腎活檢用Schiff試劑的配制及保存

孫 璟，楊劍輝

腎活檢全稱為腎穿刺活體組織檢查法，目前臨床常用的方法是在B超引導(dǎo)下，利用穿刺槍從腎臟獲取微量腎臟標(biāo)本后，在顯微鏡下觀察腎組織學(xué)變化。它能對許多腎臟病的診斷、治療以及預(yù)后評估提供重要的依據(jù)，其價值是其它血、尿檢驗所不能替代的，現(xiàn)已成為腎內(nèi)科常做的一項重要檢查。過碘酸-Schiff（PAS）特殊染色在腎穿刺活檢病理中主要用于顯示腎小球系膜區(qū)的范圍和基膜的厚度，也可顯示腎小球內(nèi)某些滲出性蛋白、節(jié)段性硬化和結(jié)節(jié)性病灶。因此在該病理診斷中起著非常重要的作用，但是由于PAS染色常常受到各種因素的影響，在實際工作中常存在Schiff試劑難以配制且配制好后保存易失效的問題。通過反復(fù)實踐，筆者總結(jié)了一些經(jīng)驗體會，取得了較好的染色效果，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 新鮮腎穿刺組織，用10%的中性甲醛液固定，特殊脫水處理，經(jīng)石蠟包埋，切片厚2～3 μm，做過碘酸雪夫（PAS）染色。

1.2 試劑配制 ①0.5%高碘酸液的配制：高碘酸0.5 g，蒸餾水100 ml；此液溶解后保存于冰箱中待用；②Schiff液配制：先將100 ml蒸餾水煮沸，加入0.5 g堿性復(fù)紅，再煮沸1 min，使其徹底溶解，此時溶液呈深紅色，待其冷卻到50℃時過濾加入10 ml的1 mol/L鹽酸，待25℃，加入0.5～1 g偏重亞硫酸鈉，塞住瓶口，搖動容器以充分混合，在室溫、暗處至少靜置24 h，加入0.7 g活性炭，輕搖數(shù)分鐘，靜置1～2 h后，用濾紙過濾至棕色瓶內(nèi)，此時溶液為無色透明液體，封口，注意一定放入4℃冰箱避光保存。

1.3 方法 ①切片常規(guī)脫蠟至水；②0.5%高碘酸氧化10 min；③流水沖洗2 min；④入Schiff液于暗處加蓋染色10～20 min；⑤流水沖洗5 min；⑥用Harri明礬蘇木素液染核2～3 min，0.5%鹽酸乙醇分化，自來水洗后細(xì)胞核變藍(lán)為止；⑦無水乙醇脫水、風(fēng)干、透明、封片。

2 結(jié) 果

在顯微鏡下，結(jié)果顯示腎小球系膜基質(zhì)、膠原纖維及包漿均呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。

3 討 論

試劑配制和濃度確定是有效染色的重要因素，PAS染色中，過碘酸是一種氧化劑，它可把多糖的葡萄糖分子的兩個相鄰的帶有羥基的-C-C-鍵打開，而生成醛基再與染色劑結(jié)合。高碘酸液濃度一般為0.5%～1%，pH值為3～5。對組織進(jìn)行單一化學(xué)染色時，高碘酸液濃度可適當(dāng)降低，如腎穿刺活檢組織以0.5%為宜；進(jìn)行免疫組化和組織化學(xué)重復(fù)染色時，因染色過程組織受到一定程度破壞，高碘酸液濃度可適當(dāng)提高，以1%為宜。另外，染色時若環(huán)境溫度較高且高碘酸作用時間長，可使某些物質(zhì)成分發(fā)生非特異反應(yīng)，使結(jié)果出現(xiàn)假陽性。因此，環(huán)境溫度較高時，可適當(dāng)縮短反應(yīng)時間。

Schiff試劑中主要染料是堿性品紅，經(jīng)亞硫酸和二氧化硫的作用，醌式結(jié)構(gòu)的雙鍵被破壞而消失，已成為無色復(fù)紅，再經(jīng)過氧化后的醛基與無色復(fù)紅液進(jìn)行結(jié)合呈紫紅色[1]。因此Schiff試劑質(zhì)量如何，主要取決于所用試劑堿性品紅的質(zhì)量、與配制方法、所用器皿的清潔程度及保存是否妥當(dāng)有關(guān)。配制Schiff試劑時，盡量使用高質(zhì)量的堿性品紅與偏重亞硫酸鈉等試劑，配制過程中必須使用潔凈的器皿，因如和堿性物質(zhì)接觸也可使無色品紅立即變紅而無效，要避免污染。配制后的Schiff試劑可以小瓶分裝，置于冷凍箱內(nèi)保存，臨用前取出一小瓶恢復(fù)至室溫后使用即可[2]。室溫在15℃以下時可用40℃溫水稍加溫進(jìn)行反應(yīng)。染色時，根據(jù)Schiff試劑配制的時間與環(huán)境溫度，可適當(dāng)調(diào)節(jié)作用時間，注意一定要避光染色。染色過程中不可用自來水沖洗太久，防止返紅，另外染色過程中不能接觸伊紅，否則會造成顏色誤差。

判別Schiff試劑是否失效，主要看儲存Schiff液是否變?yōu)殚偌t色或粉紅色，打開蓋，氣味偏淡或無強烈的刺激性氣味，則證明Schiff試劑已變質(zhì)并失效。解決方法是：重新添加偏重亞硫酸鈉（Na2SO3）補充H2SO3，取偏重亞硫酸鈉加入到無色品紅失效液中，加入量為每10 ml無色品紅失效液加大約0.05～0.07 g偏重亞硫酸鈉，可恢復(fù)其染色力，用上述糾正后的試劑染色，結(jié)果均為紅到紫紅色。這時失效的Schiff試劑顏色恢復(fù)至無色并帶有強烈的刺激性氣味。通過反復(fù)實踐操作發(fā)現(xiàn)[3]，用失效的Schiff試劑及糾正后的Schiff試劑分別對腎組織染色。腎穿組織經(jīng)過處理后Schiff液染色后基底膜呈紅色，見圖1、2，效果非常好。

圖1 失效的Schiff試劑PAS染色

圖2 糾正后的Schiff試劑PAS染色

綜上所述，在腎穿刺活檢病理PAS染色過程中，應(yīng)該注意固定液的選擇，試劑配制質(zhì)量、試劑保存方法，染色作用時間等細(xì)節(jié)問題，PAS染色將會取得滿意的效果，這對腎臟病理診斷具有重要意義，也可為臨床提供治療依據(jù)。

[1]王伯沄，李玉松，黃高昇，等.病理學(xué)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001.150.

[2]沈洪武，王建彪，蘇海燕.PAS染色試劑的保存方法[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2004，20（2）：235.

[3]劉 濤，王 玨，張 健，等.介紹一種PAS染色中無色品紅液失效后的解決方法[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2007，23（2）：230.