芍藥苷抗肝纖維化機(jī)制的研究進(jìn)展

秦 斌

廣西壯族自治區(qū)桂林市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西 桂林 541000

芍藥苷 (paeoniflorin，PAE)是主要從毛莨科植物芍藥中提取，是一種易溶于水單萜類糖苷白色無定形粉末化合物，是芍藥的主要單體活性成分，芍藥苷具有抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用［1］。近年來，對于芍藥苷這一中藥提取物的研究近期也開始成為熱點。國內(nèi)外有關(guān)學(xué)者運(yùn)用芍藥苷進(jìn)行了大量抗肝纖維化的研究，效果較為滿意。本文就芍藥苷抗肝纖維化方面的研究作一綜述。

1 肝纖維化形成機(jī)制

肝纖維化是肝組織對慢性損傷的修復(fù)反應(yīng)，是多種類型細(xì)胞、氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子和生長因子等一系列復(fù)雜作用的結(jié)果，以細(xì)胞外基質(zhì) (extracellular matrix，ECM)成分的過度增生與異常沉積為主要特征。肝纖維化是慢性肝病重要的病理特征，也是肝硬化發(fā)生的前奏和必經(jīng)的中間環(huán)節(jié)，是臨床治療慢性肝病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近年來國內(nèi)外取得廣泛共識的是:肝星狀細(xì)胞 (hepatic stellate cell，HSC)是肝臟ECM的主要來源，是肝纖維化形成的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，它在ECM代謝和各種細(xì)胞介質(zhì)的產(chǎn)生過程中處于中心地位，HSC的表型激活和過度增殖是肝纖維化形成過程的關(guān)鍵［2］。

2 芍藥苷抗肝纖維化的機(jī)制

2.1 抗自由基過氧化損傷，促進(jìn)肝細(xì)胞再生

芍藥苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)表明，芍藥苷分子中的多個酚羥基使其具有較強(qiáng)的自由基清除活性、具有生物學(xué)應(yīng)答調(diào)節(jié)作用［3］，對由H2O2誘導(dǎo)DNA單鏈損傷有保護(hù)作用［4］:抗氧化用氧自由基和其他基因產(chǎn)生的增多與很多種類的肝損傷和肝纖維化有關(guān)，其中最重要的是超氧化物。在肝纖維化中，線粒體呼吸鏈的破壞導(dǎo)致電子泄露增加和超氧化物的增多，通過以4n幾何級數(shù)的速度增長，超氧基團(tuán)又可使過氧化氫、羥自由基、單線氧氣等活性氧類產(chǎn)物增加。羥自由基極度活躍，能夠攻擊包括脂類、蛋白質(zhì)、核酸和糖類在內(nèi)的許多細(xì)胞成分。同時肝內(nèi)原有的細(xì)胞保護(hù)機(jī)制 (抗氧化系統(tǒng)、修復(fù)系統(tǒng))遭到破壞，氧化物的產(chǎn)生與消除之間不平衡，因而誘發(fā)肝纖維化的形成與發(fā)展，在體外試驗李文庭反應(yīng)中［5］，芍甘多苷大劑量組肝細(xì)胞和肝細(xì)胞線粒體中MDA含量降低，SOD活性升高 (P＜0.05或0.01)，說明芍甘多苷有較強(qiáng)的抗氧化作用，拮抗自由基對肝臟的損傷。駱和生等［6］體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)芍甘多苷大劑量能顯著提高線粒體Na。K+ATPase、Ca”ATPase活性，減輕線粒體鈣超載和水腫，增強(qiáng)能量代謝、有效減輕自由基對線粒體的損傷，從而對受損的線粒體起到保護(hù)作用。因此，芍藥苷可認(rèn)為是通過清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，阻斷或者減緩肝損傷時的炎癥刺激，達(dá)到抗肝纖維化的作用。

2.2 抑制炎性因子釋放，改善肝臟微循環(huán)

肝細(xì)胞受損后，Kupffer細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞被激活，釋放多種細(xì)胞因子 (腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素一β等)，促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的有絲分裂，使貯脂細(xì)胞及其他細(xì)胞合成膠原纖維增多［7］。因此，消除炎癥，減少細(xì)胞因子的釋放，是抑制膠原合成、抗肝纖維化的重要途徑。Nero E等［8］發(fā)現(xiàn)，腫瘤壞死因子 (TNF)活性的高低與肝細(xì)胞壞死程度的輕重有著正相關(guān)的關(guān)系，且TN單抗 (mAb—TNF)對TNF介導(dǎo)的肝細(xì)胞壞死有保護(hù)作用。提示TNF是造成急性肝壞死的重要介質(zhì)，在肝纖維化產(chǎn)生過程中，白細(xì)胞介素—β(IL—β)、IL—6、IL—8水平升高。Hung KS研究表明［9］，IL—6及IL—8主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生并參與炎性損傷過程。肝臟內(nèi)核因子KB能通過調(diào)控炎性因子和抗炎因子增加和減少來影響反應(yīng)的損傷修復(fù)，Ping J在CCl4聯(lián)合乙醇誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型中［10］，芍甘多苷能顯著抑制肝組織中NF—KBp65/IKBCt的過度表達(dá)，降低血清TNF—d水平?？傊琓NF。在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起重要調(diào)節(jié)作用，它的增加破壞了網(wǎng)絡(luò)平衡，導(dǎo)致免疫功能紊亂，加重肝細(xì)胞壞死。Czaja MJ實驗研究表明［11］，模型組大鼠肝臟TNF－a含量較正常組為高，有顯著性差異，表明TNF a參與介導(dǎo)了CCL4。所致的大鼠亞急性肝損傷。芍甘多苷大劑量能顯著降低 CO1。亞急性肝損傷大鼠肝臟TNF—Q含量，從而對損傷肝臟起到保護(hù)作用。芍甘多苷是一抗炎免疫調(diào)節(jié)藥，在不同的病理狀態(tài)下，芍甘多苷對異常的免疫功能具有雙相調(diào)節(jié)作用。lseri SO研究發(fā)現(xiàn)［12］在化學(xué)性和免疫性肝損傷模型中，芍甘多苷有抗炎作用。

2.3 降低肝臟總NOS、iNOS的活性及NO的含量，阻斷NO對肝臟的損傷作用。NO(一氧化氮)是NO合成酶以左旋精氨酸為底物合成的。體內(nèi)合成NO的酶有兩種即原生酶 (eNOS)和誘生酶 (iNOS)，eNOS合成的NO，主要參與傳遞信息、舒張血管和抑制血小板聚集與粘附的過程，而iNOS合成的N0，主要作為細(xì)胞免疫和細(xì)胞毒性的效應(yīng)分子，在多種感染性及自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。研究表明［13－14］，在免疫刺激條件下iNOS mRNA在肝細(xì)胞的表達(dá)對肝損傷的發(fā)生有重要意義。iNOS及其合成的NO對肝細(xì)胞有損害作用，NO介導(dǎo)了枯否氏細(xì)胞對肝細(xì)胞的毒性，但eNOS可以減輕肝臟損傷。同時，NO可作為NF—K B的激活劑，激活NF—K B。與RObt一樣，還可攻擊caspase中起關(guān)鍵作用的巰基，使其喪失活性，抑制凋亡，但同時可導(dǎo)致細(xì)胞壞死。與模型對照組相比，芍甘多苷大劑量灌胃給藥能顯著降低CCL4亞急性肝損傷大鼠肝臟N0含量 (P＜0.01)，中小劑量有一定的降低作用趨勢 (P＞0.05)，表明芍甘多苷能通過降低肝臟NO含量而起到肝臟保護(hù)作用。

2.4 抑制HSC活化，抑制膠原生成，促進(jìn)病理沉積膠原降解。

在各種因素引起的肝臟損傷中，多種內(nèi)源性細(xì)胞因子參與肝細(xì)胞的凋亡，從而導(dǎo)致肝臟功能的異常，抗肝纖維化治療中誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡是目前研究的熱點。王曉玉等實驗［15］發(fā)現(xiàn)PAE作用24和48 h均可明顯抑制體外培養(yǎng)大鼠HSC分泌HA和PcⅢ，還發(fā)現(xiàn)PAE能顯著降低血清ALT，AST和ALP水平，升高血清ALB水平和A/G值。晏雪生實驗［16］，2m∥mL芍藥苷作用HepG—2細(xì)胞48h后的細(xì)胞凋亡率 (21.67%)顯著高于相應(yīng)無藥對照組 (3.49%)，P＜0.05。肝臟病理組織學(xué)觀察顯示PAE能減輕肝臟炎細(xì)胞浸潤，改善脂肪變性，有利于肝細(xì)胞和肝臟組織結(jié)構(gòu)、形態(tài)恢復(fù)正常。周登余等研究表明PAE能減少大鼠系膜增生性腎小球腎炎時系膜細(xì)胞的增生，使已經(jīng)聚積的ECM部分降解，能一定程度保護(hù)和恢復(fù)大鼠的腎功能。

2.5 基因表達(dá)譜芯片檢測表明，芍甘多苷對肝臟基因表達(dá)的調(diào)控是多靶點的，這些多途徑的靶基因的改變可能是芍甘多苷肝臟保護(hù)作用的分子生物學(xué)機(jī)理，具體表現(xiàn)在［17－20］:①上調(diào)與能量代謝有關(guān)的基因表達(dá);②上調(diào)與轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞分裂和增殖有關(guān)的蛋白和酶的基因表達(dá)，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞分裂和增殖;③下調(diào)與促進(jìn)細(xì)胞凋亡有關(guān)的基因表達(dá)，抑制細(xì)胞調(diào)亡;④下調(diào)部分能促進(jìn)肝纖維化的基因表達(dá)，減輕肝纖維化;⑤上調(diào)與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)的基因表達(dá)，保護(hù)肝細(xì)胞;⑥調(diào)節(jié)與肝臟代謝酶有關(guān)的基因表達(dá);⑦調(diào)節(jié)與免疫和炎癥反應(yīng)有關(guān)的基因表達(dá)，降低白細(xì)胞介素等細(xì)胞因子，降低細(xì)胞免疫和體液免疫，減少炎癥介質(zhì)及受體的產(chǎn)生:⑧上調(diào)與抗自由基損傷有關(guān)的基因表達(dá);⑨上調(diào)與轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的基因表達(dá)。

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