李國(guó)琴，唐文文，晉小軍

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，蘭州 730070）

菊芋（Helianthus tuberosus L.）俗稱洋姜、鬼子姜，為菊科（Compositae）向日葵屬多年生草本植物。自然界含有菊糖（又稱菊粉，系多聚果糖）的36000種植物中，以菊芋和菊苣塊莖的菊糖含量最高[1]。除此之外，菊芋還含有一定數(shù)量的蛋白質(zhì)、果膠、有機(jī)酸、纖維素及其他成分，菊糖已成為國(guó)內(nèi)外高度重視的功能性食品添加劑[2-3]，菊芋中菊粉能增殖腸道內(nèi)的雙歧桿菌，預(yù)防腸道感染；控制血脂，減少心血管疾病的危害；降低血氨的濃度；促進(jìn)礦物質(zhì)的吸收；防治便秘，適宜于糖尿病人。菊糖（Inulin）是由D-呋喃果糖經(jīng)β-（2-1）-糖苷鍵聚合而成的果聚糖，呈直鏈結(jié)構(gòu)，末端再以α-（l-2）糖苷鍵連接一分子葡萄糖基，多糖分子約含30～50個(gè)果糖殘基，聚合度通常為2～60，平均聚合度為10，水解后生成果糖和少量葡萄糖。

本實(shí)驗(yàn)用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定了不同品系的菊芋中菊糖的含量。其中，以蒽酮-硫酸法顯色測(cè)定總多糖，以DNS法顯色測(cè)定還原糖[4-5]。

1 材料與方法

1.1 材料

菊芋：品系 R3，R4，B1，B5，B8，采自蘭州秦王川鹽堿地。 將菊芋清洗，切開(kāi)置沸水浴燙 5 min（滅 PPO 酶）后，切絲，在80℃烘干至恒重，用植物粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，備用。

1.2 儀器設(shè)備與試劑

1.2.1 儀器設(shè)備 UV-2100雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本，島津）；LDZ4-0.8低速自動(dòng)平衡微型離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）；恒溫水浴箱（上海申光儀器儀表有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)式真空泵；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；高速植物粉碎機(jī)6202（北京環(huán)亞天元機(jī)械技術(shù)有限公司），23000 r/min；萬(wàn)分之一電子天平（BD224S型，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2.2 試劑 3，5-二硝基水楊酸（簡(jiǎn)稱DNS試劑），熟石灰，蒽酮，酒石酸鉀鈉，氯仿，正丁醇，無(wú)水乙醇，磷酸，亞硫酸鈉，濃硫酸等，試劑均為分析純。自制的二次蒸餾水。

蒽酮試劑：稱取0.20 g蒽酮溶于100.0 mL濃硫酸。DNS試劑：將3.15 g DNS和131.0 mL 2 mol/L的NaOH加入到250 mL含92.5 g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加2.5 g酚和2.5 g亞硫酸鈉，冷卻后加蒸餾水定容至 500.0 mL。Sevag試劑：氯仿∶正丁醇=5∶1（體積比）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 菊芋多糖的提取 稱取5種菊芋樣品各3份，每份30.00 g置于500 mL的燒瓶中，各加400 mL蒸餾水，于恒溫水浴箱80℃浸提90min，過(guò)濾，收集濾液。濾渣重復(fù)提取2次，每次加水350 mL，過(guò)濾，合并3次濾液，減壓濃縮至適當(dāng)體積即粗多糖溶液。

1.3.2 菊芋多糖的純化 在上述多糖溶液中加石灰乳調(diào)pH≈11.0，置80℃水浴中保溫1h[6]，減壓過(guò)濾，棄去沉淀。濾液用磷酸調(diào)pH至8.0，于4000 r/min離心10 min，棄去沉淀。在上清液中加入Sevag試劑脫蛋白3次[7]，收集的菊芋多糖溶液，加入適量活性炭脫色后，得到較純的多糖溶液。

將多糖溶液用3倍體積95%乙醇沉淀出多糖[8]，離心分離，回收乙醇。收集的菊芋多糖，用蒸餾水定容至50.0 mL，備用。

1.3.3 菊芋中菊糖的測(cè)定 ⑴總多糖含量的測(cè)定：取1.0 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mL于7個(gè)50 mL容量瓶，用蒸餾水定容，迅速置于冰浴中。再分別取葡萄糖系列溶液2.00 mL于7個(gè)試管中，再取2.00 mL蒸餾水于另一試管（參比溶液），各管中分別加入4.00 mL蒽酮試劑后，同時(shí)放到沸水浴中，加熱7 min，立即取出置于冰浴中，迅速冷卻，然后從冰浴中取出各試管放置至室溫，用UV-2100雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)掃描葡萄糖溶液顯色后的吸收光譜，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度[9]。

分別吸取“1.3.2”中各菊芋多糖溶液1.00 mL于100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100.0 mL，再分別吸取1.00mL定容至10.0mL。依次吸取各溶液1.00mL放入20個(gè)10mL容量瓶，再分別加入4.00 mL蒽酮試劑后用蒸餾水定容至10.0 mL，反應(yīng)條件同上述葡萄糖溶液的顯色。在最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。

c-菊芋總糖的測(cè)定濃度，單位：mg/mL；m樣-菊芋的質(zhì)量，單位：g。

⑵還原糖含量的測(cè)定：取 10.0mg/mL 的葡萄糖溶液 2.00、4.00、6.00、8.00、10.00、12.00、14.00 mL 分別于7個(gè)50mL容量瓶中并定容。再分別取不同濃度的葡萄糖溶液各5.00 mL于7個(gè)10 mL容量瓶中，另取5.00 mL蒸餾水于另一10 mL容量瓶中（參比溶液），分別加入DNS試劑2.00 mL，混勻后，同時(shí)放入沸水浴中加熱5 min，取出置冰浴中迅速冷卻，定容至10.0 mL。用UV-2100雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)掃描葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液顯色后的吸收光譜[10]，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。

分別取“1.3.2”中各菊芋多糖溶液5.00 mL，用二次蒸餾水定容至50.0 mL，混勻，再各取1.00mL于10 mL容量瓶中，并分別加入DNS試劑2.00mL，混勻后同時(shí)放入沸水浴中加熱5 min，取出后置冰浴中迅速冷卻并定容至10.0 mL，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度。

c-菊芋中還原糖的測(cè)定濃度，單位：mg/mL；m樣-菊芋的質(zhì)量，單位：g。

⑶菊糖含量：菊芋中菊糖的含量計(jì)算關(guān)系式為：W菊糖（%）=W總糖（%）-W還原糖（%）

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液顯色后的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.1 蒽酮-硫酸法 由葡萄糖溶液顯色后的吸收光譜知，λmax=500 nm。于500 nm處測(cè)得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度得標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1，回歸方程為：y=62.981x-0.0514，相關(guān)系數(shù)r=0.9835。

2.1.2 DNS法 由葡萄糖溶液顯色后的吸收光譜知，λmax=490 nm。于490 nm處測(cè)得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度得標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2，回歸方程為：y=1.7543x+0.0563，相關(guān)系數(shù)r=0.9906。

圖1 測(cè)定總糖含量的葡萄糖溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 測(cè)定還原糖的葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 不同品系菊芋中多糖、還原糖和菊糖的含量

不同品系菊芋中總多糖的含量R4的最高（見(jiàn)表1），達(dá)18.11%，與其他品系存在極顯著差異；R3次之，為13.10%；品系B1、B5、B8皆較低，其中B1最低，僅為9.99%，比品系R4低了近8個(gè)百分點(diǎn)。菊芋中還原性多糖的含量較低，只有R3含量比較高，為3.11%，與其他品系比較差異極顯著。

菊芋中含有豐富的菊糖，各品系菊糖的含量為R4＞B5＞R3＞B8＞B1，其中，品系R4中菊糖的含量最高，達(dá)16.78%，與其他品系之間差異極顯著，B1與品系B5、R3、B8差異顯著，R4的產(chǎn)量在5個(gè)品系里排第二位[11]，B1的產(chǎn)量雖然高，但其中的菊糖含量最低，僅為8.37%。

3 小結(jié)

表1 不同菊芋品系產(chǎn)量及糖含量

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：測(cè)定的5個(gè)不同菊芋品系中菊糖的含量為8.37%～16.78%，品系間差異極顯著，各品系菊糖的含量為 R4＞B5＞R3＞B8＞B1。

菊糖作為一種新興的食品配料，具有安全無(wú)毒并能顯著改善食品風(fēng)味品質(zhì)及促進(jìn)人體健康的優(yōu)勢(shì)，具有一定的使用價(jià)值和開(kāi)發(fā)前景。

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