夏 天,石力夫,胡晉紅(第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部,上海 200433)

東莨菪堿(scopolamine)是從顛茄(Atropa belladonna L.)、曼佗羅(Datura stramonium L.)及莨菪(Hyoscyamusniger L.)等茄科植物中提取分離的一種托品烷類生物堿,具有廣泛的生理活性,為一種典型的M受體阻斷劑,同時(shí)具有興奮呼吸中樞的作用,臨床主要用于全身麻醉前給藥、鎮(zhèn)靜、止吐,對(duì)暈動(dòng)癥也有效[1,2]。目前,市場(chǎng)上有東莨菪堿片劑、注射劑、貼劑、膠囊劑等劑型,新的劑型和制劑如微囊,緩釋、控釋制劑將投放市場(chǎng)。為了不斷完善現(xiàn)有劑型質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),并使之適應(yīng)新劑型測(cè)定的要求,本文對(duì)東莨菪堿及其制劑的含量測(cè)定方法進(jìn)行綜述,以供參考。

1 紫外分光光度法

東莨菪堿分子結(jié)構(gòu)中具有酯結(jié)構(gòu),對(duì)紫外光有較強(qiáng)的特征吸收,所以可以采用紫外分光光度法對(duì)東莨菪堿進(jìn)行含量測(cè)定。張俊峰等[3]用紫外分光光度法測(cè)定了氫溴酸東莨菪堿注射液的含量,選擇258 nm為測(cè)定波長(zhǎng),在0.2～1.2 mg/ml范圍內(nèi),氫溴酸東莨菪堿的濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系,平均回收率為99.9%,RSD為0.4%。該法使用的儀器較為常見,操作方便。

2 薄層色譜法

薄層掃描法具有進(jìn)樣量少,操作簡(jiǎn)便,分離效果好等優(yōu)點(diǎn)。閆凱俠等[4]采用薄層-比色法,用硅膠G板,以乙酸乙酯-甲醇-濃氨水(17∶2∶1)為展開劑,以碘化鉍鉀溶液為顯色劑,選用721A型分光光度計(jì)在415 nm處測(cè)定增率片中東莨菪堿的含量。此法對(duì)儀器的精密性要求不高,并具有分離好、專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。

馬長(zhǎng)清等[5]用薄層掃描法測(cè)定復(fù)方洋金花擦劑中氫溴酸東莨菪堿的含量,采用羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)為黏合劑的硅膠G板,展開劑為氯仿-甲醇-氨水(9∶1∶0.05),顯色劑為改良碘化鉍鉀溶液。根據(jù)吸收光譜圖,選用495 nm為樣品波長(zhǎng),610 nm為參比波長(zhǎng),結(jié)果東莨菪堿在5～25 μ g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.997 8),平均加樣回收率為97.1%。樣品的分離和含量測(cè)定結(jié)果都較滿意,精密度和回收率實(shí)驗(yàn)均表明該方法實(shí)用,結(jié)果可靠,適用于常規(guī)分析,但其薄層顯色劑用量難以準(zhǔn)確控制,人為誤差較大。

牛麗穎等[6]以薄層色譜法(雙波長(zhǎng)反射法鋸齒型掃描)測(cè)定洋金花中東莨菪堿的含量,以乙酸乙酯-甲醇-濃氨水(17∶2∶1)為展開劑,將待測(cè)液在厚0.3 mm的硅膠G板展開,在測(cè)定波長(zhǎng)505 nm、參比波長(zhǎng)600 nm下進(jìn)行掃描。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好。

3 HPLC法

2010 版《中華人民共和國(guó)藥典》采用HPLC法測(cè)定東莨菪堿含量,用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.25%十二烷基硫酸鈉溶液(sodium lauryl sulphate,SLS,用硫酸調(diào)節(jié) pH值至 2.5)-乙腈(60∶40)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm。

目前已有大量文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC法測(cè)定制劑中的東莨菪堿含量。如鄭莉莉[7]用HPLC法測(cè)定金牛膠囊中東莨菪堿的含量。該法使用的色譜柱為 Hypersil ODS2(250 mm ×4.6 mm,5 μ m),流動(dòng)相為乙腈-0.04 mol/L磷酸鈉溶液(含0.01 mol/L SLS,用磷酸調(diào) pH至 6.0)(50∶100),流速為1.0 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為 216 nm。東莨菪堿在0.01946～0.583 8 μ g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9),平均回收率為99.08%,RSD為4.17%。該法快速、簡(jiǎn)便,精密度好,靈敏度高。

周益芬等[8]用HPLC法測(cè)定氫溴酸東莨菪堿的含量和有關(guān)物質(zhì)。使用 Inertsil C8色譜柱(150 mm ×4.6 mm,5 μ m),流動(dòng)相為乙腈-0.25%SLS溶液(用磷酸調(diào)pH至2.5)(4∶6),檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm。結(jié)果氫溴酸東莨菪堿進(jìn)樣量在0.8～12.4 μ g與峰面積的線性關(guān)系良好(r=0.999 9);最低檢測(cè)限為1.875 ng;最低定量限為6.008 ng。單一最大雜質(zhì)含量為0.02%,有關(guān)物質(zhì)總量為0.03%～0.07%。該法與目前藥典收載的滴定法相比,專屬性強(qiáng),準(zhǔn)確度和精密度均好,操作簡(jiǎn)便且相對(duì)環(huán)保。

劉建華等[9]用HPLC法測(cè)定止喘靈注射液中東莨菪堿的含量,采用Spherisorb-C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μ m),柱溫 25 ℃,流動(dòng)相 :甲醇-水(78 ∶22),含0.005%SLS,流速 1.0 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。結(jié)果線性范圍為0.6～4.2 μ g,回歸方程為:Y=173 305 X+2 108(r=0.997 8)。平均回收率為98.94%,RSD為 1.03%。此法快速、靈敏、重現(xiàn)性好,能滿足止喘靈注射液中東莨菪堿含量測(cè)定的要求。

Ceyhan等[10]以LC法測(cè)定藥物中硫酸阿托品和氫溴酸東莨菪堿的含量。采用μ Bondapack C18色譜柱(300 mm×3.9 mm,10 μ m),流動(dòng)相為甲醇∶水∶甲酸(165∶35∶1)(用三乙胺調(diào)節(jié) pH至8.3),采用梯度洗脫法進(jìn)行分離,流速:1.0 ml/min,采用光電二極管陣列檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。結(jié)果硫酸阿托品和氫溴酸東莨菪堿濃度分別在10.38～ 1038 μ g/ml和 10.00 ～ 1034 μ g/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,該法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單,重現(xiàn)性和靈敏度好。

易艷東等[11]用 RP-HPLC法測(cè)定金辛鎮(zhèn)痛噴霧劑中氫溴酸東茛菪堿和硫酸阿托品的含量。使用Agilent Zorbax C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μ m),以乙腈-0.07 mol/L 磷酸鈉溶液(含0.40%三乙胺,17.50 mmol/L SLS,用磷酸調(diào)pH至6.0)(42∶58)為流動(dòng)相,流速:0.8 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng):215 nm,柱溫:40℃。結(jié)果氫溴酸東莨菪堿在1.00～5.00 μ g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好,r=0.999 9(n=5),平均回收率為 98.35%,RSD為1.68%(n=6);硫酸阿托品在2.94～14.70 μ g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,r=0.999 7(n=6),平均回收率為97.71%,RSD為1.91%(n=6)。本法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確,靈敏度高,重復(fù)性好。

李曉燕等[12]使用HPLC法測(cè)定喘平滴丸中東莨菪堿的含量。采用Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μ m)為色譜柱,以甲醇-0.001 mol/L 磷酸(70∶30)(流動(dòng)相含0.02 mol/L SLS)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為216 nm,流速:1.0 ml/min,外標(biāo)法定量。結(jié)果東莨菪堿在0.028 5～0.285 μ g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,方法回收率為98.86%(n=6),RSD為2.54%。該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,重復(fù)性好,可用于喘平滴丸中東莨菪堿的含量測(cè)定。

周益芬等[13]使用HPLC法測(cè)定氫溴酸東莨菪堿注射液的含量。采用的流動(dòng)相為乙腈-0.25%SLS溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5)(40∶60),流速0.7 ml/min,Alltima C8色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μ m),檢測(cè)波長(zhǎng)208 nm,柱溫為35 ℃。線性范圍為 2.0～ 14.0 μ g(r=0.999 9),平均回收率為99.8%(n=9)。該法專屬性強(qiáng),靈敏準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,為氫溴酸東莨菪堿注射液的質(zhì)量控制提供了有效的檢測(cè)方法。

吳克楠等[14]用HPLC法測(cè)定止喘靈氣霧劑中東莨菪堿和鹽酸克侖特羅的含量。采用Kromasil C18色譜柱(200 mm×4.6 mm,5 μ m),流動(dòng)相為乙腈-0.07 mol/L磷酸鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.0)(18∶82),柱溫:25℃,紫外檢測(cè)波長(zhǎng):216 nm。結(jié)果東莨菪堿在 21.20～169.63 μ g/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,平均回收率為98.0%(n=9)。該法能在較短的時(shí)間內(nèi)對(duì)這兩種成分實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè),是一種快速、簡(jiǎn)便、有效的分析方法。

4 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法由于柱效高、分離速度快、樣品量小等優(yōu)點(diǎn),近年來(lái)也有研究將這種方法應(yīng)用于東莨菪堿的含量測(cè)定。童萍等[15]將毛細(xì)管區(qū)帶電泳-安培檢測(cè)裝置聯(lián)用,對(duì)中草藥天仙子中主要成分阿托品和東茛菪堿進(jìn)行分析測(cè)定。毛細(xì)管運(yùn)行液為50 mmol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH為8.0),分離電壓為12 kV,阿托品和東莨菪堿的峰高和濃度分別在1.0～40 mol/L和3.0～100 mol/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,檢測(cè)限均為7.0×10-7mol/L,該方法靈敏且重現(xiàn)性好。

于燕莉等[16]采用高效毛細(xì)管電泳法對(duì)痹痛寧貼劑中東莨菪堿和烏頭堿的含量進(jìn)行測(cè)定。系統(tǒng)采用未涂層石英毛細(xì)管,以50 mmol/L pH6.0磷酸鹽緩沖液(含20%無(wú)水乙醇)為電泳介質(zhì),進(jìn)樣壓力2 kPa×5 s,分離電壓8 kV,檢測(cè)波長(zhǎng)200 nm,操作溫度30℃。結(jié)果制劑中兩種生物堿能較好分離。加樣回收率東莨菪堿為98.4%,烏頭堿為96.6%,RSD分別為1.61%和1.17%(n=5)。該方法快速簡(jiǎn)便,靈敏度高,重現(xiàn)性好。

李霞等[17]建立區(qū)帶毛細(xì)管電泳法分離測(cè)定莨菪浸膏片中4種莨菪烷類生物堿——阿托品、山莨菪堿、樟柳堿和東莨菪堿的含量,該方法采用未涂層石英毛細(xì)管柱,運(yùn)行緩沖液:100 mmol/L Tris-磷酸(pH=8.6);進(jìn)樣壓力:21 Pa×5 s;工作電壓25 kV;溫度25℃;檢測(cè)波長(zhǎng)202 nm。兩樣品測(cè)定間用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液與水沖洗2 min,運(yùn)行緩沖液沖洗3 min,運(yùn)行時(shí)間5 min。結(jié)果硫酸阿托品、氫溴酸山莨菪堿、樟柳堿和氫溴酸東莨菪堿濃度分別 在 2.05 ～41.04 μ g/ml(r=0.998 2)、2.04 ～40.72 μ g/ml(r=0.9958)、 2.05 ～41.0 μ g/ml(r=0.996 5)和 2.13 ～41.60 μ g/ml(r=0.9974)的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,平均回收率分別為 99.2%、98.5%、95.1%和98.2%。此法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、環(huán)保。

Gao等[18]用毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法同時(shí)對(duì)洋金花中的兩種活性成分進(jìn)行測(cè)定。用電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法檢測(cè)時(shí),檢測(cè)電壓為1.2 V,槽內(nèi)溶液為5 mmol/L的三聯(lián)(2,2-)吡啶釕(在發(fā)生電化學(xué)反應(yīng)時(shí)是阿托品和東莨菪堿的有效共反應(yīng)劑,可使分離和電化學(xué)參數(shù)都達(dá)到最佳狀態(tài)),使用20 mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH 8.48)時(shí)阿托品的檢測(cè)限為5×10-8mol/L;使用50 mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH 7.48)時(shí)東莨菪堿的檢測(cè)限是1×10-6mol/L。阿托品電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度和遷移時(shí)間的RSD為5.16和0.17%,東莨菪堿為5.07和1.22%。該法成功地用于洋金花中生物堿的測(cè)定。此法簡(jiǎn)便快速,選擇性好,靈敏度高,已應(yīng)用于從植物中提取的托品烷類生物堿的測(cè)定和茄科植物的指紋圖譜分析。

Yuan等[19]用非水毛細(xì)管電泳法、電化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)法聯(lián)合測(cè)定植物提取物中的阿托品、山莨菪堿和東莨菪堿。電泳緩沖液為乙腈和異丙醇的混合液(含1 mol/L的乙酸,20 mmol/L的乙酸鈉,2.5 mmol/L高氯酸四丁銨)。結(jié)果阿托品、山莨菪堿和東莨菪堿的線性范圍分別為0.5～50 μ mol/L(r=0.996),5 ～ 2000 μ mol/L(r=0.992)和 50 ～2000 μ mol/L(r=0.991)。3種生物堿的檢測(cè)限分別為0.5、2和5 μ mol/L。該法簡(jiǎn)便快速,可用于洋金花中3種生物堿的測(cè)定,為以后中藥的定量和定性分析提供可能性。

5 小 結(jié)

總之,東莨菪堿及其制劑的含量測(cè)定方法中,紫外分光光度法簡(jiǎn)便、快速,但是準(zhǔn)確性較差,故其應(yīng)用受到一定限制。薄層色譜法簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、快速,但是分離效果、準(zhǔn)確度和精密度等方面不如 HPLC法。從收集到的文獻(xiàn)和應(yīng)用范圍來(lái)分析,HPLC法使用最多,其分辨率高、重復(fù)性好、精確度高、速度快,實(shí)驗(yàn)用色譜柱可反復(fù)使用,節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。70%以上的有機(jī)化合物都用HPLC法分析,尤其在高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差的化合物的分離分析中,HPLC法顯示出更大的優(yōu)勢(shì)。由于HPLC法準(zhǔn)確、精確,故更能準(zhǔn)確地反映藥物的藥動(dòng)學(xué)特性,從而為藥物進(jìn)入臨床研究提供基礎(chǔ),為估算人體試驗(yàn)的最初劑量和確定藥物的潛在臨床不良反應(yīng)提供監(jiān)測(cè)指標(biāo)。隨著東莨菪堿研究的不斷深入和分析手段的不斷進(jìn)步,相信現(xiàn)有的含量測(cè)定方法將會(huì)越來(lái)越完善,一些新的分析方法也會(huì)得到應(yīng)用。

[1] John H,Binder T,H?chstette H,et al.LC-ESI MS/MS quantification of atropine and six otherantimuscarinic tropane alkaloids in plasma[J].Anal Bioanal Chem,2010,396(2):751-763.

[2] Burton M J,Roland P S,Rosenfeld R M,et al.Extracts from the Cochrane Library:Scopolamine(hyoscine)for preventing and treating motion sickness[J].Otolary ngol Head Neck Surg,2010,142(4):468-471.

[3] 張俊峰,方洪橋.氫溴酸東莨菪堿注射液的紫外分光光度法測(cè)定[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2003,26(1):29.Zhang JunFeng,Fang HongQiao.Determination of scopolamine hy drobromide injection by UV spectrophotometry[J].Heilongjiang M ed Pharm,2003,26(1):29.Chinese with abstract in English.

[4] 閆凱俠,楊瑤珺,錢 航,等.薄層-比色法測(cè)定增率片中東莨菪堿的含量[J].黑龍江科技信息,2001,(1):F013.Yan KaiXia,Yang YaoJun,Qian Hang,et al.The content determination of scopolamine in the Zenglv tablets by TLC method[J].Heilongjiang Sci T ech Inf,2001,(1):F013.Chinese.

[5] 馬長(zhǎng)清,彭 彥,沈明昭,等.薄層掃描法測(cè)定復(fù)方洋金花擦劑中氫溴酸東莨菪堿的含量[J].中國(guó)藥師,2002,5(4):216-217.M a ChangQing,Peng Yan,Shen MingZhao,et al.Determination of scopolamine hydrobromide in Daturametel L.lotion compound by T LC scanning[J].Chin Pharmacist,2002,5(4):216-217.Chinese with abstract in English.

[6] 牛麗穎,王繼業(yè),曹秀蓮,等.薄層色譜法測(cè)定洋金花中東莨菪堿的含量[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2004,19(3):25-26.Niu LiYin,Wang JiYe,Cao XiuLian,et al.The content determination of scopolamine in Datura metel L.by TLC method[J].J Hebei TCM Pharm,2004,19(3):25-26.Chinese.

[7] 鄭莉莉.HPLC測(cè)定金牛膠囊中東莨菪堿的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2008,10(3):29-30,43.Zheng LiLi.Determination of scopolamine in Jinniu capsules by HPLC[J].Mod Chin Med,2008,10(3):29-30,43.Chinese with abstract in English.

[8] 周益芬,謝 華,張悅楊,等.HPLC測(cè)定氫溴酸東莨菪堿的含量和有關(guān)物質(zhì)[J].華西藥學(xué)雜志,2009,24(2):177-178.Zhou YiFen,Xie Hua,Zhang YueYang,et al.Determination of content and related substances of scopolamine hydrobromide by HPLC[J].West China J Pharm Sci,2009,24(2):177-178.Chinese with abstract in English.

[9] 劉建華,楊德柱.HPLC法測(cè)定止喘靈注射液中東莨菪堿的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2004,11(7):609-610.Liu JianHua,Yang DeZhu.Determination of the content of scopolamine in Zhichuanling injection by HPLC[J].Chin J Inf T radit Chin Med,2004,11(7):609-610.Chinese with abstract in English.

[10] Ceyhan T,Kartal M,Altun M L,et al.LC determination of atropine sulfate and scopolamine hydrobromide in pharmaceuticals[J].J Pharm Biomed Anal,2001,25(3-4):399-406.

[11] 易艷東,張紅星,馬 威,等.RP-HPLC法測(cè)定金辛鎮(zhèn)痛噴霧劑中氫溴酸東茛菪堿和硫酸阿托品的含量[J].中國(guó)藥師,2009,12(7):889-890.Yi YanDong,Zhang HongXing,Ma Wei,et al.Determination the contents of scopolamine hydrobromide and atropine sulfate in Jinxinzhentong spray by RP-HPLC[J].China Pharmacist,2009,12(7):889-890.Chinese with abstract in English.

[12] 李曉燕,馮 中,吳燕紅,等.高效液相色譜法測(cè)定喘平滴丸中東莨菪堿的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(6):1377-1378.Li XiaoYan,Feng Zhong,Wu YanHong,et al.Determination of the content of scopolamine in Chuanping dripping pills by HPLC method[J].Lishizhen Med Materia Medica Res,2009,20(6):1377-1378.Chinese.

[13] 周益芬,劉 峰,王 野,等.HP LC法測(cè)定氫溴酸東莨菪堿注射液的含量[J].藥物分析雜志,2009,29(1):143-144.Zhou YiFen,Liu Feng,Wang Ye,et al.HPLC determination of scopolamine hydrobromide injection[J].Chin J Pharm Anal,2009,29(1):143-144.Chinese with abstract in English.

[14] 吳克楠,韓 松.高效液相色譜法測(cè)定止喘靈氣霧劑中兩種成分的含量[J].貴州醫(yī)藥,2008,32(5):464-465.Wu KeNan,Han Song.Determination of the contents of two ingredients in Zhichuanling aerosol by HP LC method[J].Guizhou Med J,2008,32(5):464-465.Chinese.

[15] 童 萍,鐘茂生,張 蘭.毛細(xì)管電泳安培檢測(cè)法用于天然藥物天仙子中主要成分的分析[J].福州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2009,37(2):286-289.T ong Ping,Zhong MaoSheng,Zhang Lan.Analysis of satropine and scopolamine in Hyoscyamus niger by capillary electrophoresis-amperometric detection[J].J Fuzhou Univ(Nat Sci Ed),2009,37(2):286-289.Chinese with abstract in English.

[16] 于燕莉,潘菡清,井 莉,等.高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定痹痛寧貼劑中東莨菪堿及烏頭堿的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2005,21(1):65-67.Yu YanLi,Pan HanQing,Jing Li,et al.Determination of scopolamine and aconitine in Bitongning patch by high performance capillary zone electrophoresis[J].Pharm J Chin PLA,2005,21(1):65-67.Chinese with abstract in English.

[17] 李 霞,羅 晶,柳小秦,等.區(qū)帶毛細(xì)管電泳法分離測(cè)定莨菪浸膏片中莨菪烷類生物堿[J].藥物分析雜志,2008,28(1):121-123.Li Xia,Luo Jing,Liu XiaoQin,et al.Separation and determination of tropane alkaloids in Langdang Jingao tablets by capillary electrophoresis[J].Chin J Pharm Anal,2008,28(1):121-123.Chinese with abstract in English.

[18] Gao Ying,Tian YiLing,Wang ErKang.Simultaneous determination of two active ing redients in Flos daturae by capillary electrophoresis with electrochemiluminescence detection[J].Anal Chim Acta,2005,545(2):137-141.

[19] Yuan BaiQing,Zheng ChunYing,Teng Hong,et al.Simultaneous determination of atropine,anisodamine,and scopolamine in plant ex tract by nonaqueous capillary electrophoresis coupled with electrochemiluminescence and electrochemistry dual detection[J].J Chromatogr A,2010,1217(1):171-174.