何國柏 丁人均 楊宇鋒 楊 芳

（湖南省懷化市鶴城區(qū)畜牧水產(chǎn)局，懷化 418000）

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 植黃牛 在武陵山區(qū)南、中、北地段的中高山區(qū)、丘陵地帶和相對平坦的區(qū)域，選用不同年齡、性別、體況的湘西黃牛302頭，分別進行植黃試驗。

1.1.2 牛黃床 選用卵形網(wǎng)狀平面空心黃床和卵型溝回狀黃床二種。①卵形網(wǎng)狀平面空心黃床。是以無毒R、R、V、C、PmmA、LDPE PALOIO等極性高分子聚合物為原料，塑成縱軸長⒋5 mm，直徑4 cm的卵狀牛黃床（代號LN-2型）。②卵型溝回狀黃床。是以進口無毒高壓聚乙烯為原料注塑而成，長軸5 cm，直徑4 cm，外壁有6條等距離的縱行溝回。黃床的上端有2個1.8 cm×0.9 cm的塑料小瓣，起到類似心臟二尖瓣的作用。它的內(nèi)外附著面積比前者增加75%。而與膽囊內(nèi)壁的接觸面減少了47%（代號為HX-4型）。將黃床塑殼外面都分別用白的確涼布或白粗棉布縫制包裹，分組供試。

1.1.3 牛黃菌 ①“HX-1型”菌種（非致病性埃希氏大腸桿菌），含菌量1×109～1.5×109/ml，每頭膽內(nèi)用量2 ml，河南淅川縣畜牧局提供。② “WL-6號”菌種：從形成天然牛黃的牛膽囊內(nèi)分離而成，含菌量1×1010/ml，每頭膽內(nèi)用量為3～5 ml。由吉首大學獸醫(yī)微生物實驗室提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 培植牛黃技術(shù)流程 選擇適齡健康黃牛→右側(cè)季肋部標定手術(shù)部位并剃毛消毒→靜松靈（2，4—二甲基丙胺噻唑鹽酸鹽，中國農(nóng)科院中獸醫(yī)研究所生產(chǎn)）配合傳導局麻→外科常規(guī)切開腹壁→暴露膽囊→開膽排汁并植入黃床→倫勃爾氏縫合膽囊→注入牛黃菌種→凈化膽囊外壁并復位→常規(guī)關(guān)腹→正常放牧1～2年→手術(shù)取黃→清除血跡與粘液→刮黃干燥封存→取樣送檢。

1.2.2 試驗中的技術(shù)改進 ①改電針麻醉為靜松靈配合傳導局麻，使牛安靜站立接受手術(shù)。經(jīng)150頭牛的試驗，研究出適宜于湘西黃牛站立手術(shù)的靜松靈合理劑量為0.05～0.10 mg/kg。②改外地牛黃菌種為我們自己從形成天然牛黃的膽汁中分離培育產(chǎn)生的β-G酶活性強盛的牛黃菌種?！癢L-6號”，含菌量達1×1010/ml。③在選用“HX-4型”卵形溝回狀黃床時，將內(nèi)部裝上一根細沙布條，并用白粗棉布取代白的確良布作包皮，以增加牛黃微粒的附著面。④改膽囊普通術(shù)式為增做一道膽囊頸部半結(jié)扎術(shù)。它既可以避免黃床在膽囊收縮時被排出或卡阻于膽囊頸部影響膽汁流通的可能性，更可緩留膽汁在黃床內(nèi)外停留的時間，增加牛黃微粒沉積和附著的機會，從而提高牛黃的產(chǎn)量。⑤改術(shù)部創(chuàng)口裝紗布敷料為涂搽蟲膠酊劑，使之在創(chuàng)口表面迅速形成一薄層保護膜，既防蚊蠅叮咬，又防雨水和贓物污染。在其周圍再涂1ml～2ml菜籽油，防蚊蠅效力更佳。我們曾于7、8月的盛夏季節(jié)施術(shù)數(shù)十頭，無一例感染化膿，創(chuàng)口均取一期愈合。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛黃產(chǎn)量及相關(guān)因素

直接編組進行試驗的302頭湘西黃牛，已手術(shù)取黃148頭，共取牛黃（干品）1 947.16 g，頭均產(chǎn)黃13.16 g。其中Ⅰ級品（膽紅素含量在35%以上）452.13g，占23.22%；Ⅱ級品（膽紅素含量在18～34%）1140.26g，占58.56%。達標量共1 592.39g，占總產(chǎn)量的81.78%。

試驗證明，培植牛黃的產(chǎn)量與質(zhì)量受多種因素的影響。如牛群的生態(tài)環(huán)境、個體的機能狀態(tài)、育黃時間的長短、黃床的類型、牛黃菌種以及手術(shù)的方式與質(zhì)量等，都明顯地起著制約作用。

2.1.1 牛的生態(tài)環(huán)境與產(chǎn)黃的關(guān)系 選年齡均在5～10 歲的成年湘西黃牛（公母各半，膘情中等）一批（100頭左右）進行不同生態(tài)環(huán)境的產(chǎn)黃對比試驗。結(jié)果表明，中高山地的牛黃產(chǎn)量高于丘陵地帶，丘陵地帶的牛黃產(chǎn)量又高于平地和城郊，但太高的山區(qū)又有所下降。這可能與氣象因子影響水草飼料和牛的消化生理有關(guān)。

2.1.2 植黃牛個體機能狀況與產(chǎn)黃的關(guān)系 選擇育黃時間相近（22～26個月），地勢相近，同處于丘陵低山區(qū)環(huán)境，都采用同一種牛黃菌種（WL-6）和同一型號黃床（HX-1型）的植黃牛一批進行試驗，比較不同年齡、性別和體況對產(chǎn)黃的影響。結(jié)果表明，年齡越大、個體越大（膘情不一定要好）的母牛，比年齡小、個體小的公牛產(chǎn)黃量高，質(zhì)量好。絕大多數(shù)這種牛的牛黃均為橙紅或棕紅色。

2.1.3 育黃時間與產(chǎn)量的關(guān)系 選年齡均為5～8歲，體重為200～250 kg范圍內(nèi)的湘西黃牛60頭，公母各半，用同樣的菌種和黃床（同前）作不同育黃期的比較試驗，結(jié)果用卡方檢驗分析育黃時間的長短對牛黃產(chǎn)量的影響。結(jié)果表明，育黃時間對牛黃的產(chǎn)量與質(zhì)量有明顯正向影響（P＜0.01）。

2.1.4 選用菌種、黃床和術(shù)式與產(chǎn)黃的相關(guān)性 選在張家界市永定區(qū)羅塔鄉(xiāng)和洪江市深渡鄉(xiāng)2個自然環(huán)境近似的中山區(qū)內(nèi)，所用牛的年齡相近（5～8歲），體況相近（體重在200～250 kg）的湘西黃牛（公母各半）90頭，育黃時間同為2年左右（23～25個月）進行不同菌種、不同黃床、不同術(shù)式的試驗比較。結(jié)果經(jīng)方差分析可知，黃床類型α=0.05的顯著性水平下差異顯著。HX-4型優(yōu)于LN-2型黃床。在α=0.01的顯著水平下，植黃方式與菌種型號差異極為顯著。即采用膽囊頸部半結(jié)扎式植黃比一般術(shù)式植黃的牛黃產(chǎn)量顯著提高。采用WL-6號菌種所得牛黃產(chǎn)量又明顯高于HX-1型菌種的。

2.2 培植牛黃質(zhì)量檢測

將試驗中所取的培植牛黃，隨機提取4批樣品（同時2批，每批10頭牛的牛黃混合之，），分別送懷化市藥檢所、湖南省藥檢所、湖南醫(yī)科大學分析測試中心作了全面的質(zhì)量檢測，檢測結(jié)果表明，所送樣品主要指數(shù)都達到國家規(guī)定標準。

2.2.1 物理性狀 牛黃樣品為小片碎塊及部分粉末固體，有光澤、質(zhì)酥脆、易研碎、色棕黃或綜褐。碎塊斷面橙黃色艷，聞有清香，口感味苦而后甘涼，掛甲良好。隨機采樣送湖南醫(yī)科大學電鏡室作電子顯微鏡觀察，結(jié)果表明牛黃層次結(jié)構(gòu)清晰，與天然牛黃相似，并以膽紅素結(jié)構(gòu)為主，質(zhì)量上乘。

2.2.2 培植牛黃主要化學成份 所檢測的40頭培植牛黃樣品全部達到部頒標準。再將它與我國其他地區(qū)所產(chǎn)牛黃進行主要指標比較。結(jié)果表明武陵山區(qū)培植牛黃的質(zhì)量達到或超過了國內(nèi)某些地區(qū)的先進水平。

值得注意的是，在牛黃的多種化學成分中，膽紅素是一個最重要的成份。盡管對它的藥理作用還需要進一步的認識，但其含量的高低與傳統(tǒng)評價牛黃質(zhì)量是一致的。因此常以膽紅素含量的高低來評價牛黃質(zhì)量的優(yōu)劣。衛(wèi)生部 “衛(wèi)藥字（90）第9號”文件中，明文規(guī)定“培植牛黃中膽紅素含量35%以上（含35%）的，可與天然牛黃同等藥用；膽紅素含量在18%～35%之間的，只能供非急救成藥配方用；膽紅素含量在18%以下的，不可供藥用?！?/p>

武陵山區(qū)培植牛黃與我國其他地區(qū)培植牛黃膽紅素含量達標范圍十分相似，即80%的以上的產(chǎn)品達到部頒Ⅰ、Ⅱ級標準。將膽紅素含量一項與國內(nèi)主要產(chǎn)地的牛黃比較，結(jié)果表明武陵山區(qū)培植牛黃還含有15種微量元素和18種氨基酸，與其他省市培植牛黃和天然牛黃的含量相近。

2.2.3 毒性安全試驗 樣品經(jīng)湖南醫(yī)科大學分析測試中心作安全毒性試驗，表明經(jīng)口為LD50大于5 000mg/kg；經(jīng)腹腔注射LD50為401.8mg/kg。結(jié)論：武陵山區(qū)培植牛黃“屬微毒或無毒”。

2.2.4 衛(wèi)生學檢驗 樣品經(jīng)湖南醫(yī)科大學分析測試中心檢驗，“兩批樣品檢出細菌數(shù)、霉菌數(shù)均為合格，無活螨”。

2.3 培植牛黃對牛的勞役、繁殖、長膘及血液常規(guī)生理指數(shù)的影響

科研組直接試驗的302頭牛，經(jīng)3年來的測察，無一頭牛因植黃手術(shù)引起術(shù)部感染化膿、腹膜炎、內(nèi)出血、膽囊瘺管或膽道阻塞而致殘、致傷或死亡。

2.3.1 對勞役的影響 經(jīng)對保靖縣白云農(nóng)場、永順縣永茂鎮(zhèn)、張家界永定區(qū)羅塔坪鄉(xiāng)和洪江市深渡鄉(xiāng)等四個植黃數(shù)量較多（40～90頭）的試驗點一年一度的實地考察，畜主和鄉(xiāng)村領(lǐng)導一致反映，手術(shù)后1個月左右即可正常使役（事實上術(shù)后1周傷口即已愈合，10 d即可輕役）。一般都能在農(nóng)忙季節(jié)順利完成勞役任務。

2.3.2 對膘情的影響 選個體大小相似，公牛、母牛各半的植黃牛20頭，進行體尺測量，觀察植黃前后膘情變化。結(jié)果表明，植黃1年后膘情不但不減，反而頭均增重32.5kg。例如保靖縣白云山農(nóng)場觀察90頭植黃牛，增膘65頭，占70.25%，無明顯增膘24頭，占26.66%，因患肝片吸蟲病營養(yǎng)低下1頭，占3.12%。

2.3.3 對繁殖力的影響 在永茂鎮(zhèn)、羅塔坪鄉(xiāng)和深渡鄉(xiāng)三個點，對已植黃的86頭有繁殖力的母牛觀察統(tǒng)計，植黃時正處于孕期（2～6月），術(shù)后正常分娩牛犢16頭，植黃時已產(chǎn)牛犢（1～3月）正在哺乳，術(shù)后母子生長發(fā)育正常24頭；植黃時處于空懷期，術(shù)后（1～6月）正常發(fā)情配種，妊娠產(chǎn)犢46頭。無一頭因植黃引起流產(chǎn)、死胎、死犢或終生不育者。種公牛植黃后雄性不減，能照常配種繁殖，并收取到質(zhì)優(yōu)量多的牛黃。如永茂鎮(zhèn)農(nóng)戶袁宣金，羅塔坪鄉(xiāng)檳堂村畜主李冬所養(yǎng)的種公牛，分別為4歲和6歲，育黃期間分別配種21頭和23頭，均1次受孕正常產(chǎn)犢。

2.3.4 對血液常規(guī)生理指數(shù)的影響 在洪江市深渡鄉(xiāng)取植黃牛15頭與對照牛15頭的血液做血常規(guī)檢驗對比。結(jié)果表明：紅細胞總數(shù)與血紅蛋白含量，植黃牛比對照牛略有增數(shù)，植黃引起機體反射性的造血機能旺盛。植黃牛白細胞總數(shù)稍有增加，顯示機體對膽囊內(nèi)異物（黃床與菌種）的刺激已引起炎性反應，隨著手術(shù)創(chuàng)口的愈合，炎性反應可逐漸消退。植黃牛白血球分類計數(shù)出現(xiàn)淋巴球和中性球比例升高的現(xiàn)象，顯示機體免疫機能增強。

上述實驗數(shù)據(jù)表明，培植牛黃雖然在牛體內(nèi)引起一定的防御性反應，但并不影響牛的整體生理機能，而膽囊內(nèi)的炎性反應和膽汁變得濃稠與排泄緩慢，正是牛黃形成的基本因素，有利于早期成黃。

3 結(jié)果與討論

3.1 試驗結(jié)果

用湘西黃牛培植牛黃獲得成功。培植牛黃不影響牛的使役、繁殖和長膘。手術(shù)取黃148頭，得干黃1 947.16g，頭均產(chǎn)黃13.16g，經(jīng)省級藥檢所等權(quán)威科研機關(guān)質(zhì)量檢測，其中81.78%達到部頒標準。

3.2 影響培植牛黃產(chǎn)量與質(zhì)量的主要因素

3.2.1 黃床 試驗證明采用HX-4型卵型溝回狀黃床，外包粗白棉布，內(nèi)裝細紗條為好。

3.2.2 菌種 菌種首選“WL-6號”，每牛膽內(nèi)用量3～5ml。

3.2.3 年齡 植黃牛以選用年齡老（10～12歲）、個體大（體重在250kg～300kg，膘情差但基本健康）的山區(qū)黃牛為宜。

3.2.4 麻醉 0.05～0.10 mg/kg肌注靜松靈配合傳導局麻，能使湘西黃牛安靜站立接受手術(shù)。

3.2.5 術(shù)式 植黃手術(shù)方式宜快速、簡潔，將黃床固定于膽囊底部，再作膽囊頸部半結(jié)扎術(shù)，是提高產(chǎn)量與質(zhì)量的重要手段。

3.2.6 時間 育黃時間應在18～20個月為宜。

3.3 討論

為何有天然牛黃者消瘦、貧血和黃疸，而培植牛黃者反而增膘？我們認為：天然牛黃的形成，皆因肝膽疾病所致。即在牛黃形成之前，就有疾病發(fā)生。尤其是管黃形成之后，加劇了肝膽疾病，固多呈病態(tài)。而培植牛黃全過程是經(jīng)過科學設計，以不影響牛體的正常生理功能為基礎(chǔ)。牛黃床定位于膽囊空腔之中，膽囊松弛富有彈性，不致造成膽道阻塞；接種的牛黃菌種經(jīng)過選育，毒力低，活性強（產(chǎn)生β-G酶的活性強），感染定向。正是由于它們的共同作用和良性刺激，使膽囊壁增厚，膽汁變得濃稠，但仍能排入膽道，并反射性地引起整個胃腸蠕動增強，食欲及消化旺盛，從而激活了其肝膽功能。只要手術(shù)質(zhì)量高，不但牛黃量多質(zhì)優(yōu)，且能使牛體增膘。這為充分利用老廢退役黃牛，育肥植黃同步兩用提供了依據(jù)。

試驗證明培植牛黃不影響牛的長膘，即可利用山區(qū)退役的老廢?；驍M屠宰的肉牛植黃，育肥一年后屠宰時一并取黃。將育肥與植黃同步進行，是合理利用老廢牛，拓寬肉牛多種用途，提高牛的經(jīng)濟效益，刺激養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展，充分開發(fā)山區(qū)資源的一條新途徑。武陵山區(qū)地跨湘鄂川黔四省邊界，總面積11.7萬多km2，可利用草場80萬hm2，有國內(nèi)著名的優(yōu)良地方牛種—湘西黃牛100多萬頭。它具有個體較大（一般體重300kg～400kg）、毛色金黃、體格勻稱、肌肉豐滿、耐寒熱暑濕，適應山區(qū)、役肉兼用等優(yōu)勢。據(jù)有關(guān)部門統(tǒng)計，每年可出欄肉牛20萬頭，若能利用其1/10也就是2萬頭牛作育肥同步植黃，平均每次產(chǎn)黃只以10g計算，可得牛黃200 kg，按50元/g計算，僅產(chǎn)黃一項，每年可新增創(chuàng)收1 000萬元。