楊偉俊 何 江 羅玉琴 滿爾哈巴·海如拉 譚 為 徐 芳

(1.新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所/新疆維吾爾藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆烏魯木齊830004;2.中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所，新疆烏魯木齊830011)

菊科蒿屬Artemisia L.在新疆分布50余種，藥用7種。其中龍蒿 A.dracunculus L.、黃花蒿 A.annua L.、野艾蒿A.lavandulaefolia DC.等作為維吾爾醫(yī)和哈薩克醫(yī)習(xí)用藥材廣泛應(yīng)用于民間和臨床。黃花蒿維語名“夏木牙格其”，性溫(二級干熱)，用于心慌氣短、結(jié)核病、食欲不振、感冒發(fā)燒、尿路澀閉等;野艾蒿維語名“阿里云”，性溫(三級干熱)，用于風(fēng)寒感冒、腸道寄生蟲、小便不利、尿路結(jié)石、月經(jīng)不調(diào)、腹脹寒痛及氣管炎和咳嗽、關(guān)節(jié)炎等疾患;龍蒿又稱椒蒿，維語名“庫力蘭艾曼”，性溫，用于受寒感冒、腸胃寒痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎［1，2］。由于三者形態(tài)及粉末顯微特征近似，影響鑒定的準(zhǔn)確性。近年來，通過光學(xué)顯微鏡對蒿屬的花粉粒等進(jìn)行鑒定研究的方法已有報(bào)道［3-6］。有鑒于此，本研究通過對龍蒿、黃花蒿、野艾蒿3種蒿屬植物的花粉形態(tài)，如大小、形狀、溝的特征等進(jìn)行系統(tǒng)研究，結(jié)合薄層色譜分析，以期獲得鑒別3種蒿屬藥材簡單、有效的鑒別方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料:供試材料取自新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所標(biāo)本室的臘葉標(biāo)本，標(biāo)本由新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所研究員鑒定，分別為龍蒿Artemisia dracunculus L.、黃花蒿 Artemisia annua L.、野艾蒿 Artemisia lavandulaefolia DC.。

1.2 儀器:OLYMPUSCX31型照相顯微鏡(日本奧林巴斯公司)，LY-WN-HPCCD型動態(tài)顯微成像系統(tǒng)(成都勵(lì)揚(yáng)精密機(jī)電有限公司);BS110S型電子天平(Sartorius);KQ-5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);WHF-203B暗箱式三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司);SZ-93型雙重純水蒸餾器(鞏義市英峪予華儀器廠);DZKW-S-4電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 花粉粒顯微特征及測量:樣品的處理 采用硫酸-醋酸酐分解法制備花粉［7］。

觀察照相并測量 在顯微鏡下觀察花粉粒的形狀，外部紋飾;測量花粉粒的極軸長、赤道軸長、三孔溝的溝深、溝寬，每個(gè)指標(biāo)隨機(jī)測量20個(gè)。用極軸長×赤道軸長表示花粉粒的大小;用極軸長/赤道軸長表示花粉粒的形狀(長圓、圓、扁圓);用溝深/溝寬表示花粉粒溝的角度張開大小。

1.3.2 薄層色譜鑒別:分別取龍蒿、黃花蒿、野艾蒿3種藥材粗粉3 g，加甲醇100 mL，置水浴上加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干后，加水50 mL溶解，加同比例石油醚萃取3遍，合并水層，蒸干后殘?jiān)蛹状既芙庵? mL，作為樣品溶液。分別吸取上述溶液各3μL點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(2:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。

2 結(jié)果與分析

2.1 顯微照片(目鏡15×，物鏡40×)及測量結(jié)果

3種植物花粉呈球形、近長球形或長球形，極面觀均為三裂圓形，赤道面觀為圓形或橢圓形;花粉具有三孔溝，溝中間較寬，兩頭狹窄;孔明顯，橫長;外壁為兩層結(jié)構(gòu)，外壁較厚，內(nèi)由覆蓋層和柱狀層組成，內(nèi)層薄;外壁文飾為表面顆粒狀。劃分形態(tài)見圖1，測量結(jié)果見表1。

圖1 顯微照片(目鏡15×，物鏡40×)及測量結(jié)果

表1 龍蒿、黃花蒿、野艾蒿花粉粒的形態(tài)測量數(shù)據(jù)比較

從表1可見，3種蒿屬花粉粒的大小關(guān)系:龍蒿最大，其次是野艾蒿，黃花蒿最小。同時(shí)，根據(jù)極軸長/赤道軸長的值可以看出3種蒿屬花粉粒的形狀，龍蒿花粉粒是由長圓到圓的變化(1.38 ～1.03)，而黃花蒿(1.53 ～0.741)、野艾蒿(1.32～0.771)的形狀較相似，都是由長圓到圓再到扁圓變化。根據(jù)花粉粒溝深/溝寬值可以看出3種蒿屬花粉粒溝所張開的角度大小不同，其中龍蒿花粉粒溝張開角度最大;其次是野艾;黃花蒿最小。

通過方差齊性檢驗(yàn)、非參數(shù)檢驗(yàn)中 Kruskal-Wallis法、Nemenyi、Newman-Keuls法檢驗(yàn)得出:3種蒿屬植物的花粉粒的大小兩兩比較都成顯著性差異，從而可以用來區(qū)分三者;花粉粒形狀野艾蒿與其他二者無顯著性差異，而龍蒿與黃花蒿差異顯著，從而可以區(qū)分龍蒿與黃花蒿;溝張開角度的大小龍蒿與野艾蒿幾乎沒有顯著差別，黃花蒿與二者差別顯著，從而可以用來區(qū)分出黃花蒿。

2.2 薄層色譜鑒別:黃花蒿與野艾蒿在位置A處(Rf=0.43)，均出現(xiàn)相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，而龍蒿在A處未出現(xiàn)藍(lán)色熒光斑點(diǎn);黃花蒿在位置B處(Rf=0.26)出現(xiàn)亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，龍蒿和野艾蒿在相應(yīng)位置B處未出現(xiàn)此斑點(diǎn)，結(jié)果見圖2。

圖2 薄層色譜鑒別圖

3 討論

3.1 蒿屬植物花粉既有科的共同特征，也有屬種的特異性，本研究也證明了這一點(diǎn)，其外部形態(tài)都呈近球形或近長球形，表面紋飾都呈顆粒狀，它們都有沿極軸走行的三條孔溝。

3.2 根據(jù)花粉粒極軸長×赤道軸長可以看出3種蒿屬花粉粒的大小關(guān)系為:龍蒿最大，其次是野艾蒿，黃花蒿最小。形狀特點(diǎn)是龍蒿花粉粒是由長圓到圓的變化，而黃花蒿、野艾蒿的形狀較相似，都是由長圓到圓再到扁圓變化。根據(jù)花粉粒溝深/溝寬值可以看出龍蒿花粉粒溝張開角度最大，其次野艾蒿和黃花蒿，且二者相差不大。

3.3 曾有學(xué)者［6］報(bào)道了三種花粉粒大小(極軸長×赤道軸長)，與本次研究所測得的數(shù)據(jù)對比如下:

表2 花粉粒大小比較(單位m2)

從表2知，本研究的3種花粉粒大小與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)基本一致，說明上述3種蒿屬植物的花粉粒大小地域性差別小，種內(nèi)具有高度的保守性。同時(shí)利用花粉粒的大小、形狀、孔溝的形態(tài)可區(qū)分這3種蒿屬植物，并可作為鑒別它們的可靠依據(jù)。

3.4 本文還采用紫外光譜法對龍蒿、黃花蒿、野艾蒿3種藥材進(jìn)行掃描研究，紫外圖譜顯示這3種藥材均在328±2 nm處有最大吸收峰，且峰形相似，無法區(qū)分3者，而采用薄層色譜法可以很好地區(qū)分這3種藥材。

［1］新疆植物志編輯委員會.新疆植物志［M］.第五卷.烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1999:167，172，175.

［2］劉勇民.維吾爾藥志［M］.下冊.烏魯木齊:新疆科技出版社，1999:728，746，820.

［3］宛濤，蔡萍，伊衛(wèi)東，等.內(nèi)蒙古森林草原五種裸子植物的花粉形態(tài)觀察［J］.中國草地學(xué)報(bào)，2010，32(6):105～109

［4］孟德玉，周頌東，何興金.四川前胡屬的花粉形態(tài)及系統(tǒng)學(xué)意義［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2004，24(12):234l～2345.

［5］LIU Zhen，GAO Shan lin.Research on Pollen Grains of Tetraploid Lines and Diploid Control Line of Chrysanthemum cinerariifolium(Trev.)Vis.［J］.Agricultural Science ＆ Technology，2010，11(5):151 ～154

［6］王伏雄，錢南芬，張玉龍.中國植物花粉形態(tài)［M］.第二版.北京:科學(xué)出版社，1997:3 ～5.

［7］ERDTMANG.Suggestions for the classification of fossil and recent pollen grains and spores［J］.Svensk Bot Tidskr，1947，41:104～114