HPLC法測定注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關(guān)物質(zhì)和含量

北京四環(huán)科寶制藥有限公司（100070）曹相林 魏墨璽 馬月梅 方賢羅 陳婧

鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯是甲砜霉素的衍生物，是氯霉素的同類物，抗菌譜和抗菌作用與氯霉素相似。其水溶性好，當(dāng)溶液的pH值增高或受到體內(nèi)酶的作用后，迅速釋放出甲砜霉素而發(fā)揮作用[1]。鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯拓寬了甲砜霉素的臨床應(yīng)用，克服了其水溶性差的劣勢[2]。有些文獻(xiàn)報(bào)道的鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關(guān)物質(zhì)的檢測方法中，流動(dòng)相及其pH值、溶解樣品的溶劑的選擇是不恰當(dāng)?shù)?，未充分?yàn)證鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯在不同pH值條件下的穩(wěn)定性或相應(yīng)峰純度的考察，有關(guān)物質(zhì)的檢測結(jié)果欠準(zhǔn)確。因此，本研究在大量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，建立了一種準(zhǔn)確快速檢測注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯有關(guān)物質(zhì)和含量的高效液相色譜法。經(jīng)過系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證，選用本方法測定有關(guān)物質(zhì)，能保證各雜質(zhì)有效檢出，峰型對稱性好，積分結(jié)果準(zhǔn)確，且各雜質(zhì)峰與主成分峰分離度較好。選用本方法測定含量靈敏度高、專屬性強(qiáng)、線性范圍寬、方法回收率好。完全能夠達(dá)到質(zhì)量控制的要求。

1 儀器與試藥

島津LCSolution高效液相色譜儀（日本島津公司）；Sartorius PB-10型酸度計(jì)（德國賽多利斯公司）；CP225D型電子天平（德國賽多利斯公司）；鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯對照品（批號(hào)：20100301）自制；甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 HPLC測定方法的建立與驗(yàn)證

2.1 色譜條件的建立 經(jīng)試驗(yàn)，流動(dòng)相pH值對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯主峰及其雜質(zhì)峰峰形、峰面積和分離度均有影響。對流動(dòng)相pH值為3.0和4.5的對比發(fā)現(xiàn)，前者明顯比后者峰型對稱性好，積分結(jié)果準(zhǔn)確，各雜質(zhì)峰與主成分峰分離度好。最終確認(rèn)以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液-三乙胺（20∶80∶0.05）用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0為流動(dòng)相，能保證各雜質(zhì)有效檢出。

附表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

附表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.2 空白試驗(yàn) 本品以0.01mol/L的鹽酸溶液為溶劑，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證選用本HPLC測定方法，空白溶劑不干擾樣品的雜質(zhì)檢測。

2.3 最小檢測限 按儀器噪音的3倍響應(yīng)值測定最小檢測量為0.4ng，表明本色譜條件的靈敏度較好。

2.4 方法線性試驗(yàn) 取鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯適量，共6 份，精密稱定，加0.01mol/L的鹽酸溶液制成每1ml約含50、75、100、130、150、200μg的一系列溶液，在選定的色譜條件下，分別精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，濃度對峰面積做標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明本品在51.45～200.5μg/ml范圍呈良好線性，回歸線性方程：Y=36.186X+23.439 R2=0.9999。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品適量，照含量測定方法平行配制6份樣品，測定樣品含量，考察該含量測定方法的重復(fù)性。結(jié)果顯示，采用本法對同批樣品，平行試驗(yàn)6份，6次含量測定結(jié)果的RSD=0.68%，表明本方法重復(fù)性較好。見附表1。

2.6 精密度試驗(yàn) 取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下樣6，照含量測定方法連續(xù)進(jìn)樣6次，考察該含量測定方法的精密度，結(jié)果表明本方法精密度良好。見附表2。

2.7 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 考察供試品溶液在第0、30、60、120、180、240、360和480min的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，樣品溶液在室溫中放置480min后峰面積并無明顯變化，RSD為0.47%，適合常規(guī)分析。見附表3。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱定鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯對照品適量（約相當(dāng)于甲砜霉素8、10、12mg），置100ml量瓶中，加0.01M鹽酸溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試溶液。另取鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯對照品適量，用0.01M鹽酸制成每1ml中約含甲砜霉素甘氨酸酯100μg的對照溶液。照上述方法試驗(yàn)，高、中、低3個(gè)不同測定量的樣品，分別平行試驗(yàn)3次。結(jié)果表明，含量測定準(zhǔn)確度好，方法可行性較強(qiáng)。見附表4。

2.9 樣品含量測定 取本品連續(xù)試制的3批樣品，采用高效液相色譜法測定含量，見附表5。

附表3 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

附表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果

附表5 三批樣品的含量測定結(jié)果

附表6 溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果

2.10 溶液pH值對樣品穩(wěn)定性的影響 分別選用pH4.5流動(dòng)相、0.001 mol/L鹽酸、0.01mol/L鹽酸，以有關(guān)物質(zhì)為指標(biāo)，考察樣品配制后放置穩(wěn)定性情況。結(jié)果表明：不同pH值的溶劑對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的穩(wěn)定性有明顯影響。在pH值對雜質(zhì)的影響的考察中發(fā)現(xiàn)，在考察的3h內(nèi)，在同一pH值條件下，有關(guān)物質(zhì)隨放置時(shí)間延長而增長，因此為保證結(jié)果準(zhǔn)確，有關(guān)物質(zhì)測定時(shí)樣品應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用；在考察的3h內(nèi)，隨著溶液pH值的降低，樣品在放置相同的時(shí)間內(nèi)，雜質(zhì)增長幅度明顯降低，因此選用溶解樣品的溶劑為0.01mol/L鹽酸，能保證測定結(jié)果更加準(zhǔn)確。見附表6。

3 討論

本研究在對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關(guān)物質(zhì)及含量測定過程中，考察了色譜條件的流動(dòng)相組成及其pH值、溶劑pH值對樣品的穩(wěn)定性，進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)研究。采用本方法測定有關(guān)物質(zhì)，能保證各雜質(zhì)有效檢出，峰型對稱性好，積分結(jié)果準(zhǔn)確，且各雜質(zhì)峰與主成分峰分離度較好；本方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、線性范圍寬、方法回收率好。解決了某些文獻(xiàn)報(bào)道的鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關(guān)物質(zhì)測定方法檢測結(jié)果欠準(zhǔn)確的問題。值得推廣用于注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的質(zhì)量控制。