張勝東

湖北省鄖縣人民醫(yī)院藥劑科，湖北鄖縣 442500

鹽酸多巴酚丁胺注射液為一種擬交感胺類強(qiáng)心藥物，主要用于心力衰竭的治療[1]。大部分的生產(chǎn)企業(yè)在處方中加入了抗氧劑亞硫酸氫鈉（NaHSO3），金屬離子絡(luò)合劑依地酸二鈉（EDTA-Na2）。但是亞硫酸氫鈉可引起過敏反應(yīng)，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡[2]。對亞硫酸氫鈉在注射劑中加入量進(jìn)行檢測和控制，是加強(qiáng)藥品質(zhì)量監(jiān)管，提高鹽酸多巴酚丁胺注射液用藥安全的重要手段。筆者參考文獻(xiàn)[3-5]，根據(jù)亞硫酸氫根在溶液中易分解出二氧化硫，二氧化硫的強(qiáng)氧化性具有漂白作用，可使酸性品紅褪色，據(jù)此原理建立鹽酸多巴酚丁胺注射液中亞硫酸氫鈉的含量測定方法，并獲得了滿意效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器

分析天平（AG135型，梅斯特-托利多）；電子天平（JI300型，常熟雙杰測試儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（SY11N-NIB型，北京長源實(shí)驗(yàn)儀器廠）；紫外可見光分光光度計(jì)（753-WB型，上海光學(xué)儀器廠）。

1.2 材料

鹽酸多巴酚丁胺（上海紫源制藥有限公司，20081201）；亞硫酸氫鈉（AR，天津開發(fā)區(qū)海光化學(xué)制藥廠，20030602）；依地酸二鈉（AR，天津大茂化學(xué)試劑廠，20050403）；酸性品紅（AR，天津大茂化學(xué)試劑廠，20040301）。

1.3 方法

1.3.1 溶液的制備 酸性品紅溶液：取酸性品紅0.2 g，精密穩(wěn)定，置500 mL容量瓶中，加稀硫酸2 mL，加水稀釋至刻度（pH=2.2 ～ 2.3），1 mL 含酸性品 400 μg。

1.3.2 乙酸鹽緩沖液 取乙酸鹽40.8 g，加EDTA-Na20.8 g，置2000 mL容量瓶中，加冰乙酸16 mL溶解后，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH=3.3～3.5，加水稀釋至刻度。

1.3.3 亞硫酸氫鈉對照液 取亞硫酸氫鈉1.57 g，精密稱定，置250 mL容量瓶中，用乙酸鹽緩沖液，稀釋至刻度，再精密量取2 mL，置250 mL容量瓶中，用乙酸鹽緩沖液，稀釋至刻度（含亞硫酸氫鈉50 μg/mL）。

1.3.4 供試品溶液 取鹽酸多巴酚丁胺2.5 g，EDTA-Na 20.1 g，亞硫酸氫鈉0.25 g，亞硫酸氫鈉精密稱定（252.50 mg），置250 mL容量瓶中，加水200 mL，用0.1 moL鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.5，再加水稀釋至刻度即得（含亞硫酸氫鈉1.01 mg/mL）[6]。

2 檢測方法與結(jié)果

2.1 測定波長的選擇

取亞硫酸氫鈉溶液2.0 mL，加酸性品紅溶液2.0 mL置25 mL比色管中，加乙酸緩沖液至25 mL，蓋上管塞，搖勻，室溫放置30 min后，在200～800 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果亞硫酸氫鈉與酸性品紅反應(yīng)生成的復(fù)物在545 nm的波長處有最大吸收峰，故選545 nm為測定波長。

2.2 干擾性試驗(yàn)

按照1%的鹽酸多巴酚丁胺注射液的處方，除不加入亞硫氫鈉外，制得鹽酸多巴酚丁胺溶液，取該溶液2 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品紅溶液5 mL，用乙酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，搖勻即得。另取注射用水2 mL，同法制得空白對照溶液。室溫放置30 min后，在545 nm處測定吸光度。結(jié)果表明，鹽酸多巴酚丁胺注射液中主藥及其他輔料對本試驗(yàn)測定結(jié)果無干擾。

2.3 試驗(yàn)條件考察

①反應(yīng)溫度及時間的選擇：根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，精密量取亞硫酸氫鈉對照溶液3份，每份5 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品紅溶液5 mL，用乙酸鹽稀釋至刻度，得到每毫升含亞硫酸氫鈉2.5 μg的對照品測試溶液，分別將該溶液置于25℃、30℃、35℃、40℃、45℃恒溫水浴中，于 10、20、30、60、120 min，取樣冷卻至室溫后測定吸光度，結(jié)果表明，在45℃水浴中保溫20 min后，545 mm處的吸光度就達(dá)到穩(wěn)定。因此選擇在45℃水浴中保溫20 min作為反應(yīng)條件。②酸性品紅加入量及pH值的選擇：精密量取亞硫酸氫鈉對照溶液5份，每份10 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品紅溶液5 mL，分別用pH值為2.5、2.8、3.3、3.5、3.8的乙酸緩沖液稀釋至刻度，在45℃水浴中保溫20 min，冷卻至室溫，在545 mm處的吸光度。結(jié)果表明，當(dāng)pH值在2.5～3.8時，測試溶液的吸光度均在0.3～0.7內(nèi)，但在3.3～3.5時，該濃度的亞硫酸氫鈉－酸性品紅溶液的吸光度最接近中間值，考慮線性范圍問題，將待測溶液的pH值范圍定為3.3～3.5，酸性品紅濃度以20 μg/mL為宜。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取亞硫酸氫鈉對照溶液 0、1、2、5、10、15、20 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品紅溶液5 mL，用乙酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，得到每毫升含亞硫酸氫鈉 0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 μg的對照品測試溶液，將該溶液置45℃水浴中保溫20 min，再冷卻至室溫，于545 nm波長處測定吸度。以吸光度倒數(shù)值為縱坐標(biāo)（Y）、質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。見圖 1?；貧w方程：Y=0.10701X+1.80763；r=0.9996（n=5）。結(jié)果表明亞硫酸氫鈉濃度在1.0～10.0 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度倒數(shù)值線性關(guān)系良好。見表1。

圖1 亞硫酸氫鈉濃度與吸光度倒數(shù)值線性關(guān)系

表1 亞硫酸氫鈉濃度-吸光度倒數(shù)值線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取供試品溶液25 mL，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，取稀釋后供試品1 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品紅溶液5 mL，用乙酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，得到每毫升含亞硫酸氫鈉2.5 μg測試溶液，將該溶液置45℃水浴中保溫 20 min，再冷卻至室溫，分別在 0、30、60、90、120 min 時，在545 nm處測定吸光度。結(jié)果表明：在120 min內(nèi)溶液的吸光度是穩(wěn)定的（RSD=0.1733%，n=5）。見表2。

表2 亞硫酸氫鈉－酸性品紅溶液吸光度穩(wěn)定性試驗(yàn)檢測結(jié)果

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密量取供試品溶液25 mL，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，取稀釋后供試品1 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品紅溶液5 mL，用乙酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，得到每毫升含亞硫酸氫鈉2.5 μg測試溶液，將該溶液置45 ℃水浴中保溫20 min，再冷卻至室溫，分成6等份，在545 nm處測定每一份吸光度，結(jié)果表明，重現(xiàn)良好，其RSD為0.1738%（n=6）。見表3。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

稱取鹽酸多巴酚丁胺9份，每份0.5 g，EDTA-Na29份，每份20 mg，再分別取亞硫酸氫鈉20 mg 3份，25 mg 3份，30 mg 3份，將9份亞硫酸氫鈉精密稱定。先將EDTA-Na2置500 mL容量瓶中，加水400 mL，使溶，再依次加入亞硫酸氫鈉，使溶解并搖勻，鹽酸多巴酚丁胺使溶解并搖勻，用0.1 mol鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.5，加水稀釋至刻度，搖勻，共制得9份亞硫酸氫鈉不同含量梯度的鹽酸多巴酚丁胺溶液，再每份取5 mL，置100 mL容量瓶中，每份加入酸性品紅溶液5 mL，用乙酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，將該溶液置45℃水浴中保溫20 min，再冷卻至室溫，在545 nm處各測定3次吸光度，并根據(jù)線性方程（Y=0.10701X+1.80763）計(jì)算亞硫酸氫鈉的含量，平均回收率：99.49%；RSD=1.3305%（n=9）。見表4。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度符合要求。

表3 亞硫酸氫鈉-酸性品紅溶液吸光度重現(xiàn)性試驗(yàn)測定數(shù)據(jù)

表4 亞硫酸氫鈉含量測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測定

精密量取供試品溶液2 mL共3份，分別置500 mL容量瓶中，加入酸性品紅溶液25 mL，用乙酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，得到每毫升含亞硫酸氫鈉4.0 μg測試溶液，將該溶液置45℃水浴中保溫20 min，再冷卻至室溫，在545 nm處測定吸光度，代入線性方程Y=0.10701X+1.80763，計(jì)算含量，平均值為98.84%。見表5。

表5 供試品溶液亞硫酸氫鈉含量測定結(jié)果

3 討論

分光光度法簡便易行，不受條件限制，且準(zhǔn)確度和靈敏度較高，可用于對鹽酸多巴酚胺注射液中亞硫酸酸氫鈉的含量控制，但是該方法的待測溶液的pH值對吸光度測定值有較大的影響，反應(yīng)溫度、檢測時室溫和光線對吸光度的測定結(jié)果也有一定的影響，所以，建立似合曲線的對照品測試溶液和供試品測試溶液的稀釋，應(yīng)用pH值相同的乙酸鹽緩沖液稀釋，反應(yīng)溫度、時間、檢測時室內(nèi)條件（如室溫、光線強(qiáng)度）均應(yīng)一致；另外亞酸氫鈉與酸性品紅在恒溫條件反應(yīng)時，容器應(yīng)密閉，不宜強(qiáng)烈振搖；測定吸光度時，應(yīng)保持檢測室內(nèi)的溫度和光線相對穩(wěn)定（室內(nèi)光線較暗為宜）。

[1] 國家藥典委員會.臨床用藥須知[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：234.

[2] 敬松.注射劑附加劑潛在的不良反應(yīng)[N].中國醫(yī)藥報(bào)，2001-5-29（7版）.

[3] 吳小曼，紀(jì)寧.分光光度法測定復(fù)方氨基酸注射液（18AA-1）中焦亞硫酸鈉的含量 [J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007，8（5）：38-40.

[4] 姚克榮，徐連連.影響復(fù)方氨基酸注射液中焦亞硫酸鈉含量測定的因素[J].中國生化藥物雜志，1997，18（3）：132-134.

[5] 國家藥典委員會.鹽酸多巴酚丁胺注射液[M].中華人民共和國藥典（二部）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：501.