批號(hào)070720)，鹽酸林可霉素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)130432-200407，含量86.2%)，硼酸、磷酸，復(fù)方林可霉素乳膏(本院制劑室自制，批號(hào)0809071、0809072、0809073)。

2 方法和結(jié)果

2.1鑒別 在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間與鹽酸林可霉素對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致，且本品水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)[2]。

2.2鹽酸林可霉素含量測(cè)定

2.2.1色譜條件 色譜柱：Bondapak C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：0.05 mol/L硼酸溶液(磷酸調(diào)pH至6.0)-甲醇(5∶5)，流速0.7 ml/min，檢驗(yàn)波長(zhǎng)214 nm，進(jìn)樣量20 μl。

2.2.2溶液制備

2.2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的鹽酸林可霉素對(duì)照品500.0 mg，置于100 ml量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為5.0 mg/ml的鹽酸林可霉素對(duì)照品溶液。

2.2．2.2供試品溶液的制備 精密稱取本品2.0 g，置于25 ml三角燒瓶中，加甲醇15 ml，超聲使之溶解，置70 ℃水浴中加熱提取2次，每次3 min，放冷至室溫，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，置于冰浴中冷卻2 h，迅速過(guò)濾至50 ml量瓶中，定容至刻度，即為供試品溶液。

2.2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 “2.2.2.2”項(xiàng)下供試品不加入鹽酸林可霉素，其他按供試品溶液的方法制備即得。

2.2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣測(cè)定，鹽酸林可霉素的保留時(shí)間為 9.16 min，色譜圖見(jiàn)圖1。結(jié)果表明：供試品溶液在對(duì)照品溶液鹽酸林可霉素保留時(shí)間處有一色譜峰，而陰性對(duì)照溶液在該處未出現(xiàn)色譜峰，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

1.鹽酸林可霉素

2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精確量取鹽酸林可霉素對(duì)照品溶液適量，加流動(dòng)相于量瓶中稀釋定容成1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 mg/ml的系列對(duì)照品溶液。各吸取20 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖。以鹽酸林可霉素的濃度(X)與吸收峰高(Y)作線性回歸，得回歸方程：Y=1.058×106X-0.528 5×105(r=0.991 6)，鹽酸林可霉素在1.0～3.0 mg/ml濃度范圍內(nèi)峰高與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5精密度試驗(yàn) 取5.0 mg/ml的鹽酸林可霉素對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定吸收峰面積，RSD為0.4%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品(批號(hào)0809071 )制備成供試品溶液，分別于0、2、4、8、12和24 h測(cè)定各自鹽酸林可霉素的吸收峰面積，RSD為0.42%，表明供試品溶液在制備24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液5份，測(cè)定鹽酸林可霉素含量，RSD為1.82%，符合規(guī)定。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

2.2．8回收率試驗(yàn) 制備不含鹽酸林可霉素的空白乳膏，稱取空白藥膏1.0 g，按處方量的80%、100%、120%分別加入對(duì)照品溶液4、5、6 ml各3份，按“2.2.2.2”項(xiàng)下處理后進(jìn)樣，峰面積與等濃度對(duì)照品溶液相比，計(jì)算回收率，平均回收率101.58%，RSD為1.29%。

2．2.9樣品含量測(cè)定 取“2.2.2.2”項(xiàng)下制備的樣品溶液，再以“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，以回歸方程計(jì)算鹽酸林可霉素含量，見(jiàn)表1。

2.2.10樣品穩(wěn)定性試驗(yàn) 將3批樣品(批號(hào)0809071、0809072、0809073)于室溫條件下保存15個(gè)月，分別在第2、4、8、12和15個(gè)月月末取樣進(jìn)行穩(wěn)定性重點(diǎn)考查項(xiàng)目檢測(cè)[3]?？疾榻Y(jié)果顯示：與0月相比，鹽酸林可霉素的含量無(wú)顯著變化，在第12個(gè)月時(shí)，顏色有點(diǎn)變深(結(jié)果見(jiàn)表2)。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

3 討論

3.1測(cè)定波長(zhǎng)的考查 取鹽酸林可霉素對(duì)照品溶液在200～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描測(cè)定，結(jié)果在214 nm處有較大吸收峰，故選擇214 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)[3]。

4.2樣品的處理方法 本品為乳膏制劑，直接進(jìn)樣會(huì)堵塞液相柱，因此樣品的處理非常重要。通過(guò)試驗(yàn)比較(選擇甲醇、流動(dòng)相、硼酸緩沖液分別提取樣品)，以甲醇提取的樣品回收率最好(三種溶劑提取樣品的平均回收率依次為100.9%、92.5%、97.2%)，最終選擇甲醇為提取溶劑。采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中的鹽酸林可霉素的含量，具有色譜分離理想，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，特異性強(qiáng)，精密，準(zhǔn)確，回收率高等特點(diǎn)[4，5]。

3.3留樣觀察試驗(yàn) 本品室溫常規(guī)條件下放置15個(gè)月，鹽酸林可霉素的含量基本未變，在第12個(gè)月時(shí)外觀顏色稍變深，質(zhì)量基本穩(wěn)定。

1 陳新謙，新編藥物學(xué).第16版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：94，626

2 中國(guó)藥典.二部.2005：531

3 舒冰，方焱.1%鹽酸林可霉素乳膏的制備及質(zhì)量控制.中國(guó)藥師，2008，11(9)：1047

4 樸淑娟，張純.HPLC法測(cè)定林可霉素乳膏中鹽酸林可霉素含量.藥學(xué)實(shí)踐雜志，2008，26(5)：357

5 李寧宇.鹽酸林可霉素滴眼液含量測(cè)定方法的改進(jìn).中國(guó)藥師，2007，10(6)：568