黃曉芹 羅再瓊

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院，四川 成都 610000;2.成都中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610075

干細(xì)胞是形成機(jī)體和各器官組織的原始細(xì)胞，中醫(yī)藏象理論中的腎精，是全身臟腑陰陽之根，生命之本，與干細(xì)胞有較多的共性。近年研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎藥具有干預(yù)干細(xì)胞的作用。本文就腎精和干細(xì)胞進(jìn)行分析、比較，探討兩者之間的內(nèi)在聯(lián)系，試圖揭示腎精的實(shí)質(zhì)和內(nèi)涵并探討運(yùn)用前景。

1 腎精與干細(xì)胞的同一性

1.1 來源的同一性

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，腎中所藏先天之精，稟受于父母，與生俱來，是人類生命的本原，“人始生，先成精”，故腎為先天之本。

現(xiàn)代研究表明，最原始的干細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞，又稱為全能干細(xì)胞，其稟受于父母，父母的生殖之精結(jié)合為受精卵，再由受精卵分裂出胚泡的內(nèi)細(xì)胞群，新個體所有的組織細(xì)胞均由該群細(xì)胞分化、分裂而來，其中任何一個內(nèi)細(xì)胞群的細(xì)胞在適宜的條件下均可分化成為身體的任何一種組織細(xì)胞，故該群細(xì)胞被稱為胚胎干細(xì)胞或全能干細(xì)胞。

1.2 作用的同一性

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，在胚胎發(fā)育和臟腑器官形成乃至于出生后的生命歷程中，先天之精不斷地由腎輸注于各臟腑器官，在后天之精的充養(yǎng)下，維持著各個臟腑組織器官的形態(tài)和功能穩(wěn)定，若先天之精異常，則會導(dǎo)致稟賦異常，繼而產(chǎn)生相應(yīng)的出生缺陷。

現(xiàn)代研究表明，隨著胚胎的發(fā)育和臟腑器官的分化和成熟，胚胎干細(xì)胞逐漸失去了全面分化的能力，而逐漸遷移到各種器官組織中，成為特定的組織干細(xì)胞 (造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、生殖干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞等)，組織干細(xì)胞通過分裂和多向分化，成為這些組織器官生長、發(fā)育、修復(fù)的原始基礎(chǔ) (先天生后天)。組織干細(xì)胞在后天所得到的水谷精微的充養(yǎng)下，能夠以不對稱分裂的形式得以自我更新 (后天養(yǎng)先天)，維持著數(shù)量的動態(tài)平衡，從而保證了機(jī)體器官和臟腑組織正常的形態(tài)和功能的維持?？梢姼杉?xì)胞與先天之精在來源、功能和充養(yǎng) (維持)上均具有共通點(diǎn)，干細(xì)胞可能是先天之精在細(xì)胞層面的存在形式。

2 腎精與干細(xì)胞的內(nèi)在聯(lián)系

近年來，有部分學(xué)者開始注意到干細(xì)胞與先天之精間的相似性，從干細(xì)胞角度對先天之精和腎為先天之本的理論進(jìn)行了討論［1－3］，提出了從干細(xì)胞角度探討腎精和腎為先天之本的理論的思路［4－6］，并進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明補(bǔ)腎藥具有干預(yù)干細(xì)胞的作用，揭示了腎精與干細(xì)胞的內(nèi)在聯(lián)系。

2.1 補(bǔ)腎藥可維持干細(xì)胞的數(shù)量和功能狀態(tài)

安紅梅等［7］將補(bǔ)腎陽中藥復(fù)方大鼠含藥血清加入小鼠胚胎干細(xì)胞株CRL—l825中，結(jié)果顯示可以抑制CRL一1825細(xì)胞凋亡，促進(jìn)CRI一1825細(xì)胞干細(xì)胞狀態(tài)維持基因Notchl的表達(dá)，抑制抑癌基因 P16INK4α基因表達(dá)。胡兵［8］、安紅梅［9］等將左歸丸含藥血清加入CRL—l825中，結(jié)果顯示細(xì)胞株分化、凋亡減少，增殖期細(xì)胞比例增加、wnt、Oct4基因的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)增加，而P16INK4α基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)下降，用RNA干擾wnt、Oct4基因表達(dá)后，凋亡增加。曾意榮［10］、周健洪［11］等研究表明復(fù)方補(bǔ)腎中藥和龜板含藥血清均可促進(jìn)體外骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的增殖;龜板含藥血清還可以促進(jìn)與DNA合成有關(guān)的Brdu和細(xì)胞增殖有關(guān)的PCNA的陽性細(xì)胞數(shù)。上述研究顯示部分補(bǔ)腎陰和腎陽中藥復(fù)方、單味補(bǔ)腎中藥可通過促進(jìn)干細(xì)胞增殖、減少干細(xì)胞凋亡和分化，從而維持干細(xì)胞的數(shù)量和不分化的功能狀態(tài)。

2.2 補(bǔ)腎藥可誘導(dǎo)干細(xì)胞的定向分化

研究表明補(bǔ)腎藥還可誘導(dǎo)干細(xì)胞的定向分化，如將補(bǔ)腎方藥 (淫羊藿、黃芪、杜仲、補(bǔ)骨脂和骨碎補(bǔ))醇提劑加入骨髓基質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)中，可促進(jìn)干細(xì)胞的增殖和向成骨方向分化及礦化［12］。巴戟天水提物及醇提物均能促進(jìn)含藥血清法體外培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，且巴戟天醇提物的作用強(qiáng)于水提物［13］。淫羊藿總黃酮含藥血清加入大鼠MSCs培養(yǎng)液中，強(qiáng)烈刺激MSCs的增殖和成骨性分化［14］。補(bǔ)腎化痰方地黃飲子可誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化［15］;成年大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞受龜版血清誘導(dǎo)后神經(jīng)元樣細(xì)胞NF表達(dá)陽性［16］;左歸丸可部分拮抗左旋單鈉谷氨酸對神經(jīng)干細(xì)胞的抑制作用，顯著增加Nestin陽性細(xì)胞的比率［17］。地黃多糖誘導(dǎo)培養(yǎng)24 h后，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞顯示為典型的神經(jīng)細(xì)胞樣形態(tài)，神經(jīng)絲蛋白與膠質(zhì)纖維酸性蛋白陽性細(xì)胞數(shù)均明顯高于β－巰基乙醇組，而對照組神經(jīng)絲蛋白及膠質(zhì)纖維酸性蛋白染色均為陰性［18］。提示適宜的補(bǔ)腎方藥和單味補(bǔ)腎中藥、中藥有效成分還可能具有誘導(dǎo)干細(xì)胞向不同組織方向定向分化的作用。

3 運(yùn)用前景—補(bǔ)腎填精，改善造血干細(xì)胞

以往中藥對造血干細(xì)胞作用的研究較少且主要集中在黃芪、當(dāng)歸等補(bǔ)氣、補(bǔ)血藥物，為數(shù)不多的補(bǔ)腎藥物與造血干細(xì)胞關(guān)系的研究顯示:補(bǔ)腎可能具有增加內(nèi)源性、外源性脾集落和造血祖細(xì)胞集落數(shù)、促進(jìn)骨髓細(xì)胞進(jìn)入增殖周期、抑制CD34+細(xì)胞凋亡的作用，如:王晉源等［19］報道健脾益腎為主要作用的生血丸1號和2號，可促進(jìn)小鼠外源性脾集落、粒系祖細(xì)胞、紅系祖細(xì)胞集落的形成;補(bǔ)腎陰和腎陽的補(bǔ)髓生血劑Ⅰ號和Ⅱ號灌胃小鼠，可促進(jìn)內(nèi)源性和外源性脾集落的形成，并促進(jìn)骨髓細(xì)胞進(jìn)入增殖周期，促進(jìn)粒系祖細(xì)胞集落的形成［20］。龜鹿二仙膠可通過上調(diào)bcl－2mRNA表達(dá)抑制環(huán)磷酰胺化療小鼠骨髓CD34+細(xì)胞的凋亡［21］;口服龜鹿二仙膠加味中藥，對再障治療的總有效率、骨髓CD34+細(xì)胞百分比和凋亡率均優(yōu)于口服康力龍［22］。補(bǔ)腎和解方在體外可提高再障患者BFU－E、CFU－E、CFU－GEMM集落產(chǎn)率及CD34+細(xì)胞數(shù)［23］;養(yǎng)陰、溫陽、補(bǔ)血藥均可促進(jìn)體內(nèi)擴(kuò)散盒中造血祖細(xì)胞集落的形成［24］，補(bǔ)腎生血藥益髓生血靈灌胃小鼠，可促進(jìn)骨髓 GM－CFU、BFU－E和CFU－E集落的形成［25］等，但由于這些研究的立項(xiàng)依據(jù)不在于腎精與干細(xì)胞的關(guān)系，故其方藥選擇并不側(cè)重于補(bǔ)腎，也未對造血干細(xì)胞的擴(kuò)增、歸巢和重建造血進(jìn)行系統(tǒng)研究。

造血干細(xì)胞具有不對稱分裂的特點(diǎn)，能維持自己數(shù)量的相對恒定，但也正是這一特點(diǎn)，讓如何使造血干細(xì)胞真正的擴(kuò)增而不分化從而建立受體永久性造血成為造血干細(xì)胞移植中的瓶頸之一;機(jī)體的造血干細(xì)胞絕大部分處于靜止期，移植后的造血干細(xì)胞必須要種植到骨髓的造血微環(huán)境 (歸巢)才能建立造血。造血干細(xì)胞擴(kuò)增和歸巢是當(dāng)前造血研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，現(xiàn)有研究主要是在體外運(yùn)用不同細(xì)胞因子組合對培養(yǎng)中的造血干細(xì)胞進(jìn)行刺激或是將造血干細(xì)胞與不同的基質(zhì)細(xì)胞共同進(jìn)行培養(yǎng)，但由于無法實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增而不分化，這些研究僅限于基礎(chǔ)研究和探索階段，尚未有任何一種穩(wěn)定而有效的方法在臨床中推廣運(yùn)用;為促進(jìn)移植后受體造血重建，臨床多采用G－CSF、PDGF等細(xì)胞因子，但效果不穩(wěn)定、反彈明顯、價格昂貴。

中醫(yī)理論認(rèn)為腎精具有生髓化血的作用:腎精生髓，充養(yǎng)于骨，髓亦可以轉(zhuǎn)化為血成為血液的生成來源之一“血即精之屬也”;而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究顯示所有的造血細(xì)胞均來源于胚胎時期就已具備的造血干細(xì)胞，在人的一生中，造血干細(xì)胞通過自我更新、不斷分裂和多向分化，維持著血細(xì)胞數(shù)量的動態(tài)平衡。若能以“造血干細(xì)胞屬于腎精”的假說為指導(dǎo)，將中醫(yī)藥“補(bǔ)腎填精”法運(yùn)用于造血干細(xì)胞擴(kuò)增，將為解決造血干細(xì)胞移植中的干細(xì)胞來源問題另辟蹊徑;如以干細(xì)胞與腎精同一性為指導(dǎo)，系統(tǒng)研究基于“補(bǔ)腎”的藥物干預(yù)供體、供移植干細(xì)胞、受體三個造血干細(xì)胞移植環(huán)節(jié)，改善造血干細(xì)胞的功能狀態(tài)，促進(jìn)其進(jìn)入增殖周期和歸巢，從而恢復(fù)和重建造血，應(yīng)該成為祖國眾多醫(yī)學(xué)干預(yù)造血干細(xì)胞擴(kuò)增、歸巢和重建造血的新的突破口。此外，在我國少數(shù)民族醫(yī)藥中，也有著眾多經(jīng)過臨床實(shí)踐證明有效的補(bǔ)益方、藥，其中有的藥物，比如藏藥“巴桑母酥油丸”，就已經(jīng)證實(shí)具有提高放、化復(fù)合損傷小鼠外周血白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)的作用［26］，以“補(bǔ)”為主導(dǎo)，也可能成為少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)藥改善造血干細(xì)胞質(zhì)、量的突破口。

［1］劉柏炎，蔡光先。試論中醫(yī)精氣與干細(xì)胞生物學(xué)的關(guān)系。湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，23(6):29.

［2］張進(jìn)，徐志偉，杜少輝，等?！熬睂W(xué)說與干細(xì)胞辨識。中醫(yī)藥學(xué)刊，2004，22(7):1198.

［3］王康鋒，張洪斌，張立娟。中醫(yī)腎精理論與神經(jīng)干細(xì)胞關(guān)系探討。新中醫(yī)，2005，37(12):76.

［4］安紅梅，胡兵。從胚胎干細(xì)胞基本生命活動研究腎為先天之本的思路。中國中醫(yī)藥信息雜志，2006，13(12):89.

［5］蔡光先，劉柏炎。從干細(xì)胞分化研究腎通于腦的策略。湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，24(1):30.

［6］張進(jìn)，徐志偉，陳群，等。Stem cells and congenital essence of the basic theory of traditional Chinesemedicine。中國臨床康復(fù)，2006，10(7):189.

［7］安紅梅，胡兵，史云峰，等。補(bǔ)腎陽中藥對小鼠胚胎干細(xì)胞活動及相關(guān)基因表達(dá)的影響。中華中醫(yī)藥雜志，2008，23(9):774.

［8］胡兵，安紅梅，史云峰，等。補(bǔ)腎陰對胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵基因功能的影響，中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2007，13(5):365.

［9］安紅梅，胡兵，史云峰，等。補(bǔ)腎陰對胚胎干細(xì)胞活動的影響，中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14(6):24.

［10］曾意榮，樊粵光，劉紅，等。補(bǔ)腎活血中藥對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖的影響，中藥新藥與臨床藥理，2007，18(2):93.

［11］周健洪，陳東風(fēng)，黎暉，等。龜板含藥血清對大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞體外增殖的影響，廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2005，22(1):35.

［12］胡黎平，涂平生，謝富康，等。補(bǔ)腎方劑對大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖與分化的影響。中國藥物與臨床，2007，7(5):329.

［13］王和鳴，王力，李楠.巴戟天對骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化影響的實(shí)驗(yàn)研究，福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，14(3):16.

［14］馬慧萍，賈正平，張汝學(xué)，等.淫羊藿總黃酮含藥血清促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖與成骨性分化，中國骨質(zhì)疏松雜志，2004，10(4):420.

［15］張運(yùn)克。從“腎主骨、生髓"的角度探索骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化，中醫(yī)藥學(xué)報，2O07，35(4):1.

［16］陳東風(fēng)，杜少輝，李伊為，等.龜板含藥血清體外誘導(dǎo)成年大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元，廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2003，20(3):224.

［17］高唱，王景周。左歸丸對體外培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響，中國醫(yī)藥學(xué)報，2004，19(11):691.

［18］蔡光先，林琳，劉柏炎，等。地黃多糖誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的效應(yīng)，中國臨床康復(fù)，2005，9(17):46.

［19］王晉源，周淑意，段雪清，等。生血丸對小鼠造血細(xì)胞的影響。西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1986，7(3):292.

［20］俞亞琴，曹克儉，孫偉正，等。補(bǔ)腎生血沖劑對正常小鼠造血干細(xì)胞和粒系祖細(xì)胞的影響。河北中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，6(2):181.

［21］林勝友，沈敏鶴，劉振東，等。STUDY ON RESISTANCE EFFECTSOF GUILU ERXIAN JIAO ON APOPTOSISOF STEM CD(34)+CELLS IN MICE WITH CHEMOTHERAPY中國中醫(yī)藥科技，2008，3:172.

［22］石琳，王祥麒。龜鹿二仙膠加味對慢性再障患者CD34+凋亡的影響，醫(yī)藥論壇雜志，2007，4:74.

［23］俞亞琴，孫偉正。補(bǔ)腎和解復(fù)方對再障患者CD(34)+細(xì)胞造血干/祖細(xì)胞調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究，哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報 (自然科學(xué)版)，2002，1:89.

［24］謝仁敷，麻柔，廖軍鮮，等。中藥對體內(nèi)擴(kuò)散盒小鼠造血干細(xì)胞作用的觀察。中醫(yī)雜志，1981，5，76.

［25］張新華，黃有文，王榮新，等。益髓生血靈對小鼠骨髓造血干/祖細(xì)胞的影響。浙江中醫(yī)雜志，2002，37(10):36.

［26］黃曉芹，賴先榮，降央澤仁，等。藏藥巴桑母酥油丸對放、化復(fù)合損傷“血虛證”小鼠造血功能干預(yù)初探。中藥與臨床，2010;1(2):38.