吳 茵 高 海 西安市新城區(qū)中醫(yī)院(西安 710001)

常松八味沉香膠囊為民族藥的復(fù)方中藥制劑,由紅花、沉香、廣棗、檀香、降香、肉豆蔻、天竺黃、萊菔等藥材組成。具有清心安神,行氣降壓。用于氣血不調(diào),胸悶氣促,胸背疼痛,高血壓,心血管疾病,用于冠心病、心律失常 。臨床用于治療心肌缺血、心絞痛、心肌梗死、風(fēng)濕性心臟病、動(dòng)脈硬化、高血脂、更年期綜合征等。為了有效控制其質(zhì)量,對(duì)處方中紅花的主要成分羥基紅花黃色素 A進(jìn)行含量測(cè)定的研究?，F(xiàn)報(bào)道如下:

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀(日本日立公司)。N2010型色譜工作站,BS110S型分析天平(德國(guó)賽多利斯公司)。 UV7502-PC紫外分光光度儀(上海產(chǎn))。

1.2 試藥 羥基紅花黃色素 A對(duì)照品(批號(hào)111637-200301,供含量測(cè)定用),甲醇、乙腈為色譜純,進(jìn)口分裝,其余所用試劑均為分析純。常松八味沉香膠囊樣品均為自制品(每粒 0.5g),批號(hào)分別為 090301、090302、 090303。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 用十八烷基鍵合硅膠為填充劑;甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液 (26∶2∶ 72)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng) 403nm;柱溫 30℃;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000。

2.2 對(duì)照品與供試品溶液的制備 取羥基紅花黃色素 A對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,加甲醇制成每 1mL含 48.40 μ g的溶液,作為對(duì)照品溶液。取本品研細(xì)粉末1.0g,精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入 25%甲醇25mL,稱(chēng)定重量,超聲處理 (功率 300W,頻率 50kHz)20、 30、 40、 50、 60min,放冷 ,再稱(chēng)定重量 ,用 25% 甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,作為供試品溶液。取缺紅花的陰性對(duì)照樣品同法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 波長(zhǎng)選擇:取對(duì)照品,加 25%甲醇制成每1mL含 10 μ g的溶液,作為對(duì)照品溶液。照分光光度法(中國(guó)藥典 2005年版一部附錄 V A)試驗(yàn),結(jié)果羥基紅花黃色素 A對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng)為 403nm。

2.3.2 干擾性試驗(yàn):取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照樣品溶液各 10 μL,在上述色譜條件下進(jìn)樣,記錄色譜圖,結(jié)果在羥基紅花黃色素 A對(duì)照品色譜峰的相應(yīng)位置上,供試品有色譜峰被檢出,而空白樣品無(wú)色譜峰被檢出。表明以 HPLC法進(jìn)行測(cè)定,在上述色譜條件下,其余藥材中的成分對(duì)羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定不會(huì)產(chǎn)生干擾。見(jiàn)圖 1。

2.3.3 線性關(guān)系考察:取羥基紅花黃色素 A對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,加 25%甲醇制成每 1mL含 48.40 μ g的溶液,作為對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液4、8、12、 16、20 μL,進(jìn)樣測(cè)定 ,以羥基紅花黃色素 A的進(jìn)樣量(μ g)作為橫坐標(biāo)(X),以羥基紅花黃色素 A峰面積積分值作為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸分析,得回歸方程為 Y= 0.000041 X+1.730318,相關(guān)系數(shù) r=0.9996。說(shuō)明羥基紅花黃色素 A的進(jìn)樣量在 0.1936～0.9680 μ g之間有良好的線性關(guān)系。

2.3.4 精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液,在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣 5次,記錄色譜圖及峰面積積分值,以羥基紅花黃色素 A峰面積積分值進(jìn)行考察,結(jié)果 5次進(jìn)樣峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD為 0.11%。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)的樣品,共 5份,照上述供試品制備項(xiàng)下的方法制備供試品溶液,分別取供試品及對(duì)照品溶液各 10 μL,在上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果 RSD為 1.17%。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn):取供試品溶液,在上述色譜條件下每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次,記錄峰面積積分值,經(jīng)供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明,樣品溶液在 12h內(nèi)是穩(wěn)定的,RSD為 1.13%。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn):精密稱(chēng)取已知含量的樣品(共 9份),分別精密加入羥基紅花黃色素 A對(duì)照品溶液適量(折算為羥基紅花黃色素 A),照供試品溶液的制備的方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖及峰面積積分值,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)附表。

2.3.8 含量測(cè)定:按擬定的色譜條件及供試品溶液的制備方法對(duì)本品進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果批號(hào)為090301、090302、090303樣品中含羥基紅花黃色素 A分別為每粒 0.47、 0.36、0.38mg(n=3)。

附表 樣品的回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

3.1 經(jīng)對(duì)本品含量測(cè)定的方法學(xué)考察結(jié)果顯示準(zhǔn)確度好、精密度高、方法可行、數(shù)據(jù)可靠,可作為該制劑的質(zhì)量控制。

3.2 本處方藥味的成分復(fù)雜,可作為含量測(cè)定指標(biāo)的成分少,根據(jù)各藥材的理化性質(zhì),以方中紅花的主要有效成分羥基紅花黃色素 A作為含量測(cè)定的指標(biāo)是合理的。

[1]國(guó)家藥典會(huì).中國(guó)藥典 2005年版 [S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:31.

[2]國(guó)家藥典會(huì).中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2005年版(SO P).北京:化學(xué)工業(yè)出版社.

[3]朱光怡,高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方紅花滴丸中羥基紅花黃色素 A的含量 [J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2008,31(4):19-20.