申紅春

(恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物工程系，湖北 恩施 445000)

中草藥制劑具有促進畜禽生長和動物保健的作用，且在生產(chǎn)應(yīng)用上具有毒性低、殘留低、無耐用性、經(jīng)濟實用等獨特特點，因此被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn).

中草藥絞股藍(lán)不僅具有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)(如氨基酸、不飽和脂肪酸、微量元素、維生素等)，還具有激素樣作用、抗生素樣作用，可顯著提高機體免疫力；并能改善飼料適口性、增加食欲、促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[1].目前，中草藥約有5 000種可用于添加劑.

絞股藍(lán)〔Gyrtostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino〕為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生攀緣草質(zhì)藤本植物，又名七葉膽、公羅鍋底.絞股藍(lán)以全草供藥食兼用，味苦、性寒，具有清熱解毒、補氣、止咳、祛痰之功效[2].有研究報道，絞股藍(lán)具有多種生物活性，如能夠調(diào)節(jié)機體免疫力，抗腫瘤，降低血脂，心血管保護等；研究表明，絞股藍(lán)可刺激和調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)，增強人體抵抗力.其不僅能直接清除自由基，并可降低自由基對細(xì)胞膜上脂質(zhì)過氧化作用，因而具有抗衰老的功效.絞股藍(lán)作為飼料添加劑，能使動物得到所需的微量元素的同時，促進食欲，提高動物機體本身的免疫力[3-5].本文將進行研究日糧中添加不同劑量的絞股藍(lán)，探討絞股藍(lán)對斷奶仔豬免疫功能的影響，為今后開發(fā)絞股藍(lán)在豬飼料添加劑中的廣泛應(yīng)用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗動物及試驗設(shè)計

選用240頭21 d斷奶的雜交仔豬，根據(jù)體重相近，公母各半的原則隨機進行分組，分別為對照組和試驗I組、Ⅱ組、Ⅲ組.對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗I組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組在基礎(chǔ)日糧上分別添加不同劑量的絞股藍(lán)，即0.5%、1.0% 、2.0%，每個處理設(shè)置3個平行，每個平行20頭豬.適應(yīng)期7 d，試驗周期為28 d.

1.2 絞股藍(lán)

試驗所用絞股藍(lán)購買于恩施醫(yī)藥有限公司,經(jīng)鑒定為正品.于65℃烘干、粉碎備用.

表1 試驗基礎(chǔ)日糧配方和營養(yǎng)成分(風(fēng)干樣)

注：1.豆粕粗蛋白含量為43；魚粉為國產(chǎn)魚粉；CaHP04含2個結(jié)晶水2.預(yù)混料為每千克飼料含VA 12 000IU；VD32 500IU；VE 50IU ；VK32.5 mg；VB12.5 mg；VB27.5 mg；VB63.5 mg；VB120.025 mg；煙酸30.00 mg；生物素0.125 mg.Fe 119 mg；Cu 21 mg；Mn 56 mg；Zn 110 mg；碘 0.8 mg；Se 0.30 mg.

1.3 飼養(yǎng)管理

受試動物飼養(yǎng)在密閉 的半漏縫地板上，并且設(shè)置電熱板供仔豬取暖，試驗期間豬舍相對濕度維持在55%～70%.采食方式為自由采食，采食量以食后料略有剩余為標(biāo)準(zhǔn).飲水方式為通過乳頭式飲水器自由飲水.在每天8:00，11:30，14:00，18:30進行飼喂，試驗期間隨時觀察仔豬采食和健康狀況，每天最后一次飼喂后收集飼料殘留量，記錄動物的發(fā)病情況.每日定時打掃圏舍，定期消毒，按常規(guī)程序進行驅(qū)蟲和免疫.

1.4 飼料配方及營養(yǎng)水平

試驗基礎(chǔ)日糧的配方及營養(yǎng)水平參照《豬營養(yǎng)需要》[6]與中國《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn))(NY/T 65—2004)[7]進行設(shè)計.基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平見表1.

1.5 血樣的采集和處理

試驗結(jié)束時，對受試動物進行稱重并采集血樣.采集樣品的具體方法為每個組選取體重接近的健康仔豬1頭，使用無菌注射器經(jīng)前腔靜脈采集血液約5 mL，立刻于室溫下靜置1 h，經(jīng)3 000 r/min離心15～20 min，吸取上層的血清，并立即放入-20℃冰箱中保存，待測.

1.6 免疫功能指標(biāo)的測定方法

測定血清的生化指標(biāo)采用全自動生化分析儀(日立7180型).測定補體C3、C4及免疫球蛋白IgG、IgM、IgA則是采用免疫透射比濁法，購自南京建成生物工程研究所的試劑盒用于測定本試驗中的酶活性，免疫球蛋白測定試劑盒購自浙江伊利康生物技術(shù)有限公司.

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理

試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析采用單因素方差分析進行統(tǒng)計分析(SAS 8.0軟件)，若經(jīng)F檢驗差異顯著者再用LSD法進行多重比較，試驗結(jié)果均以平均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示.

2 結(jié)果與分析

絞股藍(lán)對斷奶仔豬免疫功能的影響試驗結(jié)果如表2中顯示.從表2中可以看出，飼料中添加一定比例的絞股藍(lán)能夠提高斷奶仔豬體內(nèi)的血清免疫球蛋白含量.其中，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組IgM、IgG含量高于對照組和試驗Ⅲ組，并且具有顯著性差異(P<0.05)，而對照組和試驗Ⅲ組得結(jié)果差異不顯著(P>0.05).此外，通過飼料中添加絞股藍(lán)的方式還能夠提高斷奶仔豬體內(nèi)血清補體的含量，其中試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組C3、C4含量明顯高于對照組和試驗Ⅲ組，并且具有顯著性差異(P<0.05)，但是對照組和試驗Ⅲ組差異不顯著(P>0.05).從表3可以看出，與對照組相比，日糧中添加絞股藍(lán)增加了仔豬血清中過氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、堿性磷酸酶(AKP)與酸性磷酸酶(ACP)的活力(P<0.05)，顯著降低了血清丙二醛(MDA)含量(P<0.05)，在30日齡和55日齡時，與對照組相比，II、Ⅲ組SOD分別提高了11.83%、15.11%和30.19%、42.81%，GSH-PX分別提高了11.83%、40.07%和22.39%、28.14%，AKP分別提高了13.30%、32.46%和7.36%、12.43%，ACP分別提高了4.65%、6.93%和24.09%、34.94%，而MDA分別降低了32.01%、42.43%和48.68%、56.48%.Ⅱ組血清中SOD、GSH-PX、AKP與ACP的活力均高于Ⅲ組，但差異不顯著(P>0.05).添加l%的絞股藍(lán)可以提高血清SOD、GSH-PX、AKP與ACP的活力.以上結(jié)果表明，日糧中添加絞股藍(lán)增加了肉仔雞抗氧化能力，降低了血清中脂質(zhì)過氧化物的生成.

表2 絞股藍(lán)對斷奶仔豬的免疫功能的影響(Mean±SD)

注:同行列間標(biāo)有相同字母(a和b)者為差異不顯著(P<0.05),下同.

表3 絞股藍(lán)斷奶仔豬的酶活性的影響(Mean±SD)

3 討論

體液免疫是動物機體產(chǎn)生抗體的能力，是動物抵抗疾病的重要防御機制，這種免疫力取決于免疫球蛋白的種類和數(shù)量.IgA，IgM和IgG是血液中主要的免疫球蛋白，在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)過程中占重要地位.仔豬血清中免疫球蛋白水平反映了其抵抗外界病原菌和病毒侵襲的能力.這些免疫因子在提供仔豬局部保護、預(yù)防腸道疾病發(fā)生方面發(fā)揮重要作用[8].IgG是動物自然感染和人工主動免疫后機體產(chǎn)生的主要抗體，能抵抗多種細(xì)菌與毒素的侵襲，能夠有效地保護機體免受感染.IgM在機體受病原感染后與補體進行結(jié)合，致使病原體被溶解.IgA除發(fā)揮抗菌、抗病毒作用外，對動物機體的呼吸道、消化道等局部黏膜免疫也起著重要的“屏障”作用.C3是補體系統(tǒng)中的核心成分，是補體系統(tǒng)發(fā)揮效應(yīng)功能的關(guān)鍵成分，C4能夠保證補體活化穩(wěn)定而有效地發(fā)生于抗體結(jié)合的細(xì)胞表面[9-10].

據(jù)國內(nèi)外文獻報道，許多中藥或其活性成分對機體呈現(xiàn)小劑量或者低濃度促進機體免疫功能的現(xiàn)象，但是大劑量或者高濃度會抑制機體免疫功能.有文獻報道，絞股藍(lán)也具有這種雙向免疫調(diào)節(jié)作用.錢新華等[11]發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)多糖能提高小鼠血清中溶血素的含量，說明對體液免疫具有促進作用，但是在高劑量(100 mg/kg)下作用不明顯.廖瑞芳等[12]發(fā)現(xiàn)，小劑量(2.5～20 mg/L)的絞股藍(lán)總皂甙能催進淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，并能提高DNA聚合酶Ⅱ的活性，促進淋巴細(xì)胞DNA的合成，而大劑量(40 mg/L)則呈現(xiàn)相反的作用.本試驗結(jié)果表明，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和補體C3、C4顯著高于對照組.試驗Ⅲ組中結(jié)果表明高劑量的絞股藍(lán)對斷奶仔豬的免疫功能影響較小，基本與文獻報道中的試驗結(jié)果相符.有研究報道，增加仔豬體內(nèi)IgG水平有提高仔豬的抗感染能力、降低其腹瀉的發(fā)病率與死亡率的作用[13]，試驗組IgG水平的提高和降低腹瀉率的的試驗結(jié)果與此一致.

綜上所述，日糧中添加1%絞股藍(lán)能夠顯著提高免疫球蛋白IgA、IgG、IgA以及補體C3、C4含量，因此，飼料中添加1%絞股藍(lán)可以作為飼料添加劑的最佳劑量.

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