劉 鈺，梅金紅，郭銀芳

（南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院a.質(zhì)控科；b.病理科；c.病案室，南昌330006）

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B－cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中最常見的一種，約占成人NHL的35%～40%。在歐美國家，DLBCL的發(fā)病率約占NHL的30%，在亞洲國家發(fā)病率則更高。DLBCL具有惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，治愈率低的特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類健康。因此對(duì)其研究和預(yù)防具有極其重要的意義。通過實(shí)驗(yàn)了解腫瘤細(xì)胞的某些生物學(xué)特性，將有可能為DLBCL的診斷和治療提供有價(jià)值的參考指標(biāo)以及理論依據(jù)［1］。2004年Hans等運(yùn)用微陣列技術(shù)和免疫組化進(jìn)行CD10、MUM1、bcl26三種免疫標(biāo)記物染色，將DLBCL分為生發(fā)中心B細(xì)胞樣型（germinal center B cell like，GCB）和非生發(fā)中心B細(xì)胞樣型（nongerminal center B cell like，non GCB）亞型，并已得到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛認(rèn)同。有報(bào)道稱Oct－2在DLBCL中呈彌漫性表達(dá)［2］，但對(duì)于其在后者分型中的表達(dá)情況沒有文獻(xiàn)提及，而DLBCL由于分型不同治療效果與預(yù)后截然不同。本研究若能通過對(duì)Oct－2在DLBCL生發(fā)中心型與非生發(fā)中心型中表達(dá)情況的分析，進(jìn)一步了解后者的分型，將為提高DLBCL的臨床病理診斷準(zhǔn)確性提供一定的線索。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院自2007年1月至2009年11月DLBCL住院患者共60例，分為2個(gè)組：生發(fā)中心型組（32例），其中男19例，女13例，年齡25～65歲，平均年齡56.2歲；非生發(fā)中心型組（28例），其中男18例，女10例，年齡29～62歲，平均年齡55.4歲。

1.2 試劑與免疫組化染色

Oct－2鼠抗人單克隆抗體（工作液）、Ki67鼠抗人單克隆抗體（工作液）購自北京中杉金橋科技有限公司。羊抗鼠免疫球蛋白及DAB顯色劑購自福建邁新生物技術(shù)有限公司。DLBCL標(biāo)本均常規(guī)固定、脫水、石蠟包埋、切片、HE染色和免疫組化染色。PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽性片作為陽性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

Oct－2和Ki67陽性表達(dá)均為棕黃色顆粒定位于細(xì)胞核。判定標(biāo)準(zhǔn)：抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)按陽性細(xì)胞率計(jì)分：在高倍顯微鏡下，選取陽性密度較高的區(qū)域，在高倍視野下至少計(jì)數(shù)1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)。Ki67計(jì)數(shù)時(shí)血管內(nèi)皮陽性細(xì)胞不計(jì)在內(nèi)。Oct－2和Ki67陽性細(xì)胞數(shù)的百分率用標(biāo)記指數(shù)（labeling index，LI）表示：LI＝陽性細(xì)胞數(shù)／1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞×100%。無明顯陽性反應(yīng)細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)＜20%為陰性（－）；陽性細(xì)胞數(shù)≥20%為陽性（＋）［3］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，2組表達(dá)率的差異用χ2檢驗(yàn)法分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

32例生發(fā)中心型Oct－2有23例陽性表達(dá)，9例陰性表達(dá)，28例非生發(fā)中心型Oct－2有9例陽性表達(dá)，19例陰性表達(dá)。Oct－2在2組亞型DLBCL中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.03）。32例生發(fā)中心型Ki67有25例陽性表達(dá)，7例陰性表達(dá)；28例非生發(fā)中心Ki67有23例陽性表達(dá)，5例陰性表達(dá)，Ki67在2組亞型DLBCL中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.326）。在32例生發(fā)中心型組中Oct－2與Ki67陽性細(xì)胞表達(dá)情況，經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，2種蛋白在DLBCL生發(fā)中心型中的表達(dá)無差異（P＝0.315）；28例非生發(fā)中心型組中 Oct－2與 Ki67陽性細(xì)胞表達(dá)情況，經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，2種蛋白在DLBCL非生發(fā)中心型中的表達(dá)存在差異（P＝0.04）。

3 討論

2008年WHO淋巴瘤新分類明確了DLBCL的分類分子學(xué)亞型：生發(fā)中心B細(xì)胞樣、活化B細(xì)胞樣（也即非生發(fā)中心B細(xì)胞樣）。這兩種分子類型有明顯不同的預(yù)后，5年生存率分別為70%和12%，生發(fā)中心型明顯好于非生發(fā)中心型［4］。

Oct－2是B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，正常狀況下Oct－2在所有成熟的B細(xì)胞中呈高水平表達(dá)，而在前B細(xì)胞、T細(xì)胞中呈低水平表達(dá)，在樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及胃腸道黏膜、皮膚、胸腺的上皮中不表達(dá)［5］。因而Oct－2的表達(dá)可視為B細(xì)胞分化的一種標(biāo)志，其抗體可能對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤的診斷有幫助。有研究表明，在正常淋巴結(jié)或淋巴結(jié)反應(yīng)性增生中Oct－2主要表達(dá)在B細(xì)胞，在T細(xì)胞區(qū)表達(dá)很少［6］，有實(shí)驗(yàn)表明Oct－2在大多數(shù)T細(xì)胞淋巴瘤為陰性表達(dá)［7］，由此推測通過對(duì)Oct－2的表達(dá)檢測有助于區(qū)別B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤。通過對(duì)Oct－2在31例DLBCL中行免疫組織化學(xué)染色，發(fā)現(xiàn)有25例呈強(qiáng)陽性表達(dá)，并且Oct－2免疫組織化學(xué)染色能夠使腫瘤組織中增生更加活躍的細(xì)胞成分染色更加明顯，故可以凸顯出某些類型B細(xì)胞淋巴瘤的特有的組織學(xué)結(jié)構(gòu)［8］，推測Oct－2免疫組織化學(xué)染色可能對(duì)于B細(xì)胞淋巴瘤的進(jìn)一步分型有幫助。此外，Oct－2蛋白的陽性表達(dá)與腫瘤的分化程度、侵襲性有關(guān)，與患者性別、年齡、腫瘤部位、大小無關(guān)［9］。通過此次實(shí)驗(yàn)證明DLBCL的生發(fā)中心型中Oct－2的表達(dá)強(qiáng)度與其在非生發(fā)中心型中存在差異，提示Oct－2表達(dá)上調(diào)可能參與了生發(fā)中心型與非生發(fā)中心型的發(fā)病原因并且Oct－2的過表達(dá)與DLBCL生發(fā)中心來源有關(guān)。由此推測Oct－2可作為DLBCL分型的檢測指標(biāo)。

在細(xì)胞周期中，除G0和G1早期以外，Ki67蛋白均有表達(dá)，功能與細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)，因此，Ki67被認(rèn)為是較理想的檢測細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)，廣泛地應(yīng)用于測定各種腫瘤的增殖活性［10］。

陳健等［11］采用免疫組織化學(xué)與原位雜交技術(shù)對(duì)28例小兒惡性淋巴瘤組織中VEGF和Ki67進(jìn)行檢測，探討VEGF和Ki67在小兒惡性淋巴瘤中的表達(dá)中發(fā)現(xiàn)，在正常淋巴組織中Ki67呈低水平表達(dá)，在惡性淋巴瘤組織中Ki67表達(dá)升高，其表達(dá)水平可以反映淋巴瘤的惡性程度，Ki67在小兒惡性淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。尹相叢等［12］對(duì)淋巴瘤患者60例和20例反應(yīng)性增生淋巴組織和20例正常淋巴結(jié)組織分析發(fā)現(xiàn)，隨淋巴瘤惡性程度增高，Ki67表達(dá)水平逐漸增高，說明Ki67是評(píng)估淋巴瘤腫瘤細(xì)胞增殖的良好指標(biāo)，與淋巴瘤侵襲有關(guān)，對(duì)淋巴瘤臨床分型、組織分級(jí)具有一定參考價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Oct－2在DLBCL中表達(dá)較廣泛，與相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道相一致，并且在生發(fā)中心型中呈高陽性表達(dá)，可為DLBCL分型提供一定的參考價(jià)值。Oct－2在DLBCL的表達(dá)高低可能有助于臨床病理判斷其為生發(fā)中心型或非生發(fā)中心型。在生發(fā)中心型與非生發(fā)中心型中Ki67的陽性細(xì)胞表達(dá)率并不存在明顯的差異。由于DLBCL本身屬于惡性淋巴瘤的一種，從理論上講Ki67在生發(fā)中心型與非生發(fā)中心型都應(yīng)該有高表達(dá)率。因此該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Ki67作為測定各種腫瘤的增殖活性的性質(zhì)是相符的。此外，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明Oct－2與Ki67在DLBCL在生發(fā)中心型中的表達(dá)無差異，而二者在非生發(fā)中心型中的表達(dá)有差異，這一結(jié)果的出現(xiàn)考慮可能與病例數(shù)偏少以及生發(fā)中心型與非生發(fā)中心型兩種分型的基因型差異有關(guān)，這一點(diǎn)有待于進(jìn)一步研究。

［1］ 邵劍峰，林茂芳，傅燕萍，等.非霍奇金淋巴瘤組織中survivin蛋白與p27蛋白的相關(guān)性［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2006，22（21）：2476－2478.

［2］ 趙向榮，馬大烈.Oct－2蛋白在淋巴瘤中的表達(dá)及意義［J］.中華病理學(xué)雜志，2005，34（6）：337－340.

［3］ 廖琪，真酌，杜紹敏，等.CA125、Survivin和 Ki67在上皮性卵巢癌中表達(dá)及意義［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2009，4（4）：113.

［4］ 彭晚嬌，姚麗青，鄭智勇.淋巴結(jié)外彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤分子分型的病理學(xué)研究［J］.實(shí)用癌癥雜志，2010，25（1）：59－61.

［5］ Laurencikiene J，Deveikaite V，Severinson E.HS1，2enhancer regulation of germline epsilon and gamma2bpromoters in murine B lymphocytes：evidence for specific promoter－enhancer interactions［J］.J Immunol，2001，167：3257－3265.

［6］ Malone C S，Patrone L，Buchanan K L，et al.An upstream Oct－1and Oct－2binding silencergovernsB29（Ig beta）gene expression［J］.2000，164：2550－2556.

［7］ Pfisterer P，Konig H，Hess J，et al.CRISP－3，aprotein withhomology to plant defense proteins，is expressed in mouse B cellsunder the control of Oct2［J］.Mol Cell Biol，1996，16：6160－6168.

［8］ Scholer H R，Ruppert S，Suzuki N，et al.New type of POU domain in germline specific protein Oct－2［J］.Nature，1990，3444（6265）：435－439.

［9］ Trosko J E.From adult stem cells to cancer stem cells：Oct－2 gene，cell－cell communication，and hormones during tunlorpromotion［J］.Ann N Acad Sci，2006，1089（1）：36－58.

［10］ 劉剛，俞薇薇.EBV、ki67、ERK1在乳腺癌中的表達(dá)及其相關(guān)性［J］.實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2008，9（3）：129－130.

［11］ 陳健，蔣敏，高明太，等.小兒惡性淋巴瘤中血管內(nèi)皮生長因子和Ki67的表達(dá)及其相互關(guān)系［J］.蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，36（2）：44－47.

［12］ 尹相叢，楊金平，李貴新，等.nm23、ki67在惡性淋巴瘤中的表達(dá)及意義［J］.山東醫(yī)藥，2009，49（2）：97－98.