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      受體牛移植后再次放栓對妊娠率的影響

      2011-11-12 10:22:34付靜濤曹授俊范永剛陳學(xué)生肖西山北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院房山102442甘肅省酒泉市畜牧服務(wù)中心北京市平谷區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所
      山東畜牧獸醫(yī) 2011年7期
      關(guān)鍵詞:陰道內(nèi)黃體孕激素

      付靜濤 曹授俊 范永剛 陳學(xué)生 肖西山 (北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 房山 102442 甘肅省酒泉市畜牧服務(wù)中心 北京市平谷區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所)

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      受體牛移植后再次放栓對妊娠率的影響

      付靜濤①*曹授俊①范永剛③陳學(xué)生②肖西山①(①北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 房山 102442 ②甘肅省酒泉市畜牧服務(wù)中心 ③北京市平谷區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所)

      本試驗(yàn)采用對移植后的受體牛再次陰道內(nèi)放入本牛用過的CIDR(孕酮陰道栓)的方法,對妊娠率進(jìn)行對比研究。結(jié)果表明:再次放栓組妊娠率(育成牛63.64%和經(jīng)產(chǎn)牛60.98%)略高于未再次放栓組(育成牛53.66%和經(jīng)產(chǎn)牛53.85%),但無顯著性差異(P>0.05)。

      受體牛 胚胎移植 放栓 妊娠率

      應(yīng)用現(xiàn)代繁殖生物技術(shù)加速品種改良及擴(kuò)大種群是目前國際上推動畜牧業(yè),尤其是養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的重要途徑之一?,F(xiàn)代繁殖生物技術(shù)涉及到對種質(zhì)細(xì)胞—精子、卵和胚胎在體外進(jìn)行細(xì)胞或遺傳水平的操作,再通過胚胎移植產(chǎn)生人們所需要的個體乃至群體。而移植后胚胎在母體子宮的著床率直接影響著繁殖生物技術(shù)應(yīng)用的效率。因而,受體牛妊娠率一直是各國從事繁殖生物技術(shù)研究的科學(xué)家所關(guān)注的焦點(diǎn)之一。胚胎著床涉及到胚胎和受體牛子宮之間的相互作用,是一種高度進(jìn)化和完善的生理過程。本文從受體牛移植胚胎后再次放栓對妊娠率的影響進(jìn)行了研究,旨在提高受體牛移植妊娠率,從而為胚胎移植產(chǎn)業(yè)化奠定基礎(chǔ)。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      1.1.1 胚胎來源 胚胎引自于加拿大太平洋遺傳中心(Canadian Pacific Genetics Centre)的荷斯坦奶牛體內(nèi)生產(chǎn)的胚胎。

      1.1.2 胚胎冷凍方法 采用1.5mol/L乙二醇為抗凍保護(hù)劑的常規(guī)冷凍法。

      1.1.3 受體牛的選擇及飼養(yǎng)管理 受體牛來源于甘肅省酒泉市,品種為黃牛雜交牛、西門塔爾雜種牛和低產(chǎn)黑白花奶牛。其中包括育成牛和經(jīng)產(chǎn)牛、年齡在2~8周歲。同期發(fā)情處理前進(jìn)行兩次直腸檢查,選擇無繁殖障礙性疾病、健康、體況達(dá)到中等以上,斷奶40d以上,且具有正常發(fā)情周期的210頭母牛做受體實(shí)施同期發(fā)情處理。受體母牛在同期發(fā)情處理45d前加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,補(bǔ)飼富含維生素、礦物質(zhì)的全價配合飼料和適量胡蘿卜。

      1.1.4 藥品和儀器 5%亞硒酸鈉VE注射液:亞硒酸鈉10mg+500IUVE/10ml/支(東臺市動物藥廠,上海)。CIDR:1.38g孕酮/支(Duirs PfarmAg Ltd;New Zealand)。PGF2α:0.2mg/支(上海計(jì)劃生育研究所)。移植槍、硬外套、軟外套(法國進(jìn)口)。

      1.2 方法

      1.2.1 同期發(fā)情處理 采用CIDR聯(lián)合使用PGF2α法對受體母牛進(jìn)行同期發(fā)情處理。在受體牛發(fā)情周期的任意一天于陰道內(nèi)埋置CIDR,第9天肌肉注PGF2α0.6 mg/頭(經(jīng)產(chǎn)牛)或0.5mg/頭(育成牛),第12天取出CIDR(清洗消毒后保存,并標(biāo)記牛號),于24~48h開始觀察發(fā)情,并準(zhǔn)確記錄發(fā)情時間。

      1.2.2 胚胎解凍 冷凍胚胎的細(xì)管首先空氣浴7~8s,然后在32℃水浴中解凍10s,拔掉栓塞即可裝入移植槍進(jìn)行移植,但要求在解凍后8~10min內(nèi)移植完畢。

      1.2.3 胚胎移植 采用一步細(xì)管法直接移植165頭。移植前首先對受體牛確認(rèn)發(fā)情時間,并結(jié)合直腸檢查,觸摸黃體發(fā)育是否合格,對黃體合格的受體牛實(shí)施胚胎移植。致密桑椹胚可移植于發(fā)情后6.0~7.0d的受體,早期囊胚和囊胚可移植于7.0~7.5d的受體。

      1.2.4 再次放栓 把同期發(fā)情時用過的CIDR進(jìn)行消毒處理,隨機(jī)選取85頭(育成牛44頭,經(jīng)產(chǎn)牛41頭)移植后的受體(對應(yīng)本牛用過的CIDR)再次放入陰道內(nèi),10d后取出。

      1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用χ2檢驗(yàn)

      2 結(jié)果

      對165頭受體牛進(jìn)行分組試驗(yàn),其中85頭移植后再次陰道內(nèi)放置用過的CIDR,80頭未用。再次放入組妊娠率略高于未放置組,但差異不顯著(P>0.05),見附表。

      附表 移植后再次放栓的效果比較

      牛的類型是否放栓移植頭數(shù)妊娠頭數(shù)妊娠率(%) 育成牛是442863.64a 否412253.66a 經(jīng)產(chǎn)牛是412560.98a 否392153.85a

      注:同一欄數(shù)值中具有相同字母表示無顯著性差異(P>0.05)

      3 討論

      妊娠涉及胚胎和母體子宮間妊娠信號的建立、附植的發(fā)生和胎盤的形成等一系列分子事件[1]。同時妊娠率也受胚胎質(zhì)量、受體牛同期化程度、胚胎移植和胚胎體外操作技術(shù)水平以及孕激素水平等因素的影響[2]。

      盧淮武等[3]報道,孕酮影響子宮平滑肌細(xì)胞的通透性,使細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度降低,鈉離子濃度升高,肌纖維松弛,興奮性降低,同時降低妊娠子宮對縮宮素的敏感性,減少子宮收縮,有利于受精卵在子宮內(nèi)生長發(fā)育。

      董金蓮等[4]報道,排卵后補(bǔ)充孕激素起到改變顆粒細(xì)胞的促性腺素受體含量,從而調(diào)節(jié)黃體化過程,促使子宮黏膜層加厚,腺體彎曲度增加,分泌功能增強(qiáng),有利于胚胎著床,促使子宮頸口收縮,子宮頸粘液變稠形成宮頸塞起到保護(hù)作用。

      由于孕激素有助于懷孕的過程,移植后再次放入同期發(fā)情時用過的CIDR,由于CIDR中的孕酮沒有完全釋放,所以繼續(xù)外源性增加孕酮的含量,將有助于周期黃體的維持,提高妊娠率;但是,第2次放CIDR時,一定要嚴(yán)格消毒,以防造成感染,使妊娠率下降。

      由于本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較少,結(jié)論還有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。

      [1] Cross James C, Werb Zena, Fisher Susan J. Implantation and the placenta key pieces of the development puzzle. Science, 1994, 266: 1508-1518.

      [2] 付靜濤, 朱士恩, 李樹靜等. 影響受體牛冷凍移植胚胎效果的主要因素[J]. 中國畜牧雜志.2008,17(8): 14-17.

      [3] 盧淮武, 周暉, 張建平等. 孕激素在黃體功能不全型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 中國處方藥.2010,03: 36-38.

      [4] 董金蓮, 徐有盛等. 黃體酮和維生素治療奶牛不孕癥的試驗(yàn)[J]. 青海畜牧獸醫(yī)雜志.2009, 39(06):22-23.

      (2011–04–18)

      北京市科委重點(diǎn)項(xiàng)目[H022020060420]和國家科技支撐計(jì)劃[2006BAD04A02-10]部分內(nèi)容資助。

      北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院項(xiàng)目[SF-YF-09-16]資助。

      通訊作者

      S823.3+6

      A

      1007-1733(2011)07-0017-02

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