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      鮮切皺皮木瓜飲片中齊墩果酸和熊果酸含量測定

      2011-10-22 07:24:00周明星鄧改改丁明若羅友成劉焱文汪鋆植
      三峽大學學報(自然科學版) 2011年4期
      關鍵詞:齊墩果酸木瓜

      周明星 鄧改改 丁明若 羅友成 劉焱文 汪鋆植

      (1.天然產(chǎn)物開發(fā)與利用湖北省重點實驗室(三峽大學),三峽大學化學與生命科學院,湖北 宜昌 443002;2.湖北中醫(yī)學院中藥資源與中藥復方省部共建教育部重點實驗室,湖北 武漢 430065)

      皺皮木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles Speciosa(Sweet)Nakai的干燥成熟果實,為常用中藥[1],具有平肝舒筋、和胃化濕等功效,主要用于治療濕痹拘攣、腰膝關節(jié)酸重疼痛、吐瀉、轉(zhuǎn)筋、腳氣水腫等癥[2].湖北省長陽土家族自治縣是我國皺皮木瓜道地藥材主產(chǎn)區(qū),產(chǎn)量占全國皺皮木瓜產(chǎn)量的60%以上.木瓜的傳統(tǒng)產(chǎn)地加工方式為鮮切后自然曬干,這種加工方式受自然條件影響大,易引起木瓜霉爛變質(zhì),每年由此造成的直接經(jīng)濟損失高達30~70%,極大地影響皺皮木瓜的產(chǎn)業(yè)發(fā)展.為保證皺皮木瓜質(zhì)量,筆者對皺皮木瓜產(chǎn)地加工技術進行了改進,建立了木瓜鮮切飲片技術.而在《中國藥典》(2005年版)中,要求對木瓜中齊墩果酸和熊果酸進行檢查,為評價鮮切飲片質(zhì)量,實驗采用高效液相色譜法(HPLC),測定了不同方法制備的木瓜飲片中齊墩果酸和熊果酸含量,并對其HPLC指紋圖譜進行了比較.

      1 材料與儀器

      1.1 藥材

      新鮮皺皮木瓜采于長陽土家族自治縣榔坪鎮(zhèn),由長陽清江藥谷有限公司提供.市售皺皮木瓜飲片購自宜昌市康鑫醫(yī)藥經(jīng)銷有限公司.經(jīng)三峽大學楊進副教授鑒定為貼梗海棠Chaenomeles Speciosa(Sweet)Nakai.的果實.

      1.2 儀器與試劑

      儀器:高效液相色譜儀(Waters 2998);立式蒸汽滅菌器YXQ-LS-30 SII(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠);GZX-9240 MBE數(shù)顯鼓風干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠);雙重蒸餾水器;電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司);EYELA SB-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限責任公司).

      試劑:乙腈(色譜純,美國 Tedia公司)、甲醇(色譜純,美國J.T.Baker公司);甲醇(分析純,天津博迪化工);齊墩果酸、熊果酸對照品(購于中國藥品生物制品檢定所).

      2 方法與結(jié)果

      2.1 木瓜樣品制備

      鮮木瓜,取新鮮木瓜,切厚片,經(jīng)冷凍干燥制成鮮木瓜片.鮮切飲片,取新鮮木瓜,在高壓蒸汽滅菌鍋中經(jīng)蒸氣預處理后,切片,烘干.傳統(tǒng)飲片,取新鮮木瓜,按傳統(tǒng)加工方法制成飲片.

      2.2 參照物溶液制備

      精密稱取齊墩果酸、熊果酸對照品適量,分別用色譜甲醇制成1.0 mg/mL對照品溶液,然后稀釋成濃度為0.1,0.25,0.5,0.75mg/mL對照品溶液.

      2.3 供試品溶液的制備

      取不木瓜樣品,粉碎,過80目篩,精密取不同樣品粉末各0.5 g于100 mL具塞錐形瓶中,精密吸取25mL甲醇,稱重,蓋好瓶塞,冷浸過夜后超聲提取45 min,稱量,并用甲醇補足重量,放冷至室溫,過濾,取續(xù)濾液,減壓濃縮后定容至5 mL,然后用 0.45μ m微孔濾膜過濾,制得樣品溶液.

      2.4 色譜分析條件[2-4]

      2.4.1 齊墩果酸和熊果酸含量測定HPLC分析條件

      Diamonsil C18(4.6mm ×250mm,5μ m)色譜柱,流動相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(265∶35∶0.1∶0.05),進樣量10μ L,流速1.0mL/min,檢測波長210 nm,柱溫18℃.

      2.4.2 指紋圖譜色譜分析條件

      Diamonsil C18(4.6mm ×250mm,5μ m)色譜柱,流動相:(A)乙腈,(B)水,梯度洗脫,0~50 min(5%~35%A,95%~65%B),50~110 min(35%~100%A,65%~0%B),110~120 min(100%A~0%B);進樣量 10 μ L,流速 1.0 mL/min,檢測 波長 215 nm.

      2.4.3 精密度實驗

      取同一供試品溶液,連續(xù)進樣5次,計算出峰時間和峰面積的精密度,結(jié)果表明各峰出峰時間的精密度RSD小于0.28%,出峰面積的精密度 RSD小于2.0%.表明實驗精密度良好.

      2.4.4 穩(wěn)定性實驗

      取同一供試品溶液,分別在0,4,8,12,24 h進樣,計算各峰的保留時間和峰面積(以齊墩果酸為1,熊果酸為2,齊墩果酸出峰在熊果酸前,且較熊果酸峰大).結(jié)果顯示供試品溶液的指紋圖譜在24 h內(nèi)很穩(wěn)定,各峰相對保留時間的RSD為0.19%,相對峰面積的RSD小于2.0%.

      2.4.5 重現(xiàn)性實驗[5]

      取同一編號藥材粉末5份,照前述處理方法制得供試品溶液,分別進樣測定.實驗表明本法重現(xiàn)性良好.

      2.5 結(jié)果

      2.5.1 標準曲線制作

      齊墩果酸標準曲線線性回歸方程:y=-0.03684+0.000316639x,R=0.9994,n=5;熊果酸標準曲線線性回歸方程:y=-0.04266+0.000309155x,R=0.9997,n=5;x為吸收峰面積,y為質(zhì)量濃度.

      2.5.2 樣品中齊墩果酸和熊果酸含量

      樣品中齊墩果酸和熊果酸含量見表1.

      表1 樣品中齊墩果酸和熊果酸含量表

      2.5.3 木瓜飲片HPLC檢測3D圖

      結(jié)果顯示,各成分在檢測波長215 nm下均有吸收.實驗共檢測120min,其中 0~10min除溶劑峰外沒有其它峰,而在35~65 min基本沒有峰,10~120 min共有27個共有峰,共有峰的峰位和峰形表明4批不同樣品在組分上差異較小.但不同加工方法樣品的共有峰和各峰峰面積存在著一定差異,藥材特征峰的峰面積大小有較明顯差異,說明不同加工來源樣本所含的化學成分含量有差異.

      圖3 木瓜飲片總提物HPLC檢測3D圖

      2.5.4 木瓜藥材HPLC指紋圖譜分析結(jié)果

      木瓜藥材HPLC指紋圖譜分析結(jié)果見圖4~7.

      3 討 論

      “資丘皺皮木瓜”規(guī)范化的GAP藥材種植基地建設為保證木瓜種質(zhì)、規(guī)范栽培、田間管理、采收等生產(chǎn)環(huán)節(jié)提供了保障.但木瓜產(chǎn)地加工技術沿用傳統(tǒng)方法,易引起木瓜霉爛變質(zhì),極大地影響了商品質(zhì)量和藥效.因此為保證木瓜飲片質(zhì)量,對皺皮木瓜飲片生產(chǎn)技術進行改進勢在必行.本文建立的木瓜鮮切飲片技術,保證了木瓜加工過程中的質(zhì)量.鮮切飲片與傳統(tǒng)飲片相比成分基本一致,標示成分含量明顯高于傳統(tǒng)飲片.

      目前多數(shù)中藥先在產(chǎn)地加工成中藥材后再運輸?shù)疆惖丶庸こ娠嬈?不但增加了生產(chǎn)成本,而且藥材按傳統(tǒng)產(chǎn)地加工方式加工,由于技術和條件限制,易造成損耗、變質(zhì)和藥效成分流失,嚴重地影響了中藥質(zhì)量.而社會的發(fā)展使得交通運輸日以便利,中藥行業(yè)的發(fā)展使許多中藥在產(chǎn)地直接加工成飲片成為可能.這樣既可降低飲片加工成本,又可保證確保飲片來源,穩(wěn)定飲片質(zhì)量[6-7].本文為探討中藥飲片新的加工方法,完善中藥產(chǎn)業(yè)鏈提供了一種可行的方法.

      皺皮木瓜鮮加工飲片由于由鮮果直接加工成飲片,干燥速度快,表皮皺縮較輕,與傳統(tǒng)飲片相比性狀差別較大.而人們對飲片質(zhì)量的把握性狀是最直觀的指標.因中藥鮮切飲片能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)飲片進入市場,一方面需要得到藥品管理部位和經(jīng)營使用單位認可,另一方面進行藥效學比較.

      [1]中國醫(yī)學科學院藥物研究所.中藥志(第3冊)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版杜,1993:215.

      [2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業(yè)出版社,2010:57.

      [3]陳豐連,黃錦茶,梁欣健.HPLC法測定涼粉草中齊墩果酸和熊果酸含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2010:21(4):416-418.

      [4]黃志軍.木瓜水溶性部位高效液相色譜法指紋圖譜研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2006,17(10):1869.

      [5]屠鵬飛.高效液相色譜法制定中藥材中中藥注射劑特征指紋圖譜的探討[J].中成藥,2000,22(7):516.

      [6]肖永慶,張 村,李 麗.中藥飲片行業(yè)發(fā)展問題與展望[J].醫(yī)學研究雜志,2009,28(12):3-6.

      [7]肖永慶,張 村,李 麗.淺談中藥飲片規(guī)范化生產(chǎn)和過程控制[J].醫(yī)學研究雜志,2010,39(9):11-14.

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